三种跨膜蛋白对脑心肌炎病毒体外增殖的作用研究

发布时间：2017-12-07 06:26

  本文关键词：三种跨膜蛋白对脑心肌炎病毒体外增殖的作用研究

  更多相关文章： CD63 TMEM39A VCAM-1 脑心肌炎病毒 RNA干扰 过表达 感染

【摘要】：脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditisvirus,EMCV)为能造成脑炎、心肌炎、神经性疾病、生殖障碍及糖尿病等疾病的人畜共患病原体。脑心肌炎的爆发流行,对人类公共卫生及养殖业均造成了较大的经济损失。近几年,对于EMCV的疫情调查、诊断和监测研究越来越多,但其感染、复制以及致病的分子机制仍不明确,因此,及时开展EMCV的相关研究十分迫切。本实验室通过酵母双杂交筛选与EMCV的结构蛋白VP1、VP2、VP3相互作用的宿主细胞蛋白,已初步筛选到CD63、TMEM39A、VCAM-1与EMCVVP1/VP2/VP3存在相互作用。且之前的许多研究已证明,此三种膜蛋白均为参与调节多种病毒增殖的重要宿主蛋白。酵母双杂交试验结果提示CD63、TMEM39A、VCAM-1可能参与EMCV感染宿主细胞。因此,本研究将对此推断进行验证。利用瞬时过表达/基因敲低技术来调控这三种膜蛋白在宿主细胞中的表达量,并验证其过表达与敲低效果。在此基础上进行病毒感染分析,探讨三种膜蛋白对EMCV在宿主细胞中增殖的影响。通过RT-PCR从细胞中扩增三种膜蛋白全长cDNA并克隆到pCDNA3.1整合表达载体中;用重组表达载体与空载体转染细胞,之后将实验组细胞与对照组细胞感染EMCV;分别在24h与48h后收样,分别通过qRT-PCR与TCID50检测EMCV复制与致病性的变化。与此同时,通过RNAi敲低细胞中三种膜蛋白的表达并感染EMCV,分别在24h与48h后收样,通过qRT-PCR与TCID50检测EMCV复制与致病性的变化。EMCV感染试验证明CD63、TMEM39A表达降低后EMCV增殖也随之降低,表达增高后EMCV增殖也随之增高,且存在统计学差异(P0.01);VCAM-1表达降低后EMCV增殖随之升高,表达增高后EMCV增殖随之降低,且存在统计学差异(P0.05)。以上试验结果表明三种细胞膜蛋白表达改变可导致病毒在宿主细胞中的增殖发生变化,提示CD63、TMEM39A、VCAM-1与EMCV在宿主细胞中的增殖相关,为进一步研究EMCV感染机制提供理论依据。
【学位授予单位】：西北民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.65

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本文编号：1261480