湖南湘西猕猴桃溃疡病分子检测鉴定及其防治药剂的筛选

发布时间：2017-12-20 22:20

  本文关键词：湖南湘西猕猴桃溃疡病分子检测鉴定及其防治药剂的筛选　出处：《湖南农业大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：猕猴桃溃疡病为我国森林植物检疫性对象,是猕猴桃生产中的一种毁灭性的细菌性病害。猕猴桃溃疡病在我国湖南、陕西、四川、福建以及安徽等省的猕猴桃栽培区普遍发生,造成了严重的经济损失。本研究从湖南省的吉首、泸溪、麻阳、凤凰、永顺等县(市)的猕猴桃主产区收集到猕猴桃溃疡病感病样品,分离并纯化病原菌后,对获得的溃疡病致病菌株进行了分子检测鉴定；采用平板菌落计数法和田间喷雾+刮除病斑涂抹法进行了7种常用杀菌剂对猕猴桃溃疡病菌的室内毒力测定和田间药剂防治效果试验。主要研究结果如下：1、从湖南湘西地区采集感染猕猴桃溃疡病的样品中,共分离纯化得到14份病原菌分离物,分别编号为：YSHY、YSML、YSJK、MYHY、MYCH、FHML、FHHY、 JSCH、JSHY、LXHY、LXML、JSML、TDCY、TDHY。2、利用引物27F/1492R和PsaF1/PsaR2对分离物的16S rDNA和16S-23S rDNA间隔区序列(ITS)进行了PCR扩增,分别获得了长度为1.4 kb和300 bp的目的片段。将目的片段回收纯化并进行测序,发现获得的14株致病菌的16S rDNA基因片段均为1383bp及16S-23S rDNA间隔区序列为280 bp,且序列一致。可以推断,所获得的14份菌株为同一致病菌。3、16S rDNA基因Blast比对结果显示：与国外报道的法国181、新西兰ABAC9、意大利IKB4等株系的16S rDNA基因序列完全一致；与日本的KW11和NCPPB3740、意大利PsaH108、韩国KBE9等株系存在3个碱基的差异,相似性为99.78%；与国内分离的11-830-1株系存在4个碱基的差异,相似性为99.71%。构建进化树可以看出,所分离的株系与已报道的Pseudomonas. syringae pv. actinidiae(Psa)菌株JF323029.1. JQ957916.、JX282390.1聚在同一个进化枝上。4、16S-23S rDNA-ITS序列Blast比对结果显示：与已报道的中国SXHY11-1、西班牙EFA131.1、葡萄牙PA838等株系的16S-23S rDNA-ITS序列一致；与韩国报道的引起猕猴桃溃疡病P.syringae pv. morsprunorum属LMG5075株系有2个碱基的差异。系统发育树来看,所分离的株系与P. syringae pv. actinidiae已报道的菌株JQ314412.1、JN378730.1等在同一个进化枝上,同时能与LMG5075区分开来。以上结果表明,湖南湘西地区分离的14个猕猴桃溃疡病菌致病株系均属于P. syringae pv. actinidiae。5、7种杀菌剂对猕猴桃溃疡病菌的室内毒力测定和田间药剂防治效果结果如下：室内毒力测定20%噻森铜悬浮剂抑菌效果较好,ECso为64.01 μg/mL,其次是72%农用链霉素,ECso为80.28 μg/mL。此外,50%噻唑锌·中生、85%枯菌酯·VA霉、46%氢氧化铜可杀得叁千、3%中生菌素、80%代森·锰锌的ECso值分别为129.42μg/mL、242.75 μg/mL、143.50μg/mL、256.66μg/mL、167.82μg/mL。田间喷雾试验表明,供试的7种药剂对猕猴桃溃疡病均有较好的防治效果,以20%噻森铜600倍液的防效最好,达到87.05%,其次是50%噻唑锌·中生800倍液和72%农用链霉素800倍液倍液,防效分别为85.33%和85.27%；80%代森·锰锌700倍液、46%氢氧化铜可杀得叁千1300倍液、85%枯菌酯·VA霉1300倍液、3%中生菌素1000倍液的防效较差,分别为77.30%、74.24%、72.03%、62.76%。基于以上试验,20%噻森铜600倍液、72%农用链霉素800倍液可在生产上推广应用；同时还发现大田防治中采用病斑刮除涂抹法比喷雾法效果要好。
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S436.634

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本文编号：1313622