木犀草素对化脓隐秘杆菌MATE基因抑制作用的研究

发布时间：2017-12-22 21:25

  本文关键词：木犀草素对化脓隐秘杆菌MATE基因抑制作用的研究　出处：《沈阳农业大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 化脓隐秘杆菌 主动外排系统 木犀草素 耐药性 耐药机制

【摘要】：化脓隐秘杆菌(Trueperellapyogenes)是一种可引起动物化脓性感染的重要病原菌,由于该菌耐药性迅猛发展,已受到学者广泛关注。主动外排系统的存在是导致细菌耐药性产生的重要因素之一,现存外排泵抑制剂(EPIs)虽能消减菌体对抗菌药的排出,却因为剂量高、副作用大而在临床应用中受到限制。本研究分析了化脓隐秘杆菌外排基因与其耐药相关性,并探究木犀草素对该菌外排基因的影响,以期为木犀草素作为抗菌新药的研发奠定基础,对减少化脓隐秘杆菌耐药性的产生具有重要意义。本研究通过分子生物学和生物信息学技术相结合的方法,对化脓隐秘杆菌MATE基因进行筛查;并对该基因所编码蛋白质的二级、三级结构及其保守结构域等进行预测分析。结果显示,化脓隐秘杆菌分离株中MATE基因的携带率为94.12%(32/34),该基因共编码436个氨基酸,相对分子量为44.94232 kD,理论等电点为10.05,总平均亲水性指数(GRAVY)为0.873;该转运蛋白最有可能分布于细胞膜上;不含信号肽序列、N-糖基化位点,含有12个跨膜区域、25个磷酸化位点;其二级结构是以α-螺旋为主的混合结构,含有2个保守结构域;未预测出较可靠的蛋白质三维结构。采用微量肉汤稀释法分别测定木犀草素和庆大霉素对34株化脓隐秘杆菌的最小抑菌浓度(MIC)。选取对庆大霉素耐药的化脓隐秘杆菌,通过棋盘法测定两种药物联合抑菌效果。经亚抑菌浓度木犀草素作用耐药菌株,比较木犀草素作用前后化脓隐秘杆菌对庆大霉素的耐药性变化情况。结果表明,木犀草素对化脓隐秘杆菌的MIC值为39～156 μg/mL,与庆大霉素联合的作用为不相关;耐药菌经亚抑菌浓度木犀草素(1/4MIC)作用36 h后,庆大霉素对耐药菌的MIC值下降2～32倍,且原菌株耐药水平越高,MIC下降倍数越高。提示木犀草素具有良好抗菌活性的体外抗菌活性,且能够消减化脓隐秘杆菌耐药性。选取8株携带MATE基因的耐庆大霉素化脓隐秘杆菌,通过荧光定量PCR扩增等方法,研究木犀草素对化脓隐秘杆菌MATE基因序列及其mRNA表达量的影响。结果发现,经亚抑菌浓度木犀草素(1/4MIC)作用后,对MATE基因的碱基序列没有变化,但MATE基因mRNA表达量均下降,且随着该基因mRNA表达量的下降,菌株MIC值亦呈下降趋势,但传代后变化趋势不明显。初步说明,木犀草素可能通过抑制化脓隐秘杆菌MATE基因mRNA的表达量而影响其耐药性。本研究从外排基因入手,预测并分析化脓隐秘杆菌MATE基因与其耐药相关性,探究木犀草素抑菌活性及其对化脓隐秘杆菌外排基因的影响,将对研究该菌耐药机制及延缓该菌耐药性的产生具有重要意义,同时为木犀草素作为新型抗菌药物的研发奠定基础。
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.61

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王瑞芬;刘里;刘希东;黄玉明;;流动注射化学发光法测定木犀草素[J];西南师范大学学报(自然科学版);2006年02期

