ALOX12B在宫颈癌肿瘤进展中的作用和机制研究

发布时间：2023-04-22 23:07

　　目的:宫颈癌是一种恶性疾病,对全世界妇女的健康是一个巨大的威胁。手术切除及同步放化疗是治疗宫颈癌的主要策略。部分晚期肿瘤患者无法从传统治疗中获益,导致临床疗效欠佳。ALOX12B是一个编码脂氧合酶的基因,在肺癌和乳腺癌中检测到ALOX12B突变。此外,ALOX12B对表皮样癌细胞的增殖具有促进作用。然而,其在宫颈癌中的作用目前未见报道,因此有必要研究ALOX12B在宫颈癌中的作用及相关机制。方法:为研究ALOX12B在宫颈癌进展中的功能,通过慢病毒载体降低宫颈癌细胞系Ca-Ski和C33A中ALOX12B的表达,并通过q-PCR检测病毒对ALOX12B的敲低效率。设计CCK-8和克隆形成实验验证ALOX12B敲低后对宫颈癌细胞增殖和克隆形成能力的影响。PI实验检测ALOX12B敲低后对宫颈癌细胞周期的影响。Transwell和划痕愈合实验检测ALOX12B对肿瘤细胞的迁移和侵袭的影响。此外,设计异种移植瘤模型验证ALOX12B在体内对宫颈癌进展的影响。为进一步阐明ALOX12B在宫颈癌发展中的作用机制,通过文献调研以及数据库分析预测ALOX12B的靶点。Western blot检测AL...

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

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摘要
abstract
中英文缩略词
第一章 引言
    1.1 宫颈癌
    1.2 宫颈癌的分子机制
        1.2.1 HPV与宫颈癌
        1.2.2 HPV阴性宫颈癌
    1.3 宫颈癌增殖、侵袭和迁移
        1.3.1 宫颈癌增殖与细胞周期
        1.3.2 宫颈癌迁移、侵袭和EMT
    1.4 ALOX12B
        1.4.1 ALOX12B的生物学功能
        1.4.2 ALOX12B与肿瘤
    1.5 实验设计和研究意义
第二章 ALOX12B加速宫颈癌细胞的增殖并促进肿瘤的生长
    2.1 引言
    2.2 实验仪器
    2.3 实验材料
        2.3.1 实验试剂
        2.3.2 实验抗体
    2.4 溶液配制
        2.4.1 细胞培养液的配制
        2.4.2 细胞裂解液
        2.4.3 配制蛋白电泳溶液
    2.5 实验方法
        2.5.1 细胞培养
        2.5.2 慢病毒转染
        2.5.3 实时荧光定量PCR(q-PCR)
        2.5.4 细胞增殖实验
        2.5.5 克隆形成实验
        2.5.6 划痕愈合实验
        2.5.7 PI染色实验(检测细胞周期)
        2.5.8 蛋白免疫印迹染色(Western Blot)
        2.5.9 Transwell迁移侵袭实验
        2.5.10 荷瘤小鼠模型
        2.5.11 质粒转染
        2.5.12 统计分析
    2.6 实验结果
        2.6.1 靶向ALOX12B的shRNA慢病毒载体的构建和验证
        2.6.2 ALOX12B在宫颈癌细胞C33A中有效表达
        2.6.3 ALOX12B基因敲低抑制宫颈癌细胞增殖和克隆形成
        2.6.4 体外ALOX12B对宫颈癌细胞迁移和侵袭不是必需的
        2.6.5 ALOX12B基因敲低抑制宫颈癌细胞周期转换
        2.6.6 ALOX12B基因敲低对抑制异种移植小鼠肿瘤生长
        2.6.7 ALOX12B调控宫颈癌PI3K/ERK1 信号通路
    2.7 讨论
第三章 ALOX12B调控宫颈癌PTGS2及EMT的机制研究
    3.1 引言
    3.2 实验仪器
    3.3 实验材料
        3.3.1 实验试剂
        3.3.2 实验抗体
    3.4 溶液配制
        3.4.1 细胞培养液的配制
        3.4.2 细胞裂解液
        3.4.3 配制蛋白电泳溶液
    3.5 实验方法
        3.5.1 细胞培养
        3.5.2 慢病毒转染
        3.5.3 细胞增殖实验
        3.5.4 蛋白免疫印迹染色(Western Blot)
        3.5.5 统计分析
    3.6 实验结果
        3.6.1 ALOX12B调控宫颈癌中PTGS2表达
        3.6.2 ALOX12B通过PTGS2调控宫颈癌发展
        3.6.3 体内抑制ALOX12B抑制宫颈癌EMT相关信号通路
    3.7 讨论
参考文献
致谢
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3798583