鸽源新城疫病毒的遗传进化分析及其免疫原性研究

发布时间：2017-12-23 13:31

本文关键词：鸽源新城疫病毒的遗传进化分析及其免疫原性研究　出处：《中国农业科学院》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)可以引起多种禽类发生急性、烈性、败血性、高度接触性传染病。近年来,鸽中流行的新城疫(Newcastle disease,ND)出现了越来越严重的趋势,由于鸽的活动范围较广,其携带的病原严重威胁养禽业健康发展。对鸽源ND进行遗传进化分析及免疫原性研究,对养禽业的健康发展具有重要意义。新城疫严重危害世界各国养禽业,受到各国政府的高度重视。本实验设计了一对NDV通用鉴定引物,对分离自不同地区的8株NDV进行扩增,通过对F基因分型相关序列的生物遗传进化分析进行了基因分型。经遗传进化分析,Du/China/SD/133株和Ch/China/SD/128株属于classⅡ基因Ⅶ型;Du/China/SD/143株属于classⅠ;Ch/China/SD/125株的病料中发现了classⅠ和classⅡ基因Ⅶ型ND的混合感染;Pi/China/SD/2012/132(ND132)、Pi/China/SH/2013/163(ND163)、Pi/China/SH/2013/167(ND167)、Pi/China/SH/2013/168株(ND168)四个鸽源毒株属于classⅡ基因Ⅵb亚型。我们在ND163和ND168的病料中检测到与La Sota高度同源的基因Ⅱ型毒株的混合感染,推测源于鸽场La Sota弱毒免疫,暗示La Sota疫苗不能对鸽ND起到较好保护效果。为了确定目前中国鸽ND主要流行毒株的遗传进化关系,本实验设计了一套NDV全基因组扩增引物,对分离自上海和山东的4株鸽源NDV毒株进行了全基因序列测定和分析。各基因的遗传进化分析结果显示,四个鸽源NDV毒株与中国其它流行株一样属于ClassⅡ基因Ⅵb型,与欧洲鸽源分离株亲缘关系很近,暗示可能是由赛鸽比赛等途径由欧洲传到中国。四株鸽源病毒F蛋白和HN蛋白均符合强毒株的显著序列特征,与鸡NDV抗原性和疏水性整体差异不大,但有一些重要的抗原表位已经发生了改变。对鸽源毒株的遗传进化分析,为鸽源新城疫疫苗的研发提供了理论基础。为了确定鸡源NDV疫苗株和目前鸽源流行株是否存在免疫原性差异,本研究比较了La Sota与鸽源分离株的血清学差异以及免疫保护能力。结果显示用ND167制备的鸽源NDV灭活油乳剂疫苗不能对免疫鸽产生理想的保护力。血清学实验结果表明鸽源强毒株与La Sota的抗原性差异显著,与生物信息学分析结果有所差异,暗示鸽源NDV某些氨基酸位点的改变可能影响了抗原蛋白的空间表位。因此,在实践中使用La Sota弱毒疫苗对鸽进行免疫存在免疫失败的风险,鸽专用NDV疫苗的研发迫在眉睫,以促进养鸽业健康发展。为了比较鸽源ND流行株与鸡源ND经典疫苗株的免疫原性差异,本研究进行了鸽源毒株抗原特异性单克隆抗体制备的研究。利用分离自上海的鸽源新城疫毒株ND167作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,并获得四株单克隆抗体。交叉ELISA结果显示,四株单克隆抗体针对不同新城疫病毒的反应性有较大差异,不同单抗对La Sota毒株的ELISA效价差异在500倍以上。本研究获得了针对鸽源新城疫特异性抗原表位的单克隆抗体,为后续筛选鸽源毒株特异性抗原表位奠定了基础,为临床生产中鸽新城疫的诊断和免疫原性分析提供技术支持。
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.65

【参考文献】