GnRH类似物通过miR-488调控牛促卵泡素分泌的研究

发布时间：2020-10-31 20:31

　　 哺乳动物的生殖主要是由下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴驱动和引导的,促性腺激素释放激素(GnRH)被广泛认为是调控生殖的下丘脑肽。鉴于GnRH对腺垂体性腺激素分泌过程具有重要的调控作用,已有人工合成的GnRH类似物应用于动物的繁殖调控和多种生殖疾病的临床治疗。GnRH类似物与前列腺激素(PG)联合处理是我国常用的牛同期发情技术,GnRH类似物通过促进FSH和LH释放并作用于卵巢,诱导卵泡发育以及促进排卵,完成同期发情-定时输精,提高受胎率。戈那瑞林是人工合成的GnRH,应用戈那瑞林进行同期发情处理可以大大降低生产实践中激素使用的成本,并且有助于进一步研究GnRH类似物对FSH的具体调控机制。miRNA是一种内源性非编码RNA,研究表明miRNA在各种生理活动调控和癌症进程中都发挥关键作用,可参与多种激素的分泌调节过程。然而,miRNA是否参与GnRH对FSH的分泌调控过程,进而影响哺乳动物的生殖仍然是未知的,具有重要的研究价值。本研究通过对30头母牛进行GnRH类似物(戈那瑞林)和PG联合处理,使之同期发情。检测GnRH类似物处理前后母牛卵泡发育、FSH和LH的分泌变化,发现GnRH类似物(戈那瑞林)参与FSH分泌的调控,诱导卵巢上卵泡发育。为进一步探索这种调控作用的分子机制,应用生物信息学软件和双荧光素酶报告系统预测可能参与调节FSH分泌的miRNA,然后在大鼠原代腺垂体细胞上进行体外验证,通过转染miR-488的模拟物和抑制剂后进行RTq-PCR、elisa等检测实验,证明了miR-488与FSH的靶向作用关系,并且验证了GnRH与miR-488的作用关系。结果表明:1.母牛经GnRH类似物处理后,FSH和LH分泌水平显著上升,促进牛的卵巢上卵泡发育。牛注射戈那瑞林后,在垂体中FSHb和LHb的mRNA表达水平显著上调。利用Targetscan等预测软件,结合双荧光素酶报告筛选GnRH类似物处理后差异表达的miRNA,预测miR-488可能靶向调节FSHb基因。2.大鼠进行GnRH类似物处理后,FSH和LH分泌量显著增多,且FSHb mRNA表达水平显著上调,miR-488-3p表达水平显著下调。miR-488-3p在大鼠性成熟前后差异表达,可能参与生殖调控。体外验证miR-488-3p可以靶向调节FSHb基因,进而影响FSH分泌。综上所述,本研究分析了GnRH类似物处理后的促卵泡素和促黄体素分泌变化情况,确定了同期发情程序,解析GnRH类似物通过miR-488调控FSH分泌的分子机制,为完善牛发情控制的处理程序提供理论依据,促进激素制品的国产化应用。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：S823
【部分图文】：

第一篇文献综述第1章GnRH及其类似物的研究进展8图1.1.GnRH调控FSHb转录的信号通路模型[62]Fig1.1SignalpathwaymodelofGnRHregulatingFSHbtranscription总之GnRH根据其不同的脉冲模式（幅度和频率），可以激活复杂的信号传递通路差异调节促性腺激素mRNA的表达[63,64]，进而影响促性腺激素的分泌，调控动物的生长繁殖。1.4GnRH类似物研究进展促性腺激素释放激素（GnRH）是在下丘脑神经元的细胞体中合成的由十个氨基酸残基组成的十肽，也称为促黄体生成激素释放激素（LHRH）或下丘脑介导雄性和雌性生殖调控的神经肽[65]。由于这种神经肽首先在哺乳动物（猪和羊）中被发现，也被称为哺乳动物GnRH（mGnRH）[43]，由于天然GnRH的效力低且半衰期短，但具有重要的作用功能，因此开发了长期有效的GnRH类似物来进行临床治疗或实践应用[66]。GnRH类似物包括GnRH激动剂和GnRH拮抗剂。促性腺激素释放激素激动剂是从天然的促性腺激素释放激素中衍生出来的，其方法是在天然GnRH十肽的第6位上将L-氨基酸用D-氨基酸取代，增加其半衰期和受体占用时间[67]。目前已研究出多种GnRH激动剂，其中代表性的几种分别是戈舍瑞林，亮丙瑞林，那

