NNV来源的蛋白转导域入侵机制的研究

发布时间：2018-04-16 21:24

本文选题：蛋白转导域 + 神经坏死病毒　；参考：《中山大学》2017年硕士论文

【摘要】：病毒性神经坏死病(Viral nervous necrosis,VNN)是一种严重危害海水鱼类养殖的疾病,主要感染鱼类仔鱼期和稚鱼期,鱼类一旦受到感染,就会造成80%-100%的死亡率,进而给鱼类养殖业造成重大的经济损失。病毒性神经坏死病的病原体是神经坏死病毒(nervous necrosis virus,NNV),是一类二十面体,非囊膜包被的RNA病毒。目前对于VNN的免疫治疗主要是通过疫苗免疫,如重组蛋白,DNA疫苗等,或通过抗NNV生物大分子,例如siRNA,抗病毒多肽等。但是药物的治疗效果往往受到药物运输的影响会大打折扣,尤其是体内导入时细胞膜等屏障的阻隔。因此如何在保证药物有效浓度的情况下,使这些生物大分子药物能够穿透细胞膜屏障,精确地到达靶标部位,发挥其治疗作用,是一个值得深入研究的课题。本实验室在斜带石斑鱼神经坏死病毒(orange-spotted grouper nervous necrosis virus,OGNNV)的衣壳蛋白(capsid protein,CP)所形成的类病毒粒子(virus-like particle,VLP)基础上,发现了位于OGNNV-CP的N端其中14个氨基酸的序列具有蛋白转导域功能(protein transduction domain,PTD),并命名为NNV-PTD。将NNV-PTD与蛋白融合表达,发现它可以将融合蛋白转运进亚洲海鲈胚胎全细胞(Asian sea bass,SB)。本文通过将NNV-PTD删除或者转移到CP的C末端,发现NNV-PTD对于OGNNV-VLP立体结构的形成不具有决定性的作用,CP仍然可以形成颗粒结构,并且可以进入SB细胞。进一步对NNV-PTD的细胞导入机制研究发现,NNV-PTD是通过内吞途径进入细胞,因为在4℃时,NNV-PTD不能转运进SB细胞。通过化学抑制剂实验,证实了NNV-PTD是通过网格蛋白介导的内吞途径进入SB细胞,并且依赖于细胞骨架、pH值、发动蛋白、脂质和胆固醇等因素。同时,NNV-PTD也通过巨胞饮途径进入SB细胞,且该途径中巨胞饮体的形成是肌球蛋白Ⅱ依赖性的。这一点与VLP仅依赖于网格蛋白介导内吞途径而与巨胞饮途径无关的方式入侵SB细胞是有差别的。通过细胞筛选实验我们发现,NNV-PTD可以进入多种细胞系,包括昆虫细胞S2和SF9,鱼类细胞GB、SSN-1和MFF-1,哺乳类细胞Hela。说明了NNV-PTD的适用性很广泛,作为一种新的蛋白转导域具有很大的潜力,可以为抗病毒生物大分子类药物穿越细胞膜屏障,达到靶标部位,发挥治疗作用提供可能。本研究阐述了NNV-PTD的入侵机制和依赖因素,不仅为其导入应用提供理论依据,而且为VNN的预防和治疗提供了新的思路和应用。
[Abstract]:Viral - like particle ( NNV ) is a kind of viral - like particle ( NNV ) , which is a kind of virus - like particle ( NNV ) . It was found that NNV - pD can enter SB cells through endocytosis , and it can be used as a new protein transduction domain . It is suggested that NNV - pis a new protein transduction domain , and it can be used as a new protein transduction domain .

【学位授予单位】：中山大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S941.4

【参考文献】