培元固本法的理论探讨及其对老年性痴呆作用的研究

发布时间：2017-08-31 03:29

  本文关键词：培元固本法的理论探讨及其对老年性痴呆作用的研究

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【摘要】：目的:培元固本法是中医学的重要治法之一,在各种疾病尤其是老年病的防治过程中起着重要作用,历代医家极为重视培元固本法,对其多有阐发。本课题从中医培元固本法的自身发展脉络出发,梳理其基本概念和理论内涵,对其进行分析归纳总结,并结合本课题组前期的研究基础,以老年性痴呆为切入点,探讨元气与老年性痴呆发病的关系和培元固本法防治老年性痴呆的作用及机制。以APP/PS1双转基因小鼠作为老年性痴呆的动物模型,观察培元固本中药复方补元清脑颗粒治疗老年性痴呆的作用及其对PI3K/Akt信号通路的影响,旨在为中医培元固本法的理论研究和培元固本法防治老年病的研究提供理论基础和实验依据。方法:1.理论探讨:整理与中医培元固本法有关的古今文献,分析培元固本法的中医学概念、内涵,探讨中医培元固本法的理论,及其防治老年性痴呆的理论依据。2.实验研究:以APP/PS1双转基因小鼠作为老年性痴呆的动物模型,以PI3K/Akt信号通路为研究靶点,研究培元固本中药复方补元清脑颗粒对老年性痴呆的作用及其机制。以Morris水迷宫测试、跳台测试为行为学指标,检测小鼠的学习记忆能力;以Western Blot法检测小鼠海马组织PI3K/Akt信号通路主要蛋白的含量;以Real Time-PCR检测小鼠海马组织PI3K/Akt信号通路主要mRNA的表达,及其上游β淀粉样前体蛋白(APP)mRNA的表达;免疫组织化学染色法检测小鼠海马组织PI3K/Akt信号通路主要蛋白的含量;电镜观察小鼠海马CA1区细胞凋亡情况。结果:1.Morris水迷宫测试结果显示:与空白组比较,模型组小鼠上平台潜伏期、第1次抵原平台时间和游泳总路程明显增加(P0.01),穿越平台次数、目标象限时间均明显减少(P0.01);与模型组比较,各组小鼠的上平台潜伏期、游泳总路程均减少(p0.01,p0.05),目标象限时间均增加(p0.01,p0.05),补元清脑颗粒高剂量组和等效剂量组小鼠的穿越平台次数增加(p0.01,p0.05),两组之间呈现出一定的量效关系;与西药阳性对照组多奈哌齐组比较,补元清脑颗粒高剂量组和等效剂量组小鼠的游泳总路程明显减少(p0.01);与中药阳性对照组菖蒲益智丸组比较,补元清脑颗粒高剂量组和等效剂量组小鼠的游泳总路程明显减少(p0.01),补元清脑颗粒高剂量组小鼠的穿越平台次数增加(p0.05)。2.跳台测试结果显示:与空白组比较,模型组小鼠的出错次数明显增加(p0.01),潜伏期明显缩短(p0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和补元清脑颗粒高剂量组小鼠的出错次数减少(p0.01,p0.05),多奈哌齐组和菖蒲益智丸组小鼠的潜伏期延长(p0.01,p0.05)。3.westernblot结果显示:与空白组比较,模型组小鼠海马组织的akt、bcl-2蛋白相对表达量减少(p0.05);与模型组比较,多奈哌齐组、菖蒲益智丸组小鼠海马组织的akt蛋白相对表达量增加(p0.01,p0.05),菖蒲益智丸组小鼠海马组织的bax蛋白相对表达量减少(p0.05),各组小鼠海马组织的bcl-2蛋白相对表达量增加(p0.01,p0.05)。4.realtime-pcr结果显示:与空白组比较,模型组appmrna、pi3kmrna、aktmrna、bcl-2mrna表达下调,baxmrna表达上调。与模型组比较,多奈哌齐组和补元清脑颗粒等效剂量组pi3kmrna、aktmrna、bcl-2mrna表达上调,appmrna、baxmrna表达下调;菖蒲益智丸组appmrna、pi3kmrna、aktmrna、bcl-2mrna、baxmrna表达下调;补元清脑颗粒高剂量组appmrna、pi3kmrna、aktmrna、bcl-2mrna表达上调,baxmrna表达下调。5.免疫组织化学法结果显示:①小鼠海马组织ca1区bax免疫组化染色:空白组小鼠海马ca1区细胞带完整,排列整齐,细胞形态正常,细胞膜和细胞质着浅黄棕色颗粒。与空白组比较,模型组小鼠海马ca1区细胞着深棕色颗粒。与模型组比较,各组小鼠海马ca1区细胞染色较浅,其中多奈哌齐组、菖蒲益智丸组和补元清脑颗粒高剂量组细胞膜和细胞质着浅黄棕色颗粒,补元清脑颗粒等效剂量组细胞膜和细胞质着棕色颗粒。②小鼠海马组织CA1区Bcl-2免疫组化染色结果:空白组小鼠海马CA1区细胞带完整,排列整齐,细胞形态正常,细胞膜和细胞质着深棕黄颗粒。与空白组比较,模型组小鼠海马CA1区细胞排列紊乱,染色较浅。与模型组比较,各组小鼠海马CA1区细胞排列有序,染色较深,其中多奈哌齐组、菖蒲益智丸组和补元清脑颗粒高剂量组细胞膜和细胞质着深棕黄色颗粒,补元清脑颗粒等效剂量组细胞膜和细胞质着棕色颗粒。6.电镜结果显示:空白组小鼠海马CA1区神经元的核膜完整,核仁明显。