鱼类万古霉素检测方法的建立及在鲫鱼体内药代动力学研究

发布时间：2018-05-30 16:25

本文选题：万古霉素 + 去甲万古霉素　；参考：《上海海洋大学》2017年硕士论文

【摘要】：抗生素的问世给人类带来划时代的意义,随着不断的研发和使用,抗生素被广泛应用于临床、农业和畜牧业中,用来治疗很多感染性疾病并抵抗病虫害等。但抗生素的滥用却给人类带来了毁灭性的灾难,导致细菌耐药性增长,临床治疗效力降低,环境污染以及一系列疾病的产生。因此目前各国针对抗生素建立了各项国家检测标准以及抗生素滥用的相关规制。万古霉素和去甲万古霉素药物属于糖肽类抗生素,其化学结构、药理性质和抗菌作用相似,被广泛应用于治疗细菌感染,特别是一些超级细菌。万古霉素和去甲万古霉素对革兰氏阳性菌具有强大的抗菌作用。因其疗效肯定,目前万古霉素已成为治疗耐药葡萄球菌和耐甲氧西林葡萄球菌重感染的首选药物。但过量的万古霉素和去甲万古霉素可导致严重的耳中毒和肾中毒,并且若食用含有万古霉素类药物的动物源食品会导致万古霉素在体内蓄积,造成耐药细菌的产生,危害人类健康。本论文首先建立了鱼类中糖肽类抗生素万古霉素和去甲万古霉素残留量的双固相萃取/高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。样品经0.1%甲酸溶液-乙腈混合溶液(7∶3,V/V)提取,乙腈饱和的正己烷去脂,固相萃取柱C18及PCX净化,在多反应监测(MRM)正离子模式下进行检测,首次使用双去氯万古霉素作为内标物,内标法定量。实验结果表明,万古霉素和去甲万古霉素在2~250 ng/m L范围内呈良好的线性关系,相关系数(r~2)大于0.99。在5、25、100μg/kg 3个添加水平下平均回收率为92.8%~96.5%,相对标准偏差在4.48%~6.93%(n=5)之间。方法检出限(LOD)为2.0μg/kg,定量限(LOQ)为5.0μg/kg。方法适用于鱼类中糖肽类抗生素万古霉素和去甲万古霉素残留量的测定。其次应用该方法考察万古霉素、去甲万古霉素和双去氯万古霉素溶液在0.1%甲酸溶液和甲醇溶液溶解的溶解效率以及在冷冻避光保存、冷藏避光保存、常温避光保存和常温不避光保存4种不同贮藏条件下的稳定性。结果发现万古霉素、去甲万古霉素和双去氯万古霉素在0.1%甲酸水溶液中的溶解效果最好,并且在冷藏避光保存的条件下保藏效果更佳。其中万古霉素、去甲万古霉素和双去氯万古霉素用0.1%甲酸水溶液溶解后在冷冻和冷藏保存条件下区别不大,同时避光保存的条件下,灵敏度要高于不避光保存,其中双去氯万古霉素的稳定性相较于万古霉素和去甲万古霉素表现最差,受其贮藏天数和贮藏环境的影响变化最大。最后,在(18±1)℃水温条件下,按1mg/kg鱼体重的剂量口灌万古霉素,研究了万古霉素在鲫鱼体内的药代动力学特征及残留消除规律。采用高效液相色谱-串联质谱法测定万古霉素在鲫鱼肌肉、血液、肝脏和肾脏中的浓度,数据经DAS 3.0.5药动学程序分析。结果表明:鲫鱼单剂量口灌万古霉素1mg/kg,血液经时过程符合二室开放模型。主要药代动力学参数为:吸收速率常数Ka3.745;消除半衰期t_(1/2β)189.521h;药时曲线下面积AUC15.121mg·h/L;达峰时间T_(max)3h,达峰浓度C_(max)216.58μg/L。研究发现在肝脏和肾脏中万古霉素的浓度要明显高于肌肉和血液,其中以肝脏中的富集浓度最高达到632.5μg/kg,其次是肾脏、肌肉和血液。万古霉素在鲫鱼肌肉、血液和肝脏中更容易吸收,且达峰时间短T_(max)3h,肾脏中达峰时间为72h。本研究中万古霉素在鲫鱼肝脏和肾脏内的消除十分缓慢,消除半衰期远远大于肌肉和血液。肌肉、血液、肝脏和肾脏的消除半衰期t_(1/2β)分别为39.337h、189.521h、636.834h、627.195h,并且肝脏和肾脏中的总体清除率CLs为0.003L/h/kg和0.006L/h/kg。本实验分析万古霉素在鲫鱼体内主要组织的药物代谢过程和消除规律,为各部门开展万古霉素的相关监督检测提供方法和科学依据。
[Abstract]:The results show that vancomycin and norvancomycin are widely used in clinical , agricultural and animal husbandry to treat many infectious diseases and resist diseases and pests . The concentrations of vancomycin in liver and kidney were analyzed by DAS 3.0 . 5 . The results showed that the concentration of vancomycin in liver and kidney was significantly higher than that in muscle and blood .
【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S948;TS254.7

【参考文献】