盐胁迫下大头典竹差异蛋白组学的研究

发布时间：2017-12-22 19:26

  本文关键词：盐胁迫下大头典竹差异蛋白组学的研究　出处：《福建农林大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：高盐浓度的土壤不利于大多植被的生长,而大头典竹作为我国东南沿海成功引种的树种之一,在当地表现出较强的适应性,研究其耐盐机制尤为重要。以2年生的大头典竹为试验材料,对盆栽的大头典竹进行正常的浇水处理和浓度为0.4%、0.6%的NaCl盐溶液处理。试验经优化后的大头典竹双向电泳技术,获得盐胁迫前后蛋白差异表达谱,质谱鉴定确定差异蛋白的信息功能,为充分认识植物的耐盐机制提供理论基础。主要结果如下:(1)试验比对了 TCA丙酮法、Tris-酚抽法、三氯乙酸-丙酮法与酚抽结合法三种不同蛋白提取方法的凝胶图谱效果,同时还从胶条水化运行方式、等点聚焦程序(IEF)参数设置、蛋白上样量几个方面进行优化,获得适用于大头典竹的双向电泳体系:采用三氯乙酸-丙酮法与酚抽结合法提取叶片蛋白,17 cm pH 5-8IPG胶条在等电聚焦程序参数为65000 VH条件下,采用胶面向上、被动水化24 h的运行方式,蛋白上样量为50μL,获得的凝胶图谱重复性好,分辨率高。(2)利用优化后的适合大头典竹的双向电泳体系,获得盐胁迫前后的凝胶图谱蛋白点均为600个左右。经PDQuest8.0.1蛋白软件分析,获得在统计学上具有意义的差异蛋白点。在0.4%盐浓度胁迫下,得到34个显著的差异蛋白(12个蛋白上调,22个蛋白下调)。在0.6%盐浓度胁迫下,得到的差异蛋白有40个(13个上调,27个下调)。(3)共挑选18个差异的蛋白质谱鉴定分析,成功鉴定15个。其中,在0.4%和0.6%盐浓度胁迫下,放氧增强子蛋白1、放氧增强子蛋白3、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶、磷酸甘油酸激酶的表达量随着盐浓度的升高而增加。谷氨酰胺合成酶、抗坏血酸过氧化物酶2的表达量均表现上调。ATP合酶β亚基、ATP合酶的表达量均表现显著下调,ATP合酶α亚基表达量呈现先上调后下调的趋势。(4)对15个差异蛋白进行GO(Gene Ontology)注释和KEGG分析,大多数差异蛋白位于细胞部位,主要参与了细胞过程和代谢过程,以离子结合功能、转运活性功能、催化活性功能为主。其主要涉及到光合作用代谢通路(4个),氧化磷酸化代谢通路(3个),三羧酸代谢(5个)和光合生物中的碳固定(5个)等代谢途径。将成功鉴定的差异蛋白划分为类,涉及到光合作用相关蛋白(20%)、能量代谢相关蛋白(20%)、碳代谢相关蛋白(34%)、细胞防御蛋白相关蛋白(13%)、其它和未知蛋白(13%)。(5)试验发现核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶、谷氨酰胺合成酶(细胞防御性相关蛋白)、抗坏血酸过氧化物酶2(耐受性蛋白)在响应盐胁迫都高丰度表达,它们在大头典竹抗盐机制中可能承担重要的作用。
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S795

【参考文献】

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本文编号：1320715