伪狂犬病毒gB蛋白单抗的制备及夹心ELISA检测PRV方法的建立

发布时间：2017-12-10 06:01

  本文关键词：伪狂犬病毒gB蛋白单抗的制备及夹心ELISA检测PRV方法的建立

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【摘要】：伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是世界动物卫生组织(OIE)通报的传染病,也是“国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020)”中被列为优先防治的猪病之一,其病原体为伪狂犬病毒(PRV),也称为奥耶斯基氏病毒(ADV),在分类上属于疱疹病毒科,α-疱疹病毒亚科,水痘病毒属。PRV可感染多种哺乳动物,包括猪、食肉动物、啮齿动物和反刍动物。临床上PRV感染以新生仔猪呈现神经系统紊乱和死亡、成年猪表现呼吸困难、母猪繁殖障碍为特征,给养猪业造成严重的经济损失。自2011年以来,一种高致病力的PRV变种在中国许多地区接种疫苗的猪群中出现,给该病的防控提出了新的挑战,因此,建立快速有效的诊断检测方法对控制和根除PR具有重要的意义。伪狂犬病毒gB糖蛋白是伪狂犬病毒包膜的主要成分,由913个氨基酸(aa)组成,属于高度保守的疱疹病毒糖蛋白,介导病毒穿入的过程和细胞至细胞的传播,在诱导保护性免疫中起重要作用,被认为是制备亚单位疫苗最有希望的备选蛋白基因。双抗体夹心ELISA方法是检测抗原最常用的方法,该方法特异性强,敏感,易于操作,并且经济、省时,尤其适合大规模的流行病学调查。本研究应用PCR技术扩增出PRV gB基因,并将克隆的目的片段连接到表达载体p GEX-4T-1,构建了原核表达重组质粒p GEX-4T-1-B。以表达纯化的PRV gB重组蛋白为抗原,制备了单克隆抗体和兔源多克隆抗体,以此建立了检测PRV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省某地区的猪群感染PRV的情况进行了流行病学调查。结果表明,本研究建立的双抗体夹心ELISA方法具有特异、敏感、简便与快速等优点,可用于PRV病毒抗原的快速检测,为今后PRV的诊断和流行病学调查研究提供了技术手段。流行病学调查发现,伪狂犬病毒在吉林省某地区猪群的感染率为5.6%~11.7%,且妊娠母猪阳性率高达11.7%,为该地区伪狂犬病的防治提供了理论依据。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.65

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本文编号：1273356