人牙龈间充质干细胞治疗慢性移植物抗宿主病的实验研究

  本文关键词：鸭胚间充质干细胞生物学特性及其移植修复肝损伤研究，由笔耕文化传播整理发布。

《苏州大学》 2016年

人牙龈间充质干细胞治疗慢性移植物抗宿主病的实验研究

张楷  

【摘要】：目的:本课题通过从人牙龈组织提取牙龈间充质干细胞(GMSCs),鉴定其表型并比较其与骨髓间充质干细胞(BMSCs)、脂肪间充质干细胞(ASCs)在体内与体外免疫调节功能的差异;分析其在体外对B淋巴细胞增殖与分化的调节功能,并探讨其相关的分子机制;同时建立慢性移植物抗宿主病小鼠模型,并向其体内输注GMSCs,观察GMSCs在体内对慢性移植物抗宿主病的治疗作用,从而为间充质干细胞治疗相关免疫疾病提供实验依据。方法:分别从人体组织分离出GMSCs,BMSCs与ASCs,在体外培养扩增并鉴定其表型。将三种间充质干细胞分别与T细胞共培养,加入CD3/CD28磁珠,检测其在体外抑制T细胞扩增的功能;NOD小鼠输注人外周血单核细胞建立异种GVHD模型,分别从尾静脉输注以上三种间充质干细胞,比较其体内免疫调节功能。为了研究GMSCs对B细胞的调节作用,分选人B细胞,在CD40L与IL-4的作用下,与GMSCs共同培养,以纤维组织母细胞(Fibroblast)为对照,流式细胞仪检测B细胞扩增情况,细胞因子流式分析和酶联免疫吸附测定检测相关因子和免疫球蛋白的表达水平以及B细胞分化为浆细胞或调节性B细胞的情况。由于B细胞能够作为抗原提呈细胞激活T细胞的增生,将处理后的B细胞与T细胞在抗CD3抗体的作用下共培养,检测B细胞介导的T细胞活化与增殖的情况,最后在B细胞与牙龈间充质干细胞的共培养体系中,加入多种免疫相关信号蛋白的中和抗体,探讨相关分子机制。在体内实验中,建立人源化的小鼠慢性移植物抗宿主病模型,从尾静脉输注GMSCs,分析相关免疫性疾病的发展情况与严重度变化。结果:我们成功在体外提取并培养出具有功能且表型正常的GMSCs,它较BMSCs与ASCs有更强的免疫调节功能和体外扩增能力。GMSCs能够在体外抑制B细胞的增殖,而这种效应不需要依赖细胞接触就能够实现;GMSCs能够降低浆细胞的生成,促进B细胞向调节性B细胞的分化;GMSCs还能够降低B细胞表达免疫球蛋白水平,增加其抗炎症因子的分泌。机制研究发现TGF-β受体抗体ALK5能够有效拮抗GMSCs的免疫调节功能。在体内实验中,建立了人源化小鼠模型,从尾静脉输注GMSCs能够有效治疗B细胞介导的慢性移植物抗宿主病。结论:本研究在体外培养出GMSCs,证实了其在调节B细胞增殖、分化与功能等方面的作用;同时在体内实验中,GMSCs能够有效治疗慢性移植物抗宿主病损伤。机制研究表明其免疫调节功能与TGF-β信号有关。本研究将为间充质干细胞治疗相关免疫性疾病提供新的细胞来源和思路。

【关键词】：
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R617
【目录】：

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