虾蟹养殖池塘益生菌的分离筛选及降解特性初步研究

发布时间：2017-12-03 17:30

  本文关键词：虾蟹养殖池塘益生菌的分离筛选及降解特性初步研究

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【摘要】：本实验前期采集了位于江苏省连云港市赣榆区混养三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)与日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)池塘的表层沉积物,利用不同培养基,分别对沉积物中的复合菌进行了五、六个周期的富集和驯化培养,每周期结束之后,都分别检测复合菌对COD、氨态氮的降解能力。当几个周期全部结束之后,又分别将复合菌中的单株菌通过平板进行分离、16S rRNA进行鉴定,通过血平板及单株菌对COD、氨态氮的降解能力进行筛选,之后将经过鉴定和筛选的单株菌按一定比例配合之后,再次检测组合菌对COD、氨态氮的降解能力。本实验后期选择了一株短小芽孢杆菌,比较了在不同环境因子下其对无机氮的降解能力。目前,为使养殖环境保持清洁、养殖动物健康成长,利用养殖环境中天然存在的或从养殖生物体内分离的菌来对环境中的污染物进行降解受到广泛关注。不过从虾蟹养殖池塘中筛选能够高效降解污染物的菌则少见报道。本研究目的是获得能够降解虾蟹养殖池塘中有机物污染和无机氮污染的两类菌,旨在为菌规模化培养及在海水养殖污水处理的潜在应用提供依据、为虾蟹养殖池塘生态环境的改善及虾蟹养殖池塘微生态制剂的研究提供菌株和理论支持。本论文实验设计及主要研究成果如下：1.虾蟹养殖池塘有机物降解菌富集驯化与分离筛选采集虾蟹混养池塘沉积物,利用特定饵料培养基,并通过定期增加培养基中饵料添加量的方式,对沉积物中的复合菌进行了六个周期(7天／周期)的富集驯化培养。在COD含量约为1000mg/L、菌接种量为10%的饵料降解溶液中,后期复合菌在5天内对COD的最大去除率分别达到了64%、70%和88%。在六个周期富集驯化结束后,从复合菌中分离出16株菌,经16S rRNA分析,其中8株属于弧菌属(vibrio sp.),1株属于芽孢杆菌目(Bacillalessp.),2株属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.),2株属于交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.),1株属于气单胞菌属(Aeromonas sp.),1株属于希瓦氏菌属(Shewanella sp.)。经血平板初步筛选出4株不具潜在致病性的菌,1株属于芽孢杆菌目,1株为巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium),2株为交替假单胞菌,在菌接种量为1.0×107cfu/mL的降解溶液中,各株菌在5天内对COD的最大去除率分别达到了40%、40%、56%和46%。将这4株诗按一定比例组合后,在5天内对COD的最大去除率可达到72%。研究表明,经富集驯化后的复合菌及从中分离筛选出的4株不具潜在致病性的细菌及按一定比例重组后的荫在调控养殖环境有机物污染方面都具有潜在应用价值。2.虾蟹养殖池塘氨氮降解菌富集驯化与分离筛选利用特定培养基,对虾蟹混养池塘沉积物中的氨氮降解复合菌进行了五个周期(14天／周期)的富集驯化培养。每周期结束后,在菌接种量为l0%,氨氮含量约为120mg/L的基础降解溶液中,5天内复合菌对氨态氮的最大去除率分别为29%,60%,69%,74%,72%。五个周期的富集驯化培养结束后,从复合菌中分离出12株菌,经16S rRNA序列分析,8株属于芽孢杆菌属(Bacillus),4株属于盐单胞菌属(Halomonas) 。根据菌株对红细胞的溶血性,初步筛选出6株菌,其中2株为芽孢杆菌,4株为盐单胞菌。在菌接种量为106cfu/mL的降解溶液中,5天内各单株菌对氨态氮的最大去除率分别为59%、33%、42%、41%、40%和43%；菌接种量为1×107cfu/mL时,5天内各单株菌对氨态氮的最大去除率分别为70%、71%、88%、79%、51%和55%。将这6株菌按特定比例重新组合后,组合菌C在5天内对氨态氮的去除能力较高,去除率达到62%。3.一株异养硝化-好氧反硝化菌株的脱氮特性研究本研究测定了短小芽孢杆菌E6在不同培养时间、温度、盐度、pH、菌接种量、C：N(质量比)、碳源等条件下对氨态氮、亚硝酸态氮、硝酸态氮及总无机氮降解能力。将菌株E6接种到氨态氮浓度为107.72 mg/L、亚硝酸态氮浓度为8.55 mg/L、硝酸态氮浓度为39.20mg/L的氮降解基础溶液后,5天内其对氨态氮、亚硝酸态氮、硝酸态氮以及总无机氮的去除率分别达到47.59%、93.22%、64.84%和54.45%。在本研究条件下,菌株E6在温度为28-34℃、盐度为20-60%、pH为(6-7)、菌接种量为5%、碳氮比值为20、碳源为蔗糖时对无机氮具有较佳去除能力,对氨态氮、亚硝酸态氮、硝酸态氮和总无机氮的最大去除率分别可以达到70%、100%、81%和75%。
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S917.1

【参考文献】

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1 苏婉昀;高俊发;赵红梅;;异养硝化-好氧反硝化菌的研究进展[J];工业水处理;2013年12期

2 周迎芹;信欣;姚力;裴瑞林;方鹏;羊依金;;一株高效异养硝化-好氧反硝化菌的分离鉴定及脱氮性能[J];环境工程学报;2013年10期

3 符吴萸;杜丽明;杨平;邓树芳;何启宏;刘杰凤;;养殖水体氨氮降解菌的分离与降解特性研究[J];广东石油化工学院学报;2013年04期

4 高权新;施兆鸿;彭士明;;益生菌在水产养殖中的研究进展[J];海洋渔业;2013年03期

5 秦传新;张安凯;于刚;董双林;;水产生态养殖模式研究进展[J];广东农业科学;2013年12期

6 李秋芬;孙雪梅;张艳;刘淮德;;异养硝化-好氧反硝化菌株X3的环境适应性[J];渔业科学进展;2013年03期

7 闫法军;田相利;董双林;武心华;柳柄俊;;刺参池塘低温有机污染物降解细菌的分离筛选及其降解特性[J];中国水产科学;2012年04期

8 孙艳;刘飞;宋晓玲;麦康森;李玉宏;黄P";;饲料中添加益生菌对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)非特异免疫基因表达量和抗病力的影响[J];海洋与湖沼;2012年04期

9 袁梦冬;辛玉峰;;1株异养硝化-好氧反硝化菌的分离鉴定及脱氮活性[J];北华大学学报(自然科学版);2012年03期

10 孙雪梅;李秋芬;张艳;刘淮德;赵俊;曲克明;;一株海水异养硝化-好氧反硝化菌系统发育及脱氮特性[J];微生物学报;2012年06期

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本文编号：1249495