当前位置:主页 > 硕博论文 > 农业硕士论文 >

SRBSDV在水稻原生质体内的复制与表达

发布时间:2017-12-24 06:06

  本文关键词:SRBSDV在水稻原生质体内的复制与表达 出处:《福建农林大学》2015年硕士论文 论文类型:学位论文


  更多相关文章: 南方水稻黑条矮缩病毒 水稻原生质体 抗体 免疫荧光技术 实时荧光定量PCR Western Blot


【摘要】:南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus, SRBSDV)由介体白背飞虱以持久增殖型传播,该病毒已成为威胁我国水稻产量的重要的病毒之一。本文通过酶解法获得有较高活性的水稻原生质体,建立病毒侵染原生质体系,将抗体与荧光素交联,利用抗体与抗原特异性结合原理,通过激光共聚焦显微镜观察病毒在原生质体内的复制及表达。同时通过实时荧光定量PCR以及Western blot检测病毒相关基因转录及其蛋白的表达动态。首先通过Gateway系统进行原核表达,免疫兔子获得SRBSDV结构蛋白P10和非结构蛋白P9-1的抗血清,间接ELISA测定其效价分别为6400倍和3200倍,Western blot检测结果表明两个抗体均可特异性检测感病毒株。利用IC-RT-PCR和Dot-blot ELISA方法来检验两个抗体的灵敏度,两者的检测结果表现一致,说明SRBSDV的P9-1蛋白的抗体及P10蛋白的抗体具有较强的灵敏度。利用PEG介导SRBSDV病毒侵染原生质体,培养48h后利用荧光素交联的P9-1、P10抗体进行孵育,共聚焦显微镜下观察发现,P10蛋白的表达量少于P9-1蛋白表达量。通过荧光定量PCR检测结果显示,SRBSDV的S5-1、S5-2、S6、S7-2、S9-1、S9-2基因在原生质体内36h左右表达达到高峰,S7-1以及S10基因在水稻原生质体内48h左右表达达到峰值。而通过Western blot检测结果显示,SRBSDV的P5-1、P6、P9-1蛋白在原生质体内48h左右表达达到高峰,P7-1及P10蛋白在原生质体内60h左右表达达到高峰。
【学位授予单位】:福建农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:S435.111.4

【相似文献】

相关期刊论文 前1条

1 潘凤英;周长海;王灿灿;周瑞阳;;水稻光温敏不育系对SRBSDV的抗性与内源激素的关系分析[J];中国农业大学学报;2013年03期

相关会议论文 前1条

1 卢嫣红;徐秋芳;熊如意;周益军;;RBSDV和SRBSDV非结构蛋白沉默抑制子功能研究[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年

相关硕士学位论文 前4条

1 吴锦鸿;SRBSDV在水稻原生质体内的复制与表达[D];福建农林大学;2015年

2 李祥宇;RBSDV和SRBSDV安徽分离物全基因组特征及SRBSDV mp基因的功能分析[D];安徽农业大学;2013年

3 赵成金;RNAi介导抗RBSDV和SRBSDV转基因水稻的研究[D];中国农业科学院;2014年

4 姚景海;SRBSDV和RBSDV检测技术的建立[D];福建农林大学;2014年



本文编号:1327153

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/1327153.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户02697***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com