其他各组与正常组比较,均出现凋亡表现,其中模型组最为显著。与多奈哌齐组比较,补元清脑颗粒高剂量组和等效剂量组神经元细胞核的核仁不明显,胞质内空泡较多。与菖蒲益智丸组比较,补元清脑颗粒高剂量组神经元胞质颜色较浅,胞核体积较大,染色质聚集较少,胞浆内空泡较少;补元清脑颗粒等效剂量组神经元胞核体积较大。结论:1.元气是人体各项生命活动的基础,是脑部生理功能的根本。元气充沛,则脑清神明;元气亏虚,则髓海失养,痰瘀上蒙,清窍不明。通过培元固本法来培补元气,固护脾肾,使先后天相互补充,相互滋长,达到防治老年性痴呆的目的。2.培元固本法对APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力具有改善作用。3.培元固本法具有激活APP/PS1双转基因小鼠PI3K/Akt信号通路,抗细胞凋亡的作用。
【关键词】：《黄帝内经》 元气 老年性痴呆 培元固本
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R277.7
【目录】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 缩略词表13-14
• 前言14-15
• 第一部分 培元固本法的理论探讨15-38
• 1.“元”的概念15
• 2.“本”的概念15-16
• 3.“元气”的概念16-21
• 3.1“气”的概念16-19
• 3.2“元气”的涵义19-21
• 4.元气与衰老及老年性痴呆的关系21-33
• 4.1 肾中元精及其与元气的关系21-27
• 4.2 脑中元神及其与元气的关系27-33
• 5.培元固本，养生延衰33-38
• 5.1“培元固本学派”的形成和发展33-36
• 5.2 培元固本法的理论对养生防病的指导36-38
• 第二部分 培元固本法是防治老年性痴呆的重要治法38-45
• 1.老年性痴呆的病因病机38-42
• 1.1 元气失调，痰浊蒙窍38-39
• 1.2 精气亏虚，髓海不足39-40
• 1.3 情志不遂，元神失用40-42
• 2.培元固本，防治痴呆42
• 3.补元清脑颗粒组方分析42-45
• 第三部分 培元固本法对APP/PS1双转基因小鼠作用的研究45-66
• 实验一 培元固本法对APP/PS1双转基因小鼠行为学的影响45-51
• 1.实验材料45-46
• 1.1 实验动物45
• 1.2 实验用药及制备45-46
• 1.3 实验仪器46
• 2.实验方法46
• 2.1 动物分组46
• 2.2 动物给药46
• 3.学习记忆水平检测46-48
• 3.1 Morris水迷宫测试46-47
• 3.2 跳台测试47-48
• 4.统计学处理48
• 5.结果48-51
• 5.1 Morris水迷宫测试48-49
• 5.2 跳台测试49-51
• 实验二 培元固本法对APP/PS1双转基因小鼠PI3K/Akt信号通路的影响51-66
• 1.实验材料51-55
• 1.1 实验动物51
• 1.2 实验用药及制备51
• 1.3 实验仪器51-52
• 1.4 实验试剂52-54
• 1.5 实验用到的溶液配制方法54-55
• 2.实验方法55-61
• 2.1 动物取材55
• 2.2 Western Blot法检测PI3K/Akt信号通路主要蛋白的含量55-58
• 2.3 Real Time-PCR检测PI3K/Akt信号通路主要mRNA表达58-59
• 2.4 免疫组织化学法检测PI3K/Akt信号通路主要蛋白含量59-60
• 2.5 透射电子显微镜观察小鼠海马CA1区神经元超微结构60-61
• 3.统计学处理61
• 4.结果61-66
• 4.1 小鼠海马组织Western Blot实验结果61-62
• 4.2 小鼠海马组织Real Time-PCR实验结果62-64
• 4.3 小鼠海马CA1区免疫组化染色结果64
• 4.4 小鼠海马CA1区电镜结果64-66
• 第四部分 讨论66-81
• 1.APP/PS1双转基因小鼠作为老年性痴呆模型的选择66-67
• 1.1 APP/PS1双转基因小鼠神经病理改变66-67
• 1.2 APP/PS1双转基因小鼠行为学改变67
• 2.培元固本法对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆的影响67-70
• 3.培元固本法对APP/PS1双转基因小鼠PI3K/Akt信号通路的影响70-79
• 3.1 细胞凋亡70-75
• 3.2 年性痴呆与Aβ 诱导的神经细胞凋亡75-77
• 3.3 老年性痴呆与PI3K/Akt信号通路77-79
• 4.结论79
• 5.展望79-81
• 参考文献81-92
• 附录 综述92-102
• 参考文献98-102
• 附图102-105
• 在校期间公开发表的学术论文及科研成果105-106
• 致谢106

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本文编号：763222