修饰多发性硬化病程药物机制探索—醋酸格拉默

发布时间：2017-05-21 16:08

  本文关键词：修饰多发性硬化病程药物机制探索—醋酸格拉默，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的:醋酸格拉默(Glatiramer acetate,GA)是一种具有免疫调节作用的药物,它已经被批准用于多发性硬化症(中枢神经系统脱髓鞘疾病)的一线治疗。但是,醋酸格拉默在治疗多发性硬化症中的免疫调节机制仍不完全清楚。虽然改善对髓鞘抗原,如中枢髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)的免疫反应可能是它的免疫调节机制,但是醋酸格拉默的免疫调节机制是否是抗原非特异性的仍不清楚。在本实验中,我们应用与中枢抗原MBP不同的周围神经抗原P0,诱导人类吉兰巴雷综合征的动物模型-实验性自身免疫性神经炎(Experimental autoimmune neuritis,EAN)作为工具,探索醋酸格拉默的免疫调节作用是否具有抗原非特异性。研究内容和方法:通过周围神经髓鞘抗原P0(Protein 0)免疫lewis大鼠的方法诱导实验性自身免疫性神经炎,在lewis鼠造模前和发病后分别皮下注射醋酸格拉默,观察动物的临床评分和体重变化。同时在发病高峰期即造模后第16天,通过肌电图评估坐骨神经髓鞘和轴索损伤;通过HE染色和Luxol Fast Blue病理染色观察髓鞘变化;通过酶联免疫法检测多种炎性细胞因子变化。体外实验通过H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法检测醋酸格拉默对不同抗原P0、MBP、LPS(Lipopolysaccharide)刺激的T细胞增殖。实验结果:免疫前或者免疫后10天皮下注射醋酸格拉默均减轻了该疾病的临床评分,同时醋酸格拉默治疗组大鼠的体重明显较对照组增加,具有显著的统计学差异。肌电图研究表明,治疗组坐骨神经远端运动潜伏期明显降低,运动传导速度明显增加,波幅明显增高,表明醋酸格拉默减轻了髓鞘和轴索损伤。神经病理HE和Luxol Fast Blue染色证实了免疫前注射醋酸格拉默减轻了P0诱导的EAN坐骨神经脱髓鞘。ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)结果表明在治疗组,炎性因子如Interferon-gama(INF-γ),IL-6,IL-12,,IL-17明显降低,IL-10明显升高,均具有统计学意义,进一步验证了醋酸格拉默对周围神经脱髓鞘疾病具有抑制炎症的作用。我们的体外实验通过H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法进一步证实了醋酸格拉默对周围神经抗原P0、中枢神经抗原MBP、非特异性抗原刺激的T细胞增殖均有抑制作用,治疗组和对照组有显著的统计学差异。结论:醋酸格拉默减轻了实验性自身免疫性神经炎造成的神经功能缺损,证明了该药物免疫调节机制不是中枢神经抗原特异性的。
【关键词】：实验性自身免疫性神经炎 实验性自身免疫性脊髓炎 醋酸格拉默 吉兰巴雷综合征 多发性硬化
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R744.51
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-16
• 研究现状、成果12-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、对象和方法16-37
• 1.1 实验动物和EAN模型诱导16-19
• 1.1.1 实验动物的选择及分组16
• 1.1.2 EAN模型诱导16-17
• 1.1.3 免疫抗原及佐剂17
• 1.1.4 抗原乳化及免疫方法17-18
• 1.1.5 EAN大鼠的评估及监护18
• 1.1.6 注意事项18-19
• 1.2 醋酸格拉默应用和实验分组19-20
• 1.2.1 醋酸格拉默的应用剂量、频率和方式19
• 1.2.2 醋酸格拉默注射部位及步骤19-20
• 1.2.3 醋酸格拉默注射中的注意事项：20
• 1.3 坐骨神经的电生理研究20-21
• 1.3.1 电生理的检测指标及方法20
• 1.3.2 电生理检测步骤20-21
• 1.3.3 注意事项21
• 1.4 病理组织的准备和组织学染色21-30
• 1.4.1 坐骨神经标本的固定方法及目的22
• 1.4.2 坐骨神经石蜡包埋步骤22-23
• 1.4.3 石蜡标本切片步骤23-24
• 1.4.4 石蜡标本展片步骤24
• 1.4.5 石蜡标本烤片步骤24-25
• 1.4.6 冰冻切片的制作流程25-27
• 1.4.7 H&E染色步骤27
• 1.4.8 Luxol快蓝染色步骤27-28
• 1.4.9 实验试剂的配制方法28-29
• 1.4.10注意事项29-30
• 1.5 淋巴细胞增殖实验30-33
• 1.5.1 大鼠脾脏标本的收集及单核细胞的提取步骤30-32
• 1.5.2 淋巴细胞增殖实验步骤32-33
• 1.5.3 3H-甲基胸腺嘧啶法渗入法实验原理33
• 1.5.4 实验用试剂配方33
• 1.6 血清细胞因子检测33-37
• 1.6.1 提取大鼠的外周血标本步骤及方法33-35
• 1.6.2 细胞因子检测步骤35-36
• 1.6.3 注意事项36-37
• 二、实验结果37-48
• 2.1 P0免疫前应用醋酸格拉默对EAN临床损伤产生了抑制效应37-38
• 2.2 醋酸格拉默在电生理学上抑制了EAN坐骨神经的损伤38-39
• 2.3 醋酸格拉默在坐骨神经病理上抑制了EAN炎性细胞浸润和脱髓鞘39-42
• 2.4 体外增殖实验证明醋酸格拉默对自身反应的T细胞的抑制作用是P0抗原非特异性的42-43
• 2.5 醋酸格拉默对EAN进展期大鼠有治疗作用43-44
• 2.6 醋酸格拉默抑制了EAN进展期炎性因子的产生44-45
• 2.7 醋酸格拉默抑制了EAN进展期坐骨神经炎性细胞浸润和髓鞘脱失45-48
• 三、统计学分析48
• 四、讨论48-50
• 五、小结50-52
• 全文结论52-53
• 论文创新点53-54
• 参考文献54-61
• 发表论文和参加科研情况说明61-63
• 综述醋酸格拉默的免疫调节、神经保护功能与自身免疫性疾病63-91
• 1. 醋酸格拉默的发现及发展63
• 2. 吉兰巴雷综合征及其动物模型63-68
• 3. 醋酸格拉默对免疫细胞的调节机制68-73
• 3.1 醋酸格拉默对T细胞亚群的免疫调节作用68-69
• 3.2 醋酸格拉默对B细胞免疫调节作用69-70
• 3.3 醋酸格拉默对巨噬细胞和单核细胞的免疫调节作用70-71
• 3.4 醋酸格拉默对自然杀伤细胞的免疫调节作用71-72
• 3.5 醋酸格拉默对CNS星形胶质细胞的免疫调节作用72
• 3.6 醋酸格拉默对神经元和少突胶质细胞的免疫调节作用72-73
• 4. 醋酸格拉默对免疫球蛋白的免疫调节作用73-74
• 5. 醋酸格拉默对神经再生和髓鞘修复的作用74-77
• 6.小结77-79
• 综述参考文献79-91
• 致谢91-92

【共引文献】

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本文编号：384142