鸭胚间充质干细胞生物学特性及其移植修复肝损伤研究

发布时间：2016-12-08 19:33

  本文关键词：鸭胚间充质干细胞生物学特性及其移植修复肝损伤研究，由笔耕文化传播整理发布。

《中国农业科学院》 2015年

鸭胚间充质干细胞生物学特性及其移植修复肝损伤研究

王文杰  

【摘要】：动物遗传资源的多样性对于人类生存和经济发展至关重要。因此,对动物遗传资源的保存也变得尤为重要。由于干细胞具有“无限”增殖和自我更新的特点,以干细胞的形式来保存动物的遗传资源已得到广泛应用。本试验建立了适于鸭胚间充质干细胞体外扩增培养体系,通过对其生物学特性的研究,以及细胞治疗小鼠肝损伤的研究,为动物遗传资源的保存利用提供了理论和实验依据,并为利用干细胞进行细胞治疗奠定了基础。得到以下结果:1.采用胶原酶Ⅳ消化法分离鸭胚脐带间充质干细胞,在体外可传代培养到39代。细胞形态以长梭形为主;对纯化细胞进行间充质干细胞表面分子标志鉴定,免疫荧光检测显示CD29和CD44表达阳性,RT-PCR结果显示不同代次细胞的CD44,CD71,CD73均表达阳性。以上结果证明,所分离的细胞为脐带间充质干细胞。利用成骨诱导液对肝间充质干细胞进行诱导分化,诱导后的细胞进行茜素红染色呈阳性,RT-PCR检测到成骨细胞特异性分子标记Collagen typeⅠ和Osteopontin;利用脂肪诱导液对肝间充质干细胞进行诱导分化,诱导后的细胞进行油红O染色可见到红色脂滴,RT-PCR检测到脂肪细胞特异性分子标记LPL和PPAR-γ,结果表明,脐带间充质干细胞具有多潜能性。2.采用胶原酶Ⅳ消化法分离鸭胚肝脏间充质干细胞,在体外可传代培养到56代。细胞形态以长梭形和不规则形为主,混有少量圆形细胞,细胞核较小;生长曲线显示细胞具有较强的增殖能力;对纯化细胞进行间充质干细胞表面分子标志鉴定,免疫荧光检测显示CD44,CD105,CD166,IL-7表达阳性,RT-PCR结果显示不同代次细胞的CD71,CD73,SOX2,KLF4均表达阳性。以上结果证明,所分离的细胞为肝间充质干细胞。利用成骨诱导液对肝脏间充质干细胞进行诱导分化,诱导后的细胞进行茜素红染色呈阳性,RT-PCR检测到成骨细胞特异性分子标记Collagen typeⅠ和Osteopontin;利用脂肪诱导液对肝间充质干细胞进行诱导分化,诱导后的细胞进行油红O染色可见到红色脂滴,RT-PCR检测到脂肪细胞特异性分子标记LPL和PPAR-γ;利用肝样细胞诱导液对肝间充质干细胞进行诱导分化,诱导后的细胞进行糖原染色呈阳性,RT-PCR检测到肝细胞表面标志物AFP和ALB。结果表明,肝脏间充质干细胞具有多潜能性,可向不同胚层细胞进行分化。3.采用CCl4灌胃法制作肝损伤小鼠模型,HE染色和MT染色显示肝组织正常结构被破坏,肝纤维组织增生,血清学检测发现AST和ALT值均明显超出正常范围。对诱导后的肝样细胞进行CM-Dil标记,将标记后的细胞经尾静脉注射到肝损伤小鼠体内,组织学和血清学检测均显示肝损伤有所恢复。结果表明,诱导后的肝样细胞对小鼠肝损伤具有一定的治疗作用。综上所述,本实验在体外成功分离培养了鸭胚间充质干细胞,并对其生物学特性进行了研究,将诱导后的肝样细胞注射到肝损伤小鼠体内,小鼠的肝损伤得到一定程度的恢复。以上结果验证了干细胞的自我更新能力和多潜能性,对动物遗传资源的保存具有重要意义,并初步地为干细胞在临床上的应用提供实验依据。

【关键词】：
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S813;Q813
【目录】：

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