扶芳藤益心方对气虚血瘀证胸痹（慢性稳定性心绞痛）的临床及内皮细胞保护作用研究

发布时间：2017-05-27 18:02

  本文关键词：扶芳藤益心方对气虚血瘀证胸痹（慢性稳定性心绞痛）的临床及内皮细胞保护作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:(1)临床观察扶芳藤益心方治疗气虚血瘀证胸痹(慢性稳定性心绞痛)患者的临床疗效及其内源活性物质水平变化的影响。(2)实验研究扶芳藤益心方对体外缺氧/复氧(H/R)损伤后人心内膜微血管内皮细胞(HUMCE)的保护作用及机制。方法:(1)临床上选择82例气虚血瘀证胸痹(慢性稳定性心绞痛)患者,年龄在35-79岁之间,随机分为治疗组和对照组,每组各41例。对照组为常规西药治疗(抗血小板药物、硝酸酯类、β受体阻滞剂、ACEI等);治疗组在对照组常规西药治疗基础上加扶芳藤益心方汤剂口服,早晚各1次,每次200ml。两组疗程均为4周。观察两组治疗前后的中医证候疗效、心绞痛疗效、心电图疗效及患者血清VEGF、ET-1、hs-CRP、IL-1β水平的变化。(2)通过扶芳藤益心方、益心方水提和醇提的比较,选择提取率高者作为扶芳藤益心方、益心方提取方法。观察扶芳藤益心方、益心方水提物和醇提物对小鼠的急性毒性试验,评价药物的安全性。采用血清药理学方法,制备不同阶梯浓度的扶芳藤益心方和益心方含药大鼠血清干预HUMCE,采用MTT法检测HUMCE活性,选择最佳的含扶芳藤益心方、益心方大鼠血清浓度。实验随机分为正常组和造模组:模型对照组、扶芳藤益心方组、益心方组、阳性对照组(卡托普利10-2mol/L(CAP1)、10-3mol/L(CAP2)、10-4mol/L(CAP3))。体外建立H/R损伤后HUMCE模型,根据实验分组,采用含药大鼠血清干预:MTT法检测HUMCE活力,流式细胞仪检测HUMCE的Caspase-3阳性细胞数;硝酸还原酶法检测HUMCE上清液中NO含量和NOS活力;ELISA法检测HUMCE上清液中VEGFR-2和VEGF的含量;Western blot法检测HUMCE的ET-1和ECE蛋白表达水平;PCR法检测HUMCE的ET-mRNA和iNos-mRNA基因表达水平。结果:(1)中医证候疗效比较:治疗组总有效率90.2%,对照组总有效率73.2%,两组间比较有统计学意义(p0.05);心绞痛疗效比较:治疗组总有效率87.8%,对照组总有效率82.9%,两组间比较无统计学意义(p0.05);心电图疗效比较:治疗组总有效率75.6%,对照组总有效率61.0%,两组间比较无统计学意义(p0.05);两组治疗后vegf水平均较治疗前显著升高(p0.01),且治疗组vegf升高水平显著高于对照组(p0.01);两组治疗后et-1、hs-crp、il-1β水平均明显下降(p0.05),且治疗组et-1、hs-crp、il-1β下降水平优于对照组(p0.05)。(2)扶芳藤益心方和益心方醇提优于水提,且扶芳藤益心方和益心方醇提物小鼠急性毒性实验安全;2倍人日用剂量扶芳藤益心方和4倍人日用剂量益心方制备大鼠含药血清对h/r损伤后humce活性最佳。(3)模型对照组:与扶芳藤益心方组,益心方组,cap1组、cap2组、cap3组比较:模型对照组的细胞活力、no含量、nos活力、vegf浓度、vegfr-2浓度及inos-mrna基因表达均降低(p0.05),caspase-3阳性细胞数也降低,分别降低了9.87%、3.1%、14.26%、7.38%、4.17%(p0.05);模型对照组的et-1、ece蛋白及et-mrna基因表达均明显升高(p0.05)。扶芳藤益心方组:与益心方组比较,益心方组的细胞活性、no含量、nos活力、vegf浓度、vegfr-2浓度及inos-mrna基因表达均降低(p0.05),et-1、ece蛋白表达及et-mrna基因表达明显增加(p0.05),caspase-3阳性细胞数降低6.77%(p0.05);与cap1组比较,cap1组的细胞活性、no含量、nos活力、vegf浓度、vegfr-2浓度及inos-mrna基因表达均升高(p0.05),caspase-3阳性细胞数升高4.39%(p0.05),et-1、ece蛋白及et-mrna基因表达均降低(p0.05);与cap2组比较,cap2组的细胞活性、no含量降低(p0.05),caspase-3阳性细胞数降低了2.49%(p0.05),et-1、ece蛋白表达及et-mrna基因表达明显增加(p0.05);与cap3组比较,cap3组的细胞活性、no含量、VEGF浓度、VEGFR-2浓度均降低(P0.05),Caspase-3阳性细胞数降低了5.70%(P0.05),ET-1、ECE蛋白表达及ET-mRNA基因表达均明显增加(P0.05)。