能量水平对阿勒泰羔羊脂肪代谢的影响

发布时间：2020-10-29 21:04

　　 为满足人们对健康优质羊肉的需求,本试验旨在研究不同能量水平对阿勒泰羔羊血清脂质指标、脂肪沉积分布、脂肪细胞大小、脂肪代谢相关基因mRNA表达,进一步利用iTRAQ蛋白组学技术筛选与脂肪代谢相关的蛋白及其通路,为脂肪代谢的调控提供数据参考。选取月龄相近(3~3.5月龄)、体重接近(19.16±0.54)kg、臀型一致、健康状况良好的阿勒泰母羔30只,随机分为3组,每组10只羊,自由采食60 d后,分别按照50%(0.25 MJ/W~(0.75)×~(d-1))(50%代谢能组)、100%(0.5 MJ/W~(0.75)×d~(-1))(100%代谢能组)和150%(0.75 MJ/W~(0.75)×d~(-1))(150%代谢能组)的维持代谢能饲喂30 d。结果表明:(1)能量水平对阿勒泰羊的血清脂质指标具有显著影响。在不同能量水平条件下,50%代谢能组的血清葡萄糖、游离脂肪酸、低密度脂蛋白含量显著降低(P0.05),血清高密度脂蛋白含量显著升高(P0.05)。(2)能量水平对阿勒泰羊各部位的脂肪沉积和脂肪细胞大小具有显著影响。50%代谢能组的尾部脂肪、胃肠周围脂肪、大网膜脂肪和总脂肪与胴体重的比值显著低于100%代谢能组和150%代谢能组(P0.05)。心脏周围脂肪和皮下脂肪与胴体重的比值在三组之间差异不显著(P0.05)。150%代谢能组的脂肪细胞的直径、周长、面积显著大于100%代谢能组和50%代谢能组(P0.05),脂肪细胞个数显著低于其他两组(P0.05)。(3)不同能量水平对阿勒泰羊各部位脂肪代谢相关基因PPARγ、ACC、LPL和LEPR mRNA表达具有显著影响。在尾部脂肪、皮下脂肪和大网膜脂肪中,50%代谢能组的PPARγ、ACC和LPL基因mRNA表达显著低于150%代谢能组(P0.05);50%代谢能组的LEPR基因mRNA表达在尾部脂肪、皮下脂肪和大网膜脂肪中显著高于150%代谢能组(P0.05)。PPARγ、ACC和LPL有部位特异性,各基因在背最长肌中的表达显著低于在脂肪组织中的表达(P0.05)。(4)通过iTRAQ蛋白组学分析筛选出1866个差异蛋白,其中,在GO注释结果中,205个蛋白与氧化还原过程有关,130个蛋白与代谢过程有关,在KEGG注释结果中,151个蛋白与脂肪代谢有关,104个蛋白与能量代谢有关。在差异蛋白分析中,50%代谢能组与150%代谢能组相比有380个差异蛋白。随后,通过GO和KEGG的富集分析,挑选出与脂肪代谢相关的部分差异蛋白进行互作分析,发现EHHADH、ACOX3和ACAA1参与了PPAR信号、脂肪酸代谢、过氧化物酶体三个通路,而SCP2参与PPAR信号和过氧化物酶体通路,ECI2参与脂肪酸代谢和过氧化物酶体通路。在脂肪酸代谢通路中,与其他蛋白互作较多的是HADHA、HADH、ACAA2、HADHB和ACADS蛋白,在过氧化物酶体通路中,HSD17β4、HACL1蛋白互作较多,在PPAR信号通路中,互作较多得是SCP2。本试验结果说明能量水平对阿勒泰羔羊的血清脂质指标、各部位脂肪沉积、脂肪代谢相关基因在转录水平和蛋白通路上具有显著影响,为研究能量水平调控脂肪沉积提供了数据支持,并为阿勒泰羔羊脂肪代谢相关基因的生物学功能研究和遗传进化研究提供分子依据。
【学位单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：S826
【部分图文】：

试验技术路线

能量水平对阿勒泰羔羊脂肪代谢的影响17谢能组比差异不显著（P>0.05）。如图2-1所示，150%代谢能组的脂肪细胞大而饱满，呈蜂窝状，50%代谢能组的细胞个数最多，但其直径最小，形状扁平，充盈程度低，可直观的看出50%代谢能组的细胞面积小于150%代谢能组。表2-6能量水平对阿勒泰羊脂肪细胞的影响Table2-6EffectofenergylevelsonfatcellofAltaysheep项目组别GroupsSEMP值Items50%代谢能组100%代谢能组150%代谢能组P-value细胞数Cellnumble（个）315.15a282.41b225.70c5.170<0.001直径Diameter(μm)35.70b36.99b48.13a0.783<0.001周长Circumference(μm)134.73b145.31b180.76a3.387<0.001面积Area(μm2)1013.72b1081.95b1810.31a51.941<0.001A.50%代谢能组；B.100%代谢能组；C.150%代谢能组A.50%metabolicenergygroup;B.100%metabolicenergygroup;C.150%metabolicenergygroup图2-1能量水平对阿勒泰羊脂肪细胞形态的影响（HE,40×）Fig.2-1EffectofenergylevelsonfatcellofAltaysheep(HE,40×)3讨论3.1能量水平对阿勒泰羊血清脂肪代谢相关生化指标的影响血液生化指标是评价动物健康状况和代谢水平的重要标准[96]。血清指标与动物品种、年龄、营养水平、生存环境等密切有关[14,97-101]。在血清中TP浓度与蛋白质代谢有关，它影响着血清蛋白合成、转运和蛋白质分解代谢[96]。在本试验中，试验至10d时，高能饲喂可以使阿勒泰羊血清TP浓度明显降低，随后再经过20d和30d的高能饲喂，发现血清TP的浓度逐步恢复到0d时的浓度，这可能是随着饲喂时间的延长，动物对营养水平变化自身产生调节的缘故。血清GLU在动物代谢中起着关键作用，它维持着神经系统、红细胞、胎盘、乳腺和卵巢的生理活动，也是生物合成细胞成分的前提物质[102,103]。在反刍?

甘肃农业大学2020届硕士学位论文341.5.4GO富集分析首先，把所有差异蛋白质向GeneOntology数据库（http://www.geneontology.org/）的各个term映射，随后计算每个term的蛋白质数目，然后应用超几何检验，最后找出与所有蛋白质背景相比，在差异蛋白质中显著富集的GO条目。1.5.5KEGG富集分析KEGGPathway显著性富集分析方法是以KEGGPathway为单位，应用超几何检验，通过与所有鉴定到的蛋白背景相比较，找出在差异蛋白中显著性富集的Pathway，最后通过Pathway显著性富集能确定差异蛋白参与的生化代谢途径和信号转导途径。1.5.6差异蛋白互作分析利用StringDB蛋白质互作数据库(http://string-db.org/)进行鉴定，提取相应物种的序列(或提取近源物种的序列)，然后将差异蛋白的序列与提取出的序列进行blast比对，得出相应的互作信息，最后利用Cytoscape软件进行可视化编辑并构建网络图。2结果2.1电泳结果总蛋白样本，分子量从大到小均由分布，在50KDa附近丰度较高，未降解蛋白，条带清晰可见，提取的蛋白样品合格，蛋白电泳图见图4-1。图4-1蛋白质检结果Fig.4-1ProteinqualitytestresultsNLNMNR
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本文编号：2861448