UBE2Q1的异常表达与肝细胞肝癌发生发展的相性研究
发布时间：2017-10-03 07:16
本文关键词：UBE2Q1的异常表达与肝细胞肝癌发生发展的相性研究
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【摘要】：目的:肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的癌症之一。有研究报道,泛素蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)参与了蛋白质降解的调控,在HCC以及其他恶性肿瘤的病理生理学过程中扮演着关键角色。泛素接合酶E2Q1(ubiquitin-conjugating enzyme E2Q1,UBE2Q1)作为一种E2泛素接合酶类,可能参与了癌症相关蛋白的调控。本研究旨在分析UBE2Q1在HCC中的表达情况及其与HCC患者预后的关系,并进一步探讨UBE2Q1的异常表达在HCC发生发展过程中的意义。方法:1.从组织学角度研究,首先通过Western blot方法,检测在8对新鲜HCC及其对应的癌旁组织中UBE2Q1蛋白的表达情况;然后,运用免疫组化方法检测86例HCC组织标本中UBE2Q1和增殖指标Ki-67的表达情况,并采用统计学方法分析UBE2Q1、Ki-67的表达情况与HCC癌患者的性别、年龄、肿瘤体积大小、组织学分级以及肿瘤转移等临床病理因素之间的相关性。通过Kaplan-Meier法分析UBE2Q1的表达与HCC患者生存率之间的相关性;运用单因素和Cox危险比例模型多因素分析进一步探究UBE2Q1的表达与肝细胞肝癌患者预后之间的关系。2.从细胞学角度研究,选取高表达UBE2Q1的BEL-7404、Hep G2细胞株作为研究对象,血清饥饿释放同步化处理后运用Western blot方法检测UBE2Q1蛋白表达水平变化,探究其在肿瘤细胞增殖过程中的潜在作用。3.从分子生物学角度研究,通过小干扰RNA的方式下调BEL-7404、Hep G2细胞中UBE2Q1的内源性表达,然后采用CCK-8、细胞流式分析等方法检测UBE2Q1表达的下调对细胞增殖以及细胞周期的影响。结果:1.免疫组化及Western blot法检测均显示,UBE2Q1在HCC组织中的表达明显高于相对应的癌旁肝组织。统计学分析提示UBE2Q1的表达强度与HCC组织学分级(P0.001)之间的关系有统计学意义,相关性分析表明UBE2Q1与Ki-67表达呈正相关(r=0.639,P0.01);Kaplan-Meier分析显示UBE2Q1在HCC中的高表达与患者总生存率的降低显著相关(P=0.001);单因素分析表明UBE2Q1与HCC患者的不良预后有关(P0.001);Cox比例风险模型分析显示UBE2Q1可做为HCC患者预后的一种独立指标(P=0.002)。2.通过血清饥饿的方式使BEL-7404、Hep G2细胞生长周期停滞,血清释放后刺激BEL-7404、Hep G2细胞增殖;Western blot结果显示UBE2Q1PCNA蛋白随着细胞周期的进展表达增加,而p53、p21蛋的白表达却下降。3.si RNA分析显示,UBE2Q1表达的下调可引起BEL-7404、Hep G2细胞增殖水平的下降及其细胞周期的停滞。结论:1.UBE2Q1在HCC中高表达,并且可作为HCC患者一种独立的预后指标。UBE2Q1的高表达提示HCC患者的预后不良。上述结果均说明UBE2Q1可能与HCC的发生发展有关。2.UBE2Q1的表达在血清饥饿的BEL-7404、Hep G2细胞中逐渐增加,提示UBE2Q1与HCC细胞的增殖过程相关。si RNA干扰BEL-7404、Hep G2细胞中UBE2Q1的内源性表达后,p53、p21在BEL-7404、Hep G2细胞中的表达水平相应增加,提示UBE2Q1的表达下调可能通过使HCC细胞周期停滞来影响其增殖。
【关键词】：UBE2Q1 肝细胞肝癌 细胞增殖 p53 细胞周期
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：
- 中文摘要4-6
- Abstract6-11
- 第一章 绪论11-14
- 1.1 课题来源、研究的目的和意义11-12
- 1.2 国内外研究概况12-13
- 1.2.1 国外研究概况12-13
- 1.2.2 国内研究概况13
- 1.3 论文的主要研究内容13-14
- 第二章 材料和方法14-25
- 2.1 材料14-19
- 2.1.1 组织标本14
- 2.1.2 细胞14
- 2.1.3 试剂14-18
- 2.1.4 实验仪器18-19
- 2.2 方法19-25
- 2.2.1 Western blot检测19-20
- 2.2.2 病理切片的免疫组化20-23
- 2.2.3 细胞株的培养23
- 2.2.4 UBE2Q1 基因的si-RNA质粒23
- 2.2.5 利用脂质体Lipofectamine 2000 瞬时转染HepG2 和BEL-7404 细胞23-24
- 2.2.6 流式细胞仪（FCM）检测细胞周期的分布24
- 2.2.7 CCK-8（cell counting kit-8）法检测细胞增殖活性24-25
- 第三章 结果25-42
- 3.1 UBE2Q1 在HCC组织及其对应癌旁组织中的表达25-27
- 3.1.1 Western blot检测UBE2Q1 在8对HCC及其对应癌旁新鲜组织中的表达情况25-26
- 3.1.2 免疫组化检测UBE2Q1 和Ki-67 在HCC及其对应癌旁石蜡切片组织中的表达情况26
- 3.1.3 UBE2Q1 和Ki-67 在HCC组织中表达的相关性分析26-27
- 3.2 UBE2Q1 的表达与HCC临床病理因素的相关性27-29
- 3.3 HCC预后相关统计学分析29-31
- 3.3.1 单因素生存分析29-30
- 3.3.2 UBE2Q1 的表达对HCC患者生存率的影响30
- 3.3.3 Cox比例风险模型多因素生存分析30-31
- 3.4 UBE2Q1 在肝细胞肝癌细胞株及正常肝细胞株中的表达31-32
- 3.5 UBE2Q1 对HepG2 细胞株增殖的影响32-37
- 3.5.1 血清饥饿释放对HepG2 细胞株细胞周期的影响32-33
- 3.5.2 HepG2 细胞增殖过程中UBE2Q1 表达的变化33-34
- 3.5.3 UBE2Q1 表达的下调对于HepG2 细胞株细胞增殖的影响34-36
- 3.5.4 UBE2Q1 表达的下调对HepG2 细胞株细胞周期及其相关蛋白的影响36-37
- 3.6 UBE2Q1 对BEL-7404 细胞株增殖的影响37-42
- 3.6.1 血清饥饿释放对BEL-7404 细胞株细胞周期的影响37-38
- 3.6.2 BEL-7404 细胞增殖过程中UBE2Q1 表达的变化38-39
- 3.6.3 UBE2Q1 表达的下调对于BEL-7404 细胞株细胞增殖的影响39-40
- 3.6.4 UBE2Q1 表达的下调对BEL-7404 细胞株细胞周期及其相关蛋白的影响40-42
- 第四章 讨论42-46
- 第五章 结论46-47
- 参考文献47-53
- 综述53-86
- 参考文献71-86
- 在攻读博士学位期间公开发表的论文与参加的项目86-87
- 英文缩写词表87-90
- 致谢90-91
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本文编号：963859
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