第二篇研究内容第1章GnRH类似物处理同期发情对牛FSH及卵泡发育变化影响28图1.1GnRH类似物处理后腺垂体中FSH和LH激素分泌量Fig.1.1ThesecretionofFSHandLHhormonesinadenohypophysisafterGnRHanaloguetreatment注：（A）elisa检测母牛GnRH同期发情前后FSH分泌量。（B）elisa检测母牛GnRH同期发情前后LH分泌量。每个实验至少重复三次。显示了数据的平均值和标准偏差（SD）。进行单因素方差分析和卡方检验以评估统计学显著性。*表示各组之间存在显著差异（P<0.05）。Note:(A)TheFSHsecretionwasmeasuredviaELISAbeforeandafterGnRHSynchronousestrus.(B)TheLHsecretionwasmeasuredviaELISAbeforeandafterGnRHSynchronousestrus.Repeateachexperimentatleastthreetimes.Showsthemeanandstandarddeviation(SD)ofthedata.OnewayANOVAandchisquaretestwereusedtoevaluatethestatisticalsignificance.*Indicatesasignificantdifference(P<0.05)1.2.2GnRH类似物对牛卵泡发育的影响为了探究GnRH处理是否能够促进母牛的发情以及其对母牛卵巢卵泡发育的影响，本研究中我们选择了30头不含优势卵泡，处于发情间期的母牛，进行GnRH同期发情处理后，应用B型超声波诊断仪对母牛的卵巢卵泡发育情况进行检测，将探头经直肠伸入到达卵巢位置，观察卵巢形态，测量卵泡直径大小，以卵泡最大垂直线的平均值为卵泡直径，统计30头母牛第二次注射GnRH后的卵泡发育情况为下表1.7所示，在GnRH同期发情处理后卵泡直径的平均值达到了1.14cm，说明绝大部分卵泡显著发育。这些结果显示，随着母牛FSH和LH的激素分泌量的增加促进了卵巢上的卵泡发育和优势卵泡的形成，即GnRH类似物

第二篇研究内容第1章GnRH类似物处理同期发情对牛FSH及卵泡发育变化影响30图1.2GnRH类似物处理前后腺垂体中FSHb和LHbmRNA表达水平Fig.1.2ExpressionofFSHbandLHbmRNAinadenohypophysisbeforeandafterGnRHanaloguetreatment注：（A）RT-qPCR方法检测牛腺垂体中FSHbmRNA在GnRH同期发情处理后的表达。（B）RT-qPCR方法检测牛腺垂体中LHbmRNA在GnRH同期发情后的表达。每个实验至少重复三次。显示了数据的平均值和标准偏差（SD）。进行单因素方差分析和卡方检验以评估统计学显著性。*表示各组之间存在显著差异（P<0.05）。Note:(A)RT-qPCRwasusedtodetecttheexpressionofFSHbmRNAinbovineadenohypophysisafterSynchronousestrusofGnRH.(B)RT-qPCRwasusedtodetecttheexpressionofLHbmRNAinbovineadenohypophysisafterSynchronousestrusofGnRH.Repeateachexperimentatleastthreetimes.Showsthemeanandstandarddeviation(SD)ofthedata.OnewayANOVAandchisquaretestwereusedtoevaluatethestatisticalsignificance.*Indicatesasignificantdifference(P<0.05).1.2.4预测筛选与牛腺垂体FSHb具有靶向作用的miRNA为进一步探索GnRH类似物对促卵泡素的调控机制，我们通过TargetScan预测网站（http://www。targetscan。org/）获取与靶基因FSHb具有潜在结合作用的miRNA，通过筛选验证，选择具有高保守序列的miR-488-3p，其和FSHb3"UTR之间互补序列的信息（图1.3A）。然后，为进一步证实miR-488-3p靶向FSHb，我们通过双荧光素酶报告进行验证（图1.3B）。我们首先将靶基因FSHb与miR-488-3p的结合序列直接合成后克隆至双荧光素酶报告载体中，克隆位置位于载体中海肾荧光素酶报告基因的3’UTR区域，构建了FSHb-3"UTR-WT质粒（图1.3C）。最后，将构建的质粒与miR-488
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 陈烨;丁锦希;郝丽;唐迪;;集中带量，还是挂网议价采购——生物类似物采购模式研究[J];中国医药工业杂志;2020年04期