2 白海强;刘力恒;王天文;王立升;;木犀草素研究进展[J];大众科技;2007年03期

3 夏小明;张杰;刘绣华;;木犀草素-锡(Ⅱ)配合物的合成、表征及抗氧化活性研究[J];天然产物研究与开发;2013年05期

4 李敬芬;;新型木犀草素衍生物的合成及结构表征[J];黑龙江大学自然科学学报;2009年02期

5 白海强;李敬芬;王立升;喻泽斌;黄喜寿;;3种木犀草素过渡金属配合物的合成和表征[J];桂林工学院学报;2009年04期

6 高山;程丹;胡平;;万寿菊木犀草素提取工艺优化研究[J];内蒙古师范大学学报(自然科学汉文版);2012年06期

7 汪海峰,曹锡忠,杨慧萍,李莲;花生壳甲醇提取物中木犀草素的分离与鉴定研究[J];中国粮油学报;1997年03期

8 王继双;何焱;张文静;张鹏;黄启来;华子春;;木犀草素的药理作用研究进展[J];生命科学;2013年06期

9 王倩;谢明杰;;木犀草素对金黄色葡萄球菌的抑菌活性及其机制[J];微生物学报;2010年09期

10 张志恒;李彩瑞;马晶军;吴秋华;王春;仵茜;王志;;荧光法研究木犀草素与人血清白蛋白的相互作用[J];光谱学与光谱分析;2008年05期

相关会议论文 前10条

1 刘鑫;梁健;彭树林;丁立生;顾玉诚;;长花党参中木犀草素的分离鉴定及高效液相色谱含量测定[A];中国化学会第十五届全国有机分析及生物分析学术研讨会论文集[C];2009年

2 许焕丽;杜冠华;;木犀草素对5-氟尿嘧啶抗肝癌的增敏作用及机制[A];中国药理学会第十一次全国学术会议专刊[C];2011年

3 许晶盈;邱智东;;高效液相色谱法测定安心滴丸中木犀草素的含量[A];中华中医药学会第九届制剂学术研讨会论文汇编[C];2008年

4 黄茂;范文辉;殷凯生;;木犀草素抑制支气管哮喘气道重塑作用的研究[A];中华医学会第五次全国哮喘学术会议暨中国哮喘联盟第一次大会论文汇编[C];2006年

5 梁清华;吴汉军;曾光;游万辉;;木犀草素对活化T细胞P65的调节作用[A];全国第七届中西医结合风湿病学术会议论文汇编[C];2008年

6 梁清华;吴汉军;曾光;游万辉;;木犀草素对活化T细胞P65的调节作用[A];第六届全国中西医结合基础理论研究学术研讨会暨第二届湖南省中西医结合学会肝病专业学术年会论文集[C];2010年

7 张卫;邵鹏;赵东保;李明静;刘绣华;;木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的高效液相和分光光度分析方法研究[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年

8 周星;;独一味滴丸中木犀草素和总黄酮的含量测定研究[A];海南省药学会2009年学术会议论文集[C];2009年

9 王英;王海辉;彭志芬;王路华;;RP-HPLC法测定抗宫炎片中木犀草素的含量[A];江西省中医药学会2011年学术年会论文集[C];2011年

10 梁清华;吴汉军;曾光;游万辉;熊新贵;唐涛;;木犀草素对T细胞IL-2 mRNA、INFγmRNA表达的影响[A];第九届中国中西医结合实验医学学术研讨会论文汇编[C];2009年

相关博士学位论文 前6条

1 王强;木犀草素的抗胶质母细胞瘤作用及其机制研究[D];南京大学;2016年

2 陈秀杰;四乙酰化木犀草素药动学及抗心肌缺血作用研究[D];沈阳药科大学;2010年

3 穆阿汉（Abuelnor Mohammed Mohammed Ahamed Ahamed）;木犀草素对突变亨廷顿蛋白毒性和降解的影响及其机制研究[D];华中科技大学;2012年

4 施凤超;木犀草素抗骨关节炎的作用机制研究[D];苏州大学;2015年

5 乔会敏;木犀草素对实验性脑缺血大鼠的脑保护作用及机制研究[D];河北医科大学;2012年

6 傅s，

本文编号：1321088