蔗糖、乳糖对猪精液低温（4℃）及冷冻保存的影响

发布时间：2018-01-05 13:24

本文关键词：蔗糖、乳糖对猪精液低温（4℃）及冷冻保存的影响　出处：《沈阳农业大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：由于常温保存的猪精液人工输精后受胎率和窝产仔数接近自然配种,所以至今为止常温保存精液在猪人工授精中应用最为普遍,但其应用受时间和公猪年龄限制,不利于育种和品种改良。猪精液低温及冷冻保存能克服常温保存的弱点,但人工输精后受胎率和窝产仔数都不太理想。其主要原因在于低温及冷冻保存后精子的品质降低,而保存精子品质受诸多因素的影响。因此,本试验研究了稀释液配方、新鲜精液运输过程、稀释方法、降温方式等对猪精液低温(4℃)保存的影响。在此基础上,继续探讨了冷冻稀释液配方、平衡时间及冷冻工艺等诸多因素对猪精液冷冻保存的影响。其试验结果如下:1.人工采精后,将盛装精液的塑料瓶用毛巾包裹后放入泡沫箱运回实验室,其精子活率显著高于其他各组(P0.05)。将鲜精与BF5稀释液按1:2比例稀释,用4层毛巾包裹法降温至4℃,在此温度下精子的有效存保存时间达5d,此时精子的活率、质膜完整率和顶体完整率分别为47.25%、49.05%和55.03%,显著高于其他各组(P0.05)。2.用SGY、LGY及BF5三个配方低温(4℃)保存猪精液,保存的第2 d至第7 d为止BF5组的精子活率显著高于LGY组(P0.05),但与SGY组基本上无显著差异(P0.05)。当SGY和LGY稀释液中添加不同浓度EDTANa2时,从保存的开始至第4d SGY+0.05%EDTANa2组的精子活率、质膜完整率和顶体完整率均显著高于0.0%组、0.15%组、0.25%组及BF5组。SGY+0.05%EDTANa2组的精子有效保存7 d,此时精子的活率和质膜完整率最高,分别为42.53%和43.11%。3.用 SGYG、LGYG、BF5G、SGYGO、LGYGO、BF5GO 六个配方冷冻猪精液,冷冻解冻后精子各项指标,冷冻保存液中同时添加甘油和OEP组显著高于相对应只添加甘油组(P0.05);LGYGO组冷冻保存的精子活率、质膜完整率和顶体完整率(30.22%、34.28%和 39.41%)显著高于 SGYGO 组和 BF5GO 组(P0.05)。4.LGYGO中甘油的浓度调整为4.5%时,冷冻解冻后精子的活率、质膜完整率和顶体完整率显著高于3.0%组、3.75%组及5.25%组(P0.05)。4.5%组精子活率、质膜完整率和顶体完整率分别为38.98%、41.93%和45.28%。5.LGYGO中OEP的浓度调整为0.75%时,冷冻解冻后精子的活率、质膜完整率和顶体完整率分别为40.51%、43.87%和49.01%,均显著高于0.5%组、1.0%组及1.25%组(P0.05)。6.LGYGO中乳糖的浓度调整为3.5%时,冷冻解冻后精子品质的3项指标均显著高于7.0%组和11.0%组(P0.05),3.5%组的精子活率、质膜完整率和顶体完整率分别为38.86%、43.82%和 47.72%。7.冷冻前精液平衡分别设定为0h、1h、2h及3 h时,冷冻解冻后精子的各项指标1 h组和2 h组均显著高于0 h组和3 h组(P0.05),但1 h组与2 h组间差异不显著(P0.05)。平衡2 h后冷冻解冻的精子活率、质膜完整率和顶体完整率分别为39.06%、46.18%和 48.78%。8.冷冻的精液用38℃孵育20 s组的方法解冻,其精子活率、质膜完整率和顶体完整率显著高于45℃孵育20 s组和70℃孵育5 s组(P0.05)9.平衡后精液置于3 cm处熏蒸冷冻,解冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率,分别为43.09%、46.79%和47.92%,均显著高于5 cm组和8 cm组(P0.05)。10.将平衡后的精液在距液氮面3 cm处熏蒸冷冻,解冻后精子的各项指标,熏蒸9 min组和11 min组显著高于熏蒸7 min组和5 min组(P0.05),熏蒸9 min组精子活率、质膜完整率和顶体完整率分别为47.83%、55.79%和63.13%,几乎与熏蒸11 min组相等(P0.05)。11.将平衡后的精液分别装入0.25 mL和0.5 mL细管,冷冻解冻后0.5 mL细管组精子活率、质膜完整率和顶体完整率分别为51.83%、57.53%和63.24%,均显著高于0.25 mL细管组(P0.05)。以上试验结果表明:1.在低温(4℃)保存精液时,用泡沫箱和毛巾组合运输精液,选用SGY+0.05%EDTANa2稀释液,按1:2比例稀释精液后用四层毛巾包裹降温,得到较好的保存效果。2.在冷冻保存精液时,使用含3.5%乳糖、4.5%甘油、0.75%OEP的LGYGO,精液用0.5 mL细管包装,平衡时间2 h,放线速度30 s,距离液氮面3 cm处熏蒸9 min,38℃水浴解冻孵育20 s,可得到较高冷冻保存效果。
[Abstract]:The results were as follows : 1 . The sperm viability was significantly higher than that in other groups ( P0.05 ) . The sperm motility , the intact rate of plasma membrane and the intact rate of acrosome were 38.86 % , 43.87 % and 47.72 % , respectively . The sperm motility , the intact rate of plasma membrane and the intact rate of acrosome were 47.83 % , 55.79 % and 63.24 % , respectively .

【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S828

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