益心方组:与CAP1组、CAP2组、CAP3组比较,CAP1组、CAP2组、CAP3组的细胞活性、NO含量、NOS活力和VEGF浓度、VEGFR-2浓度均升高(P0.05),ET-1、ECE蛋白及ET-mRNA基因表达均降低(P0.05),CAP1组、CAP2组的iNOS-mRNA基因表达增加(P0.05),CAP3组的iNOS-mRNA基因表达降低(P0.05)。结论:(1)扶芳藤益心方可以缓解气虚血瘀证胸痹(慢性稳定性心绞痛)患者的心绞痛,改善中医证候和心电图缺血表现,且增加患者VEGF分泌,减少ET-1、hs-CRP、IL-1β分泌,从而调节内源性活性物质平衡及抑制其炎症反应,保护人心内膜微血管内皮细胞,促进其功能的恢复。(2)扶芳藤益心方、益心方均能增加H/R损伤后HUMCE的增殖活性,且可促进人心内膜微血管内皮细胞VEGF、VEGFR-2与NO、NOS的分泌,增加iNOS-mRNA基因表达,下调ET-1、ECE蛋白表达水平和降低ET-mRNA基因表达,重新维持ET/NO关系平衡,达到稳定H/R损伤后HUMCE结构的完整和改善其功能。扶芳藤益心方保护H/R损伤后HUMCE的作用优于益心方和卡托普利10-4mol/L浓度,与卡托普利10-3mol/L浓度的保护作用基本一致。
【关键词】：扶芳藤益心方 益心方 气虚血瘀 胸痹 缺氧/复氧 人心内膜微血管内皮细胞 一氧化氮 内皮素
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R256.22
【目录】：

• 中文摘要9-12
• ABSTRACT12-17
• 中英文缩略词表17-19
• 前言19-24
• 第一部分 临床研究24-42
• 1 材料和方法24-30
• 1.1 实验试剂24
• 1.2 试验药物24
• 1.3 主要仪器24
• 1.4 病例选择24-25
• 1.5 诊断标准25-27
• 1.6 纳入排除标准27
• 1.7 中止/退出标准27-28
• 1.8 治疗方法28
• 1.9 观察指标及检测方法28-29
• 1.10 疗效评定标准29-30
• 1.11 安全性评价30
• 1.12 统计学分析30
• 2 结果30-32
• 3 结论32
• 4 讨论32-42
• 4.1 血管内皮细胞与冠心病32-33
• 4.2 内皮素、血管内生长因子与冠心病33-34
• 4.3 高敏-C反应蛋白、白介素-1β 与冠心病34
• 4.4 祖国医学对胸痹的认识34-37
• 4.5 从益气活血法探讨气虚血瘀证胸痹（慢性稳定性心绞痛）的治疗37
• 4.6 扶芳藤益心方组方原则37-42
• 第二部分 实验研究42-100
• 1 扶芳藤益心方、益心方水提与醇提率比较42-45
• 1.1 实验材料42
• 1.2 实验试剂42
• 1.3 实验方法42-43
• 1.3.1 实验设计42
• 1.3.2 不同的提取方法42-43
• 1.3.2.1 水提法42-43
• 1.3.2.2 醇提法43
• 1.4 结果43-45
• 1.4.1 扶芳藤益心方水提组43-44
• 1.4.2 扶芳藤益心方醇提组44
• 1.4.3 益心方水提组44
• 1.4.4 益心方醇提组44-45
• 1.5 结论45
• 2 扶芳藤益心方、益心方醇提物小鼠急性毒性试验45-47
• 2.1 材料与方法45-46
• 2.1.1 实验药物45
• 2.1.2 实验试剂45
• 2.1.3 实验动物45
• 2.1.4 试验方法45-46
• 2.2 结果46-47
• 2.3 结论47
• 3 扶芳藤益心方、益心方醇提47-49
• 3.1 材料与方法47-48
• 3.1.1 实验药材47
• 3.1.2 实验试剂47
• 3.1.3 实验仪器47-48
• 3.1.4 实验方法48
• 3.2 结果48-49
• 4 不同浓度扶芳藤益心方、益心方大鼠血清的制备49-57
• 4.1 材料与方法49-54
• 4.1.1 实验药材49
• 4.1.2 实验动物49
• 4.1.3 实验仪器49
• 4.1.4 不同浓度扶芳藤益心方、益心方药液的配制49-52
