Th17/Treg失衡及其与中性粒细胞相互影响在ARDS发病中的作用和机制研究
发布时间：2023-04-22 14:53
目的：急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是一种导致危重症患者高病死率和致残率的急性呼吸衰竭。虽经大量基础和临床研究,ARDS的发病机制仍不明了,但无疑免疫炎症细胞及其相关炎性介质影响着ARDS的进展及其预后。中性粒细胞(PMN)在肺部积聚、凋亡延迟以及凋亡后未被及时清除而引起的瀑式炎症反应,被认为是引发ARDS的重要机制。但近年来,淋巴细胞,特别是CD46T细胞在ARDS发病中的作用尤为引人关注。新近发现的促炎性CD4+T细胞亚群,Th17细胞和抑炎性的Treg细胞间的平衡在众多免疫炎症性疾患中发挥着重要作用。而活化的PMN分泌大量炎症因子,是调节Th17、Treg细胞分化的潜在新来源,反过来Th17、Treg细胞又可以影响PMN在炎症部位的积聚、凋亡及其功能改变。本研究首先观测Th17、Treg细胞及其相关因子的变化,探讨Th17/Treg失衡与ARDS患者肺损伤程度及临床结局的关联,明确Th17/Treg失衡在ARDS发病中的临床意义；然后通过体外细胞实验观察PMN对Th17/Treg平衡的影响,以及Th17、Treg细胞对PMN趋化、凋亡等功能的改变,探讨PMN和Th17/Treg平...
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
第一章 绪论
1.1 急性呼吸窘迫综合征概述
1.2 ARDS与免疫炎症反应
1.3 中性粒细胞与ARDS
1.4 中性粒细胞与Treg细胞
1.5 中性粒细胞与Th17细胞
1.6 ARDS与Th17/Treg平衡
1.7 本研究的目的、内容和技术路线
1.7.1 研究目的
1.7.2 研究内容
1.7.3 技术路线
第二章 ARDS患者外周血Th17/Treg细胞失衡及其临床意义
2.1 材料与方法
2.1.1 研究对象和方案
2.1.2 主要抗体和试剂
2.1.3 主要仪器
2.1.4 数据收集和结局定义
2.1.5 外周血标本收集和检测
2.1.6 ELISA检测外周血细胞因子
2.1.7 人外周血单个核细胞(PBMC)分离
2.1.8 流式检测外周血Th17、Treg细胞
2.1.9 统计学分析
2.2 结果
2.2.1 ARDS患者临床特征以及结局
2.2.2 ARDS患者外周血炎症指标、Th17、Treg细胞及其相关细胞因子的变化
2.2.3 ARDS患者外周血Th17/Treg比值与疾病严重程度和临床结局的相关性
2.2.4 ARDS患者28d病死率的预测因素
2.3 讨论
2.4 本研究的局限性
2.5 结论
第三章 ARDS患者中性粒细胞对Th17/Treg细胞平衡的影响
3.1 材料与方法
3.1.1 研究对象和方案
3.1.2 主要研究抗体和试剂
3.1.3 主要研究仪器
3.1.4 外周血标本收集和检测
3.1.5 ELISA检测外周血、培养细胞上清液中以及PMN细胞内的细胞因子
3.1.6 人外周血单个核细胞(PBMCs)分离
3.1.7 免疫磁珠(MACS)法分离CD4+T细胞
3.1.8 免疫磁珠(MACS)法分离Th17细胞
3.1.9 免疫磁珠(MACS)法分离PMN细胞
3.1.10 体外细胞培养实验
3.1.11 流式细胞仪检测免疫磁珠法分离所得细胞的纯度
3.1.12 流式检测Th17细胞表面CCR2、CCR6受体的表达
3.1.13 流式检测PMN细胞表面MHCⅡ、共刺激分子CD80/CD86的表达
3.1.14 流式检测体外细胞培养体系中Th17、Treg细胞的表达
3.1.15 Western Blot检测PMN细胞表达MHCⅡ类分子
3.1.16 RT-PCR法检验Foxp3 mRNA、RoR-mRNA的表达
3.1.17 体外细胞趋化实验
3.1.18 统计学分析
3.2 结果
3.2.1 ARDS患者外周血PMN与Th17细胞和Treg细胞的相关性
3.2.2 免疫磁珠法获取外周血初始CD4+T细胞、PMN及Th17细胞
3.2.3 外周血PMN对初始CD4+T细胞极化方向的影响
3.2.4 PMN促进Th17细胞分化的机制
3.2.5 PMN对Th17细胞趋化的影响
3.3 讨论
3.4 结论
第四章 ARDS患者Th17、Treg细胞对中性粒细胞趋化、活性及凋亡的影响
4.1 材料与方法
4.1.1 研究对象和方案
4.1.2 主要研究抗体和试剂
4.1.3 主要研究仪器
4.1.4 外周血标本收集和检测
4.1.5 ELISA法检测Th17、Treg细胞内的细胞因子
4.1.6 人外周血单个核细胞(PBMCs)分离
4.1.7 免疫磁珠(MACS)法分离、纯化Th17细胞
4.1.8 免疫磁珠(MACS)法分离、纯化PMN细胞
4.1.9 免疫磁珠(MACS)法分离、纯化Treg细胞
4.1.10 体外细胞培养实验
4.1.11 流式细胞仪检测免疫磁珠法分离所得细胞的纯度
4.1.12 流式细胞仪检测PMN细胞表面CD11b的表达
