MiR-4295和lncRNA HOTAIR在胃癌中的表达及其功能研究

发布时间：2023-03-24 19:30

　　背景与目的:胃癌(gastric cancer,GC)是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤,位于全球第三大癌症死亡原因。胃癌具有发病隐匿和早期症状不明显等特点,多数患者首诊时疾病已进入进展期,且伴有淋巴结或远处器官的转移,这已成为胃癌防治的难点。因此,通过各种研究技术和手段深入研究胃癌发生、发展、转移以及耐药的分子机制,寻找早期诊断的分子标志物以及药物靶标已迫在眉睫。最近的研究表明,非编码RNAs参与了肿瘤转移和恶性转化的过程。MiR-4295是一个新发现的微小RNA(microRNA)分子,通过生物信息学分析,我们发现miR-4295与lncRNA HOTAIR存在结合位点。因此,我们的研究就从非编码RNAs入手,研究微小RNA(miR-4295)和长链非编码RNA(lncRNA HOTAIR)在胃癌生长增殖和侵袭迁移中的功能及其机制。第一部分miR-4295通过PTEN/PI3K/AKT通路调控胃癌生长和侵袭迁移的研究方法:本研究采用qRT-PCR检测胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803、BGC-823、MKN-28和人胃粘膜上皮细胞系GES-1中及胃癌组织中miR-4295的表...

【文章页数】：197 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
缩略词简表
前言
第一部分 miR-4295 通过PTEN/PI3K/AKT通路调控胃癌生长和侵袭迁移的研究
    第1章 miR-4295在胃癌细胞系和组织中的表达
        1.1 引言
        1.2 材料与方法
            1.2.1 材料
            1.2.2 方法
        1.3 结果
            1.3.1 细胞总RNA的提取、质量和完整性鉴定
            1.3.2 胃癌细胞中miR-4295表达水平检测
            1.3.3 胃癌组织中miR-4295表达水平检测
            1.3.4 miR-4295与胃癌临床病理特征相关性
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第2章 miR-4295对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响
        2.1 引言
        2.2 材料与方法
            2.2.1 材料
            2.2.2 方法
        2.3 结果
            2.3.1 miR-4295阳性克隆的测序结果
            2.3.2 qRT-PCR检测转染胃癌细胞中miR-4295的表达水平
            2.3.3 miR-4295表达水平改变对胃癌细胞增殖活力、生长能力的影响
            2.3.4 划痕及Transwell实验检测miR-4295 及其inhibitor对胃癌细胞迁移的影响
            2.3.5 Transwell实验检测miR-4295 及其inhibitor对胃癌细胞侵袭的影响
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第3章 miR-4295的潜在靶基因筛选
        3.1 引言
        3.2 材料与方法
            3.2.1 材料
            3.2.2 方法
        3.3 结果
            3.3.1 miR-4295潜在靶基因的功能通路和蛋白分子互作(PPI)网络关系
            3.3.2 通过TCGA数据库GEPIA分析miR-4295 靶向hubgene在胃癌中的相关性分析
            3.3.3 通过TCGA数据库GEPIA分析miR-4295 靶向hubgene与胃癌患者的生存分析
        3.4 讨论
        3.5 小结
    第4章 miR-4295促进胃癌细胞增殖和侵袭转移的分子机制
        4.1 引言
        4.2 材料与方法
            4.2.1 材料
            4.2.2 方法
        4.3 结果
            4.3.1 双荧光素酶报告系统验证miR-4295 分别与PTEN及BCL2L11基因的靶向调控关系
            4.3.2 q RT-PCR检测靶基因m RNA及其下游基因m RNA表达水平的影响
            4.3.3 miR-4295对PTEN蛋白及其下游蛋白表达水平的影响
            4.3.4 miR-4295 联合AKT抑制剂对胃癌细胞增殖的影响
            4.3.5 miR-4295 联合AKT抑制剂对胃癌细胞凋亡的影响
            4.3.6 miR-4295 联合AKT抑制剂对胃癌细胞迁移的影响
            4.3.7 miR-4295 联合AKT抑制剂对胃癌细胞侵袭的影响
        4.4 讨论
        4.5 小结
第二部分 lncRNA HOTAIR在胃癌中的表达及其功能研究
    第1章 lncRNA HOTAIR在胃癌细胞系和组织中的表达
        1.1 引言
        1.2 材料与方法
            1.2.1 材料
            1.2.2 方法
        1.3 结果
            1.3.1 细胞总RNA提取、质量及完整性鉴定
            1.3.2 胃癌细胞中HOTAIR表达水平检测
            1.3.3 HOTAIR在 TCGA数据库胃癌组织中表达情况
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第2章 lncRNA HOTAIR对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响
        2.1 引言
        2.2 材料与方法
            2.2.1 材料
            2.2.2 方法
        2.3 结果
            2.3.1 qRT-PCR检测转染胃癌细胞中HOTAIR的表达水平
            2.3.2 下调HOTAIR对胃癌细胞增殖活力、生长能力的影响
            2.3.3 划痕及Transwell实验检测HOTAIR对胃癌细胞迁移的影响
            2.3.4 Transwell实验检测HOTAIR对胃癌细胞侵袭的影响
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第3章 miR-4295与lncRNA HOTAIR相关性分析
        3.1 引言
        3.2 材料与方法
            3.2.1 材料
            3.2.2 方法
        3.3 结果
            3.3.1 双荧光素酶报告系统验证miR-4295与HOTAIR的结合情况
        3.4 讨论
        3.5 小结
全文总结
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间主要的研究成果
基金资助
致谢



本文编号：3769716