基于HIF1α/VEGF信号通路研究天冬多糖抑制肝癌细胞迁移、侵袭和血管形成的机制
发布时间：2023-02-09 08:47
目的:研究缺氧诱导因子1α(HIF1α)mRNA在肝癌组织和癌旁组织或正常肝组织中的表达差异,及其与肝癌患者生存预后和临床病理特征的相关性,进一步明确HIF1α在人肝癌细胞SK-Hep1和Hep-3B中的功能。其后体外实验研究天冬多糖常氧和缺氧下对人肝癌细胞SK-Hep1和Hep-3B增殖,迁移,侵袭和血管形成的影响,并进一步探讨天冬多糖体外常氧和缺氧下对HIF1α/VEGF信号通路相关蛋白表达的影响。最后体内实验验证天冬多糖对裸鼠皮下肝癌细胞移植瘤生长及HIF1α/VEGF信号通路相关蛋白表达的影响。方法:利用Oncomine和GSE14520数据库分析人肝癌组织和癌旁组织或正常人肝组织中HIF1αmRNA表达差异。并用The Human Protein Atlas数据库免疫组化和12对人肝癌组织和癌旁组织免疫印迹进一步验证。通过GSE14520数据库分析HIF1αmRNA不同表达对肝癌患者总生存期(OS)和无复发生存期(RFS)的影响,及其与临床病理特征的相关性。构建HIF1α过表达和RNA干扰慢病毒肝癌细胞稳转株研究HIF1α对人肝癌细胞(SK-Hep1和Hep-3B)增殖、迁移...
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
英文缩略语
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 HIF1α mRNA高表达与肝癌患者临床预后相关性的研究分析
1 材料
1.1 肝癌患者癌组织和癌旁组织收集
1.2 细胞株
1.3 主要试剂和耗材
1.4 实验主要仪器
1.5 主要试剂配制
2 方法
2.1 数据库数据分析
2.2 细胞培养
2.3 人肝癌细胞病毒感染
2.4 QRT-PCR实验
2.5 免疫印迹实验
2.6 CCK-8实验
2.7 创伤愈合实验
2.8 Transwell基质胶侵袭实验
2.9 HUVEC基质胶血管形成实验
2.10 统计学分析
3 结果
3.1 肝癌组织中HIF1α表达明显上调
3.2 HIF1αmRNA表达水平与肝癌患者临床病理特征的相关性
3.3 HIF1αmRNA过表达对肝癌患者生存预后的影响
3.4 HIF1α过表达和RNA干扰慢病毒稳转人肝癌细胞株的构建
3.5 HIF1α过表达促进了人肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管形成
3.6 HIF1αRNA干扰抑制了人肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管形成
4 分析与讨论
第二部分 体外天冬多糖通过HIF1α/VEGF信号通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭和血管形成
1 材料
1.1 细胞株
1.2 主要试剂和耗材
1.3 实验主要仪器
2 实验方法
2.1 天冬多糖储备液的配置
2.2 细胞培养
2.3 CCK-8实验
2.4 创伤愈合实验
2.5 Transwell基质胶侵袭实验
2.6 HUVEC基质胶血管形成实验
2.7 ELISA实验
2.8 QRT-PCR实验
2.9 免疫印迹实验
2.10 免疫荧光实验
2.11 统计方法
3 结果
3.1 天冬多糖抑制人肝癌细胞的增殖
3.2 天冬多糖抑制人肝癌细胞的迁移和侵袭
3.3 天冬多糖抑制人肝癌细胞诱导的HUVEC细胞血管形成
3.4 天冬多糖抑制人肝癌细胞HIF1α和 VEGF的表达
3.5 天冬多糖调节MAPK和 PI3K信号通路抑制人肝癌细胞HIF1α表达
4 分析与讨论
第三部分 体外缺氧下天冬多糖通过HIF1α/VEGF信号通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭和血管形成
1 材料
1.1 细胞株
1.2 主要试剂和耗材
1.3 实验主要仪器
1.4 部分试剂的配制
2 方法
2.1 天冬多糖储备液的配置
2.2 细胞培养
2.3 CCK-8实验
2.4 Transwell迁移实验
2.5 Transwell基质胶侵袭实验
2.6 HUVEC细胞基质胶血管形成实验
2.7 ELISA实验
2.8 免疫印迹实验
2.9 免疫荧光实验
2.10 统计方法
3 结果
3.1 天冬多糖常氧和缺氧条件下可明显地抑制人肝癌细胞的增殖
3.2 天冬多糖缺氧条件下可明显地抑制人肝癌细胞的迁移
3.3 冬多糖缺氧条件下可明显地抑制人肝癌细胞的侵袭
3.4 天冬多糖缺氧条件下可明显地抑制人肝癌细胞诱导的HUVEC细胞血管形成
3.5 天冬多糖缺氧条件下可明显地抑制人肝癌细胞HIF1α和 VEGF蛋白的表达
3.6 天冬多糖缺氧条件下通过调节MAPK和 PI3K信号通路抑制人肝癌细胞HIF1α蛋白的表达
4 分析与讨论
第四部分 体内实验研究天冬多糖通过HIF1α/VEGF信号通路抑制肝癌血管形成的机制
1 材料
1.1 细胞株
1.2 动物及饲料
1.3 主要试剂及耗材
1.4 实验主要仪器
1.5 部分试剂的配制
2 方法
2.1 天冬多糖储备液的配置
2.2 细胞培养
2.3 裸鼠皮下成瘤实验的实施
2.4 裸鼠肿瘤组织的病理检测
2.5 免疫印迹检测
2.6 统计学处理
3 结果
3.1 天冬多糖抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤的生长
3.2 天冬多糖抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤血管生成