4.1.13 流式细胞仪检测PMN细胞的凋亡
4.1.14 体外细胞趋化实验
4.1.15 统计学分析
4.2 结果
4.2.1 免疫磁珠法获取外周血PMN、Th17和Treg细胞
4.2.2 Th17、Treg细胞对PMN趋化的影响
4.2.3 Th17、Treg细胞对PMN活性的影响
4.2.4 Th17、Treg细胞对PMN凋亡的影响
4.3 讨论
4.4 结论
第五章 主要结论、学术创新与下一步研究设想
5.1 主要结论
5.2 创新性
5.3 下一步研究设想
参考文献
致谢
攻读博士学位期间发表的论文及其他科研成果
本文编号：3797859
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
第一章 绪论
1.1 急性呼吸窘迫综合征概述
1.2 ARDS与免疫炎症反应
1.3 中性粒细胞与ARDS
1.4 中性粒细胞与Treg细胞
1.5 中性粒细胞与Th17细胞
1.6 ARDS与Th17/Treg平衡
1.7 本研究的目的、内容和技术路线
1.7.1 研究目的
1.7.2 研究内容
1.7.3 技术路线
第二章 ARDS患者外周血Th17/Treg细胞失衡及其临床意义
2.1 材料与方法
2.1.1 研究对象和方案
2.1.2 主要抗体和试剂
2.1.3 主要仪器
2.1.4 数据收集和结局定义
2.1.5 外周血标本收集和检测
2.1.6 ELISA检测外周血细胞因子
2.1.7 人外周血单个核细胞(PBMC)分离
2.1.8 流式检测外周血Th17、Treg细胞
2.1.9 统计学分析
2.2 结果
2.2.1 ARDS患者临床特征以及结局
2.2.2 ARDS患者外周血炎症指标、Th17、Treg细胞及其相关细胞因子的变化
2.2.3 ARDS患者外周血Th17/Treg比值与疾病严重程度和临床结局的相关性
2.2.4 ARDS患者28d病死率的预测因素
2.3 讨论
2.4 本研究的局限性
2.5 结论
第三章 ARDS患者中性粒细胞对Th17/Treg细胞平衡的影响
3.1 材料与方法
3.1.1 研究对象和方案
3.1.2 主要研究抗体和试剂
3.1.3 主要研究仪器
3.1.4 外周血标本收集和检测
3.1.5 ELISA检测外周血、培养细胞上清液中以及PMN细胞内的细胞因子
3.1.6 人外周血单个核细胞(PBMCs)分离
3.1.7 免疫磁珠(MACS)法分离CD4+T细胞
3.1.8 免疫磁珠(MACS)法分离Th17细胞
3.1.9 免疫磁珠(MACS)法分离PMN细胞
3.1.10 体外细胞培养实验
3.1.11 流式细胞仪检测免疫磁珠法分离所得细胞的纯度
3.1.12 流式检测Th17细胞表面CCR2、CCR6受体的表达
3.1.13 流式检测PMN细胞表面MHCⅡ、共刺激分子CD80/CD86的表达
3.1.14 流式检测体外细胞培养体系中Th17、Treg细胞的表达
3.1.15 Western Blot检测PMN细胞表达MHCⅡ类分子
3.1.16 RT-PCR法检验Foxp3 mRNA、RoR-mRNA的表达
3.1.17 体外细胞趋化实验
3.1.18 统计学分析
3.2 结果
3.2.1 ARDS患者外周血PMN与Th17细胞和Treg细胞的相关性
3.2.2 免疫磁珠法获取外周血初始CD4+T细胞、PMN及Th17细胞
3.2.3 外周血PMN对初始CD4+T细胞极化方向的影响
3.2.4 PMN促进Th17细胞分化的机制
3.2.5 PMN对Th17细胞趋化的影响
3.3 讨论
3.4 结论
第四章 ARDS患者Th17、Treg细胞对中性粒细胞趋化、活性及凋亡的影响
4.1 材料与方法
4.1.1 研究对象和方案
4.1.2 主要研究抗体和试剂
4.1.3 主要研究仪器
4.1.4 外周血标本收集和检测
4.1.5 ELISA法检测Th17、Treg细胞内的细胞因子
4.1.6 人外周血单个核细胞(PBMCs)分离
4.1.7 免疫磁珠(MACS)法分离、纯化Th17细胞
4.1.8 免疫磁珠(MACS)法分离、纯化PMN细胞
4.1.9 免疫磁珠(MACS)法分离、纯化Treg细胞
4.1.10 体外细胞培养实验
4.1.11 流式细胞仪检测免疫磁珠法分离所得细胞的纯度
4.1.12 流式细胞仪检测PMN细胞表面CD11b的表达
4.1.13 流式细胞仪检测PMN细胞的凋亡
4.1.14 体外细胞趋化实验
4.1.15 统计学分析
4.2 结果
4.2.1 免疫磁珠法获取外周血PMN、Th17和Treg细胞
4.2.2 Th17、Treg细胞对PMN趋化的影响
4.2.3 Th17、Treg细胞对PMN活性的影响
4.2.4 Th17、Treg细胞对PMN凋亡的影响
4.3 讨论
4.4 结论
第五章 主要结论、学术创新与下一步研究设想
5.1 主要结论
5.2 创新性
5.3 下一步研究设想
参考文献
致谢
攻读博士学位期间发表的论文及其他科研成果
本文编号：3797859
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3797859.html
