猫疱疹病毒Ⅰ型gI基因序列分析及PCR检测方法的建立
本文关键词：猫疱疹病毒Ⅰ型gI基因序列分析及PCR检测方法的建立 出处：《内蒙古农业大学》2017年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：猫病毒性鼻气管炎(Feline viral rhinotracheitis,FVR)又称猫传染性鼻气管炎,是由猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus type 1,FHV-1)引起猫科动物的一种急性高度接触性传染病,以上呼吸道症状为特征。主要侵害幼猫,发病率可高达100%,病死率50%。成年猫也可感染但病死率低,康复动物多成为带毒动物可间歇性向体外排毒。该病在临床症状上很难与猫其它上呼吸道疾病鉴别,目前兽医临床对该病尚未有快速准确的诊断方法,只能通过较为复杂繁琐的实验室诊断来确诊该病。但无论病原分离培养还是血清学诊断,因实验周期长、敏感性差等原因均未大范围的应用于临床。PCR诊断方法克服了传统实验室诊断的诸多弊端是诊断该病较为理想的方法。本实验旨在建立一种特异性强、敏感性高的检测FHV-1的PCR方法。根据GenBank发表的FHV-1基因序列选取gI基因为靶基因设计合成特异性引物,对疑似病料进行PCR扩增并克隆FHV-1 gI全基因和制备标准阳性质粒。对已建立的PCR诊断方法进行优化同时对已优化PCR诊断方法进行敏感性、特异性、重复性试验验证,并依赖本实验建立的FHV-1 PCR方法对46份临床样本进行检测。结果成功从疑似病料中扩增出FHV-1 gI基因并对其克隆制备标准阳性质粒,对质粒测序分析显示所克隆的FHV-1 gI基因全长1155 bp与FHV-1各分离株同源性均在99.7%以上,进化树分析结果显示与澳大利亚株(KR381787.1)亲缘关系最近。同时对PCR方法优化确定最佳退火温度为56℃C,最低检测DNA模板浓度为3.23×103 copies/μL(即最低可检测136.5 fg/μL的目标DNA)。在特异性检测方面该方法可特异性检出FHV-1无法检出犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、绵羊肺炎支原体(Movis)、牛支原体(M.bovis)、牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)。另外运用本实验所建立的PCR诊断方法对46份临床待检样本进行检测,检出阳性为28份,阳性率为60.87%,对阳性样本PCR产物进行序列分析与GenBank登录的FHV-1代表株同源性均为99%以上。表明所建立的PCR诊断方法具有特异性强,敏感性高的特点,可运用于临床样本的快速、准确的检测。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.65
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，本文编号：1328973
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