3.3 天冬多糖通过抑制MAPK和 PI3K信号通路抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤的血管形成
4 分析与讨论
4.1 目前国内外肝癌临床抗血管生成治疗研究现状
4.2 目前国内外中医药抑制肿瘤血管生成体内实验研究现状
4.3 天冬多糖通过HIF1α/VEGF信号通路抗血管生成抑制荷肝癌小鼠肿瘤生长
创新点
结论
致谢
参考文献
附录
附录1 已发表综述全文 中药多糖调节肿瘤免疫应答研究进展
参考文献
附录2 在校期间第一作者发表或投稿论文
附录3 在读期间科研工作情况
本文编号：3738588
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
英文缩略语
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 HIF1α mRNA高表达与肝癌患者临床预后相关性的研究分析
1 材料
1.1 肝癌患者癌组织和癌旁组织收集
1.2 细胞株
1.3 主要试剂和耗材
1.4 实验主要仪器
1.5 主要试剂配制
2 方法
2.1 数据库数据分析
2.2 细胞培养
2.3 人肝癌细胞病毒感染
2.4 QRT-PCR实验
2.5 免疫印迹实验
2.6 CCK-8实验
2.7 创伤愈合实验
2.8 Transwell基质胶侵袭实验
2.9 HUVEC基质胶血管形成实验
2.10 统计学分析
3 结果
3.1 肝癌组织中HIF1α表达明显上调
3.2 HIF1αmRNA表达水平与肝癌患者临床病理特征的相关性
3.3 HIF1αmRNA过表达对肝癌患者生存预后的影响
3.4 HIF1α过表达和RNA干扰慢病毒稳转人肝癌细胞株的构建
3.5 HIF1α过表达促进了人肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管形成
3.6 HIF1αRNA干扰抑制了人肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管形成
4 分析与讨论
第二部分 体外天冬多糖通过HIF1α/VEGF信号通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭和血管形成
1 材料
1.1 细胞株
1.2 主要试剂和耗材
1.3 实验主要仪器
2 实验方法
2.1 天冬多糖储备液的配置
2.2 细胞培养
2.3 CCK-8实验
2.4 创伤愈合实验
2.5 Transwell基质胶侵袭实验
2.6 HUVEC基质胶血管形成实验
2.7 ELISA实验
2.8 QRT-PCR实验
2.9 免疫印迹实验
2.10 免疫荧光实验
2.11 统计方法
3 结果
3.1 天冬多糖抑制人肝癌细胞的增殖
3.2 天冬多糖抑制人肝癌细胞的迁移和侵袭
3.3 天冬多糖抑制人肝癌细胞诱导的HUVEC细胞血管形成
3.4 天冬多糖抑制人肝癌细胞HIF1α和 VEGF的表达
3.5 天冬多糖调节MAPK和 PI3K信号通路抑制人肝癌细胞HIF1α表达
4 分析与讨论
第三部分 体外缺氧下天冬多糖通过HIF1α/VEGF信号通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭和血管形成
1 材料
1.1 细胞株
1.2 主要试剂和耗材
1.3 实验主要仪器
1.4 部分试剂的配制
2 方法
2.1 天冬多糖储备液的配置
2.2 细胞培养
2.3 CCK-8实验
2.4 Transwell迁移实验
2.5 Transwell基质胶侵袭实验
2.6 HUVEC细胞基质胶血管形成实验
2.7 ELISA实验
2.8 免疫印迹实验
2.9 免疫荧光实验
2.10 统计方法
3 结果
3.1 天冬多糖常氧和缺氧条件下可明显地抑制人肝癌细胞的增殖
3.2 天冬多糖缺氧条件下可明显地抑制人肝癌细胞的迁移
3.3 冬多糖缺氧条件下可明显地抑制人肝癌细胞的侵袭
3.4 天冬多糖缺氧条件下可明显地抑制人肝癌细胞诱导的HUVEC细胞血管形成
3.5 天冬多糖缺氧条件下可明显地抑制人肝癌细胞HIF1α和 VEGF蛋白的表达
3.6 天冬多糖缺氧条件下通过调节MAPK和 PI3K信号通路抑制人肝癌细胞HIF1α蛋白的表达
4 分析与讨论
第四部分 体内实验研究天冬多糖通过HIF1α/VEGF信号通路抑制肝癌血管形成的机制
1 材料
1.1 细胞株
1.2 动物及饲料
1.3 主要试剂及耗材
1.4 实验主要仪器
1.5 部分试剂的配制
2 方法
2.1 天冬多糖储备液的配置
2.2 细胞培养
2.3 裸鼠皮下成瘤实验的实施
2.4 裸鼠肿瘤组织的病理检测
2.5 免疫印迹检测
2.6 统计学处理
3 结果
3.1 天冬多糖抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤的生长
3.2 天冬多糖抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤血管生成
3.3 天冬多糖通过抑制MAPK和 PI3K信号通路抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤的血管形成
4 分析与讨论
4.1 目前国内外肝癌临床抗血管生成治疗研究现状
4.2 目前国内外中医药抑制肿瘤血管生成体内实验研究现状
4.3 天冬多糖通过HIF1α/VEGF信号通路抗血管生成抑制荷肝癌小鼠肿瘤生长
创新点
结论
致谢
参考文献
附录
附录1 已发表综述全文 中药多糖调节肿瘤免疫应答研究进展
参考文献
附录2 在校期间第一作者发表或投稿论文
附录3 在读期间科研工作情况
本文编号：3738588
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3738588.html
教材专著