2 田月;赵志刚;;国内外生物类似物的审批、监管比较与思考[J];药品评价;2017年04期

3 常鹏飞;促甲状腺素释放激素及其类似物对中枢神经系统损伤的保护作用[J];国外医学(脑血管疾病分册);1997年05期

4 本刊编辑部;·读者来信·[J];农药;1989年04期

5 袁其晓;一种口服有效的促黄体生成激素释放激素的类似物[J];国外医学参考资料.计划生育妇产科学分册;1977年03期

6 葛维娟;尚丛珊;许乐;;芦竹碱及其类似物合成方法的比较研究[J];化工管理;2016年17期

7 潘学武;董妍玲;石亚亚;;内生真菌产生喜树碱及其类似物的研究进展[J];现代生物医学进展;2010年17期

8 王慧丽;奚耕思;;雄激素受体类似物在拟黑多刺蚁脑部的表达和定位[J];陕西师范大学学报(自然科学版);2007年02期

9 孙滨源,田桂玲,叶蕴华;生长激素释放抑制因子类似物的研究进展[J];中国药学杂志;1998年06期

10 刘丹;栾天;袁莹;张磊;;多靶点酪氨酸激酶抑制剂阿法替尼及其类似物的研究进展[J];中国药学杂志;2014年24期

相关博士学位论文 前10条

1 欧阳翰;磷酸化精氨酸稳定类似物的合成及应用[D];厦门大学;2018年

2 徐佳琳;姜黄素类化合物的提取、合成及活性研究[D];浙江工业大学;2019年

3 丁德军;基于双键修饰的白藜芦醇类似物的癌预防活性及其机制研究[D];兰州大学;2012年

4 刘倍均;采用非天然D型氨基酸修饰和侧链链接策略进行新型Anoplin类似物的设计、合成和活性研究及与中药单体熊果酸联合抗菌效果研究[D];兰州大学;2018年

5 刘少金;基于Bikinin的油菜素内酯功能类似物设计、合成及其生物活性[D];中国农业大学;2018年

6 吴小庆;抑咽侧体素类似物的设计、合成、生物活性及构效关系研究[D];中国农业大学;2016年

7 王媛;非天然氨基酸修饰的内吗啡肽类似物构效关系及药理活性研究[D];兰州大学;2014年

8 赵琳琳;胰高血糖素样肽-1及其长效类似物的研究[D];华中科技大学;2013年

9 王硕;两种多肽类药物结构的谱学研究[D];吉林大学;2011年

10 蒋翔锐;新型土震素B类似物的合成及其生物活性研究[D];浙江大学;2005年

相关硕士学位论文 前10条

1 王文华;GnRH类似物通过miR-488调控牛促卵泡素分泌的研究[D];吉林大学;2020年

2 胡丽彦;具有选择性激活Th2免疫活性的α-GalCer类似物的设计与合成[D];江西师范大学;2019年

3 周月婷;Tschimganin类似物的合成及杀虫活性评价[D];石河子大学;2019年

4 姚森;拟肽类PD176252类似物的设计、合成及生物活性评价[D];合肥工业大学;2019年

5 邓华;农药相关数据库的信息整合及稳定G—四链的农药小分子类似物发掘[D];华中农业大学;2019年

6 冷晓;天然产物Cyanolide A类似物的全合成及其生物活性测试[D];江西科技师范大学;2017年

7 谢程虎;多区域修饰的1—去氧紫杉醇类似物的合成及其抗肿瘤活性研究[D];上海大学;2019年

8 史兴鹏;瑞博西尼合成新方法及其类似物的抗肿瘤活性研究[D];北京协和医学院;2019年

9 刘立强;天然炔酚及其类似物的合成和生物活性研究[D];大连理工大学;2019年

10 陈萌;环五肽Galaxamide及其类似物的合成与其配位研究[D];暨南大学;2012年

本文编号：2864470