免疫亲和质谱法鉴定大豆β-Conglycinin抗原表位

发布时间：2018-03-18 05:33

  本文选题：β-Conglycinin　切入点：抗原表位　出处：《吉林农业大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：β-Conglycinin是大豆籽实中主要的抗营养因子之一,但不同种属动物对大豆的过敏反应强度不尽相同。因此本论文在获得大鼠、仔猪、犊牛抗β-Conglycinin血清中的IgG后,采用免疫亲和质谱法对大豆β-Conglycinin的酶解肽段上的IgG抗原的线性及构象表位进行鉴定与筛选。本论文进一步揭示了大豆抗原蛋白抗原表位的氨基酸序列,可以对日后单克隆抗体的制备、饲料原料中抗原蛋白含量的降低、动物种属间致敏差异、动物致敏机理的研究等工作起指导性作用。试验Ⅰ:大鼠、仔猪、犊牛过敏血清中IgG的纯化本试验采用亲和层析的方法,使用亲和层析柱对三种过敏血清进行纯化,并用直接ELISA法检测获得的IgG。结果显示,大鼠、仔猪、犊牛这三种对大豆敏感的动物所产生的过敏血清在经过亲和层析柱后均存在洗脱峰,且峰值高低存在差异。ELISA结果表明大鼠、仔猪、犊牛血清纯化的洗脱峰中均含有抗β-Conglycinin的特异性IgG。以上结果表明大鼠、仔猪、犊牛三种动物均能产生特异性IgG。试验Ⅱ:免疫亲和质谱法鉴定大豆β-Conglycinin抗原表位本试验采取两种方法获得β-Conglycinin的抗原表位,一种方法是将β-Conglycinin先酶解后进行免疫共沉淀。另一种方法是将和三种动物特异性IgG进行免疫共沉淀后酶解。获得的β-Conglycinin抗原片段委托华大蛋白进行Q-E质谱检测,检测结果与NCBI上β-Conglycinin的三个亚基进行比对(序列号为:P13916、P11827和P25974)。结果显示,两种方法均能有效的筛选酶解后的β-Conglycinin片段中的抗原表位部分。三种动物之间抗原表位虽然有很大一部分为相同或相似的氨基酸序列,但仍有一部分抗原表位的氨基酸序列存在着很大的差异,有些表位为猪所独有的,如LFEITQR,有些表位是大鼠独有的表位,如HEWQHKQEK。其中犊牛和大鼠线性表位较为相似,而仔猪的线性表位与两者差异较大。综上所述,犊牛,仔猪,大鼠三种动物产生抗β-Conglycinin的特异性Ig G的效价存在差异,且β-Conglycinin致敏不同种属动物时起作用的抗原表位存在着差异。以上试验结果为进一步揭示β-Conglycinin对不同种属幼龄动物致敏性差异的机理提供理论基础,同时可以为检测试剂盒的研发提供依据。
[Abstract]:尾 -Conglycinin is one of the main anti-nutritional factors in soybean seed, but the intensity of allergic reaction to soybean is different among different species of animals. Therefore, the IgG in rat, piglets and calves against 尾 -Conglycinin serum was obtained in this paper. The linear and conformational epitopes of soybean 尾 -Conglycinin peptides were identified and screened by immuno-affinity mass spectrometry. The amino acid sequences of soybean protein epitopes were further revealed. It can guide the preparation of monoclonal antibody, the decrease of antigen protein content in feed raw material, the difference of sensitizing between species and species, the study of animal sensitization mechanism, etc. Test 鈪，

本文编号：1628250