盐穗木提取物对S.aureus抑菌方式及瘤胃纤维降解菌影响的研究

发布时间：2020-10-30 17:17

　　 盐穗木(Halostachys caspica)虽是一种营养价值较高的牧草资源,但其提取物具有较强的抑菌性,绵羊采食过多时会引发瘤胃疾病。为充分发挥盐穗木在畜牧业的应用价值,探索盐穗木对瘤胃微生物的影响。本试验通过研究盐穗木提取物对金黄色葡萄球菌(S.aureus)细胞壁、细胞膜通透性的影响及其对瘤胃纤维降解菌的作用效果,为盐穗木饲料的合理应用奠定基础。本试验的主要研究方法和结果如下:采用倍比稀释法研究盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果,通过测定培养液中电解质和胞外蛋白含量的变化研究其对金黄色葡萄球菌细胞膜通透性的影响;再通过检测碱性磷酸酶(AKP)含量的变化和菌体细胞微观结构的观察研究其对细胞壁的影响。研究结果表明,盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)分别为25mg/mL、50mg/mL,在培养液中加入萃取物后,培养液的电导率、蛋白质和AKP的含量都会显著增加,同时用扫描电镜观察到盐穗木正丁醇萃取物可使菌体细胞形态发生变形,并出现细胞内容物外泄现象。说明盐穗木提取物是通过破坏金黄色葡萄球菌细胞壁和细胞膜的完整性来发挥抑菌作用的。通过菌落的形态学观察和革兰氏染色法对瘤胃纤维降解菌进行分离纯化,再使用刚果红培养基检测其纤维降解能力,最后通过细菌的生理生化特征分析和16S rDNA序列分析鉴定瘤胃纤维降解菌的种类。从瘤胃液中共分离到5株纤维降解菌,在NCBI中GenBank数据库比对后,可将这5株纤维降解菌初步判定为:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis strain)、嗜盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans strain)、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis strain)、特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis strain)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis strain)。通过体外抑菌试验研究盐穗木提取物对5种瘤胃纤维降解菌活性的影响。试验结果表明,盐穗木正丁醇萃取物对分离得到的5种纤维降解菌均有明显的抑菌效果,初步测得它们的MIC均为25mg/mL。结果表明绵羊采食过多的盐穗木会抑制其瘤胃纤维降解菌的活性,易引起瘤胃积食等消化系统疾病。综合以上试验结果,为充分发挥盐穗木营养价值和药用价值,应避免其作为单一饲料使用,可根据盐穗木的营养成分和卡拉库尔羊所需的营养水平配制盐穗木饲粮。
【学位单位】：塔里木大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：S816
【部分图文】：

技术路线图

盐穗木Fig.2-1HalostachyscaspicaFig.2-2T

塔里木大学硕士学位论文第2章盐穗木提取物对金黄色葡萄球菌抑菌方式的研究20图2-1盐穗木图2-2盐穗木正丁醇萃取物Fig.2-1HalostachyscaspicaFig.2-2Then-butanolextractfromHalostachyscaspica2.2.2生长曲线的测定在金黄色葡萄球菌接种到含正丁醇萃取物的培养基中，37℃培养，对照组加入等量无菌水。每隔2小时取样，用紫外分光光度计于600nm处测其OD值，通过吸光度的变化观察盐穗木正丁醇萃取物的抑菌效果。2.2.3MIC和MBC的测定准确称取1.0g盐穗木正丁醇萃取物膏体，用蒸馏水作溶剂溶解膏体，定容至5mL，配成200mg/mL的盐穗木正丁醇萃取物溶液。用倍比稀释法制成200mg/mL、100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL。因在提取盐穗木正丁醇萃取物的过程中，已将正丁醇萃取物进行了反复干燥，故而盐穗木正丁醇萃取物溶液中不含有正丁醇，可选用等量无菌水作为对照组。分别吸取1mL加入到6支试管中，再向6支试管中分别加入970μL培养液和30μL106CFU/mL的金黄色葡萄球菌菌液，使1号～6号试管中药液的终浓度分别为100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL、6.25mg/mL、0mg/mL。于37℃恒温培养箱中培养24h后，涂布接种于固体培养基上，培养16～24h后观察结果。以菌落数出现最少的最大萃取物浓度为最低抑菌浓度（MIC），以无菌落生长的最小萃取物浓度为最低杀菌浓度（MBC）[86]。2.2.4电导率的测定[87]
【参考文献】

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本文编号：2862778