• 4.1.5 实验分组52-53
• 4.1.6 不同浓度扶芳藤益心方、益心方大鼠血清制备53-54
• 4.2 结果54-57
• 4.2.1 不同浓度扶芳藤益心方组结果54-55
• 4.2.2 不同浓度益心方组结果55-56
• 4.2.3 空白组结果56-57
• 5 探讨含不同浓度大鼠血清培养液与含 10%胎牛血清培养液对HUMCE活性的影响57-63
• 5.1 材料与方法57-60
• 5.1.1 实验细胞57
• 5.1.2 实验血清57
• 5.1.3 主要试剂57
• 5.1.4 实验仪器57-58
• 5.1.5 配制含不同浓度大鼠血清培养液和 10%胎牛血清培养液58
• 5.1.6 HUMCE传代培养58-59
• 5.1.7 试实验分组59-60
• 5.1.8 MTT法测定含不同浓度大鼠血清干预后HUMCE活性60
• 5.2 统计学分析60
• 5.3 结果60-62
• 5.4 结论62
• 5.5 讨论62-63
• 6 探讨含不同浓度扶芳藤益心方、益心方大鼠血清对H/R损伤后HMCE活性的影响63-69
• 6.1 材料与方法63-67
• 6.1.1 实验细胞63
• 6.1.2 试验药物63
• 6.1.3 实验试剂63
• 6.1.4 主要仪器63
• 6.1.5 配制含药大鼠血清培养液63-64
• 6.1.6 HUMCE传代培养64-65
• 6.1.7 体外建立HUMCE的H/R损伤模型65
• 6.1.8 实验分组65
• 6.1.9 MTT法检测HUMCE活性65-67
• 6.2 统计学分析67
• 6.3 结果67-69
• 6.3.1 H/R对HUMCE增殖活性的影响67
• 6.3.2 不同浓度扶芳藤益心方大鼠血清与模型对照组对H/R损伤后HUMCE活性的影响67-68
• 6.3.3 不同浓度扶芳藤益心方大鼠血清对H/R损伤后HUMCE活性的影响68
• 6.3.4 不同浓度益心方大鼠血清与模型对照组对H/R损伤后HUMCE活性的影响68
• 6.3.5 不同浓度益心方对H/R损伤后HUMCE活性的影响68
• 6.3.6 不同浓度扶芳藤益心方与不同浓度益心方大鼠血清对H/R损伤后HUMCE活性的影响68-69
• 6.4 结论69
• 7 研究扶芳藤益心方对缺氧/复氧损伤后人心内膜微血管内皮细胞增殖机制69-82
• 7.1 材料与方法69-77
• 7.1.1 主要试剂69-70
• 7.1.2 实验细胞70
• 7.1.3 试验药物70
• 7.1.4 主要仪器70
• 7.1.5 实验血清70
• 7.1.6 配制含药大鼠血清培养液70
• 7.1.7 HUMCE传代培养70
• 7.1.8 体外建立H/R损伤后HUMCE模型70
• 7.1.9 实验分组70-71
• 7.1.10 MTT法检测H/R损伤后HUMCE活性71-72
• 7.1.11 流式细胞仪检测H/R损伤后HUMCE的Caspase-3 阳性细胞数72-74
• 7.1.12 ELISA法检测H/R损伤后HUMCE的VEGF浓度74-75
• 7.1.13 ELISA法检测H/R损伤后HUMCE的VEGFR-2 浓度75-77
• 7.2 统计学分析77
• 7.3 结果77-78
• 7.3.1 H/R对HUMCE增殖和凋亡的的影响77
• 7.3.2 扶芳藤益心方、益心方大鼠血清对H/R损伤后HUMCE的Caspase-3 阳性细胞数的影响77-78
• 7.3.3 扶芳藤益心方、益心方大鼠血清对H/R损伤后HUMCE的活性影响78
• 7.3.4 扶芳藤益心方、益心方大鼠血清对H/R损伤后HUMCE的VEGFR-2、VEGF浓度的影响78
• 7.4 结论78-79
• 7.5 讨论79-82
• 8 研究扶芳藤益心方对缺氧/复氧损伤后人心内膜微血管内皮细胞的保护机制82-100
• 8.1 材料与方法82-95
• 8.2 统计学分析95
• 8.3 结果95-97
• 8.4 结论97
• 8.5 讨论97-100
• 课题创新点100-101
• 结语与展望101-103
• 参考文献103-113
• 综述113-127
• 参考文献122-127
• 已发表论文情况127-128
• 致谢128

  本文关键词：扶芳藤益心方对气虚血瘀证胸痹（慢性稳定性心绞痛）的临床及内皮细胞保护作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：400727