尼罗罗非鱼Ly75基因的克

发布时间：2018-03-05 17:04

  本文选题：尼罗罗非鱼　切入点：淋巴细胞抗原　出处：《生物技术》2017年03期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：[目的]获得尼罗罗非鱼淋巴细胞抗原75(OnLy75)基因的cDNA序列和多克隆抗体。[方法]采用RACE技术克隆OnLy75基因的cDNA全序列,通过DNAMAN、MEGA等软件分析其序列特征;构建OnLy75的原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核诱导表达;将纯化后的OnLy75重组蛋白免疫新西兰大耳白兔,并通过Western Blot技术检测多克隆抗体的效果。[结果]OnLy75的cDNA序列全长为6 632 bp,开放阅读框5 199 bp,编码1 732个氨基酸。其OnLy75重组蛋白主要存在于包涵体中;将重组蛋白纯化后免疫新西兰大耳白兔,成功获得了兔抗OnLy75多克隆抗体。用该多抗对尼罗罗非鱼不同器官进行Western Blot内源性检测,结果显示该蛋白在精巢中有丰富的表达。[结论]兔抗OnLy75多克隆抗体的成功制备,为进一步深入研究OnLy75在尼罗罗非鱼组织中的定位及功能研究提供了工具。
[Abstract]:[objective] to obtain the cDNA sequence and polyclonal antibody of the lymphocytic antigen 75on Ly75 gene of tilapia niloticus. [methods] the whole cDNA sequence of OnLy75 gene was cloned by RACE technique, the sequence characteristics were analyzed by DNAMANMAGA-MEGA, and the prokaryotic expression vector of OnLy75 was constructed. The recombinant protein was induced by prokaryotic expression and purified OnLy75 recombinant protein was immunized with New Zealand white rabbit. The effect of polyclonal antibody was detected by Western Blot. [results] the cDNA sequence of OnLy75 was 6 632 BP, open reading frame 5 199 BP, encoding 1 732 amino acids. Its OnLy75 recombinant protein mainly existed in inclusion body. The purified recombinant protein was used to immunize New Zealand white rabbits with OnLy75 polyclonal antibody, which was used to detect Western Blot in different organs of Nile tilapia (Tilapia niloticus). [conclusion] the successful preparation of rabbit polyclonal antibody against OnLy75 provides a tool for further study on the localization and function of OnLy75 in tilapia niloticus tissue.
【作者单位】： 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室;上海海洋大学水产与生命学院;
【基金】：现代农业产业技术体系专项资金-罗非鱼产业技术体系(CARS-49) 国家自然科学基金项目(No.31502205) 广东省自然科学基金项目(No.2014A030310337)
【分类号】：Q78

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本文编号：1571128