炭当归多糖干预头孢噻呋钠联合LPS致鸡肝损伤作用机制研究

发布时间：2020-11-08 21:04

　　 当归为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels干燥根,属甘肃道地药材之一,具有活血、补血、抗炎等功效,其活性成分包括挥发油、有机酸、多糖等,当归多糖具有调节免疫、抗氧化等作用。炭当归(CAS)是当归的炮制品之一,炭当归多糖(CASP)为其主要功能性成分之一。本文通过免疫炎症因子、病理组织学分析,结合串联质量标签标记技术(TMT)和质谱多反应监测(MRM)验证目标蛋白,探究头孢噻呋钠联合LPS所致肝损伤的发生机制及炭当归多糖的保护作用机制。试验样本分为前期实验采取的正常对照组(Control)组、模型组(Model)、炭当归多糖低剂量组(CASPL,0.125 g/kg/d)、炭当归多糖高剂量组(CASPH,0.25 g/kg/d)鸡血清和肝脏样本。通过ELISA法检测IL-1、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α及TGF-β含量,并进行病理学组织学检查,结合TMT技术鉴定肝脏蛋白,筛选出差异蛋白并结合MRM技术对其进行验证。研究结果如下:1、与Control组比较,Model组IL-1β、IL-6、TNF-α含量极显著升高(P0.01),IL-4、TGF-β含量显著降低(P0.05),IL-10含量极显著降低(P0.01)。与Model组相比,CASPH组IL-1β、TNF-α含量显著降低(P0.05),IL-6含量极显著降低(P0.01),IL-4、TGF-β含量显著升高(P0.05),IL-10含量极显著升高(P0.01),CASPL组的IL-1β、TNF-α含量显著降低(P0.05),IL-10含量显著降低(P0.05)。与Control组相比,Model组肝细胞坏死,肝小叶辨识困难,空泡变性等。与Model组相比,CASPH组肝细胞结构较完整,变性坏死显著减轻,而CASPH组比CASPL组改善更明显。2、在Control、Model、CASPH组肝脏共鉴定到6662个蛋白,Model/Control显著差异蛋白206个,其中128个上调,78个下调,CASPH/Model显著差异蛋白745个,其中535个上调,210个下调,主要参与糖代谢、脂质代谢、氨基酸代谢及炎症相关通路,都主要富集到免疫相关通路。3、筛选的19个候选蛋白验证,TMT和MRM定量分析结果总体趋势一致性较高,从中筛选出7个目标蛋白(COX7A2L、FCER2、AGXT、CD34、GCAT、CYP2AC1、TBXAS1)与肝损伤、保肝机制关系密切,可能是CASP干预头孢噻呋钠联合LPS致鸡肝损伤的作用机制的标志蛋白。综上所述,头孢噻呋钠联合LPS致鸡肝损伤的作用机制与免疫炎症反应、氧化应激、氨基酸代谢、组织修复等关系密切。CASP具有缓解肝损伤程度、调节机体免疫反应和修复肝脏损伤的作用,可能通过调节炎症因子,以及下调肝脏中FCER2和TBXAS1、上调CD34、AGXT、GCAT、COX7A2L和CYP2AC1蛋白表达,来恢复免疫相关通路异常情况,减弱造模因子引起的氧化应激损伤程度,恢复氨基酸代谢紊乱以及调节多种相关酶的分泌来促进肝组织修复,发挥保肝效果。
【学位单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：S853.74
【部分图文】：

炭当归多糖干预头孢噻呋钠联合LPS致鸡肝损伤作用机制研究13空泡变性，细胞结构不完整。与Model组相比，CASPH组肝细胞结构较完整，肝细胞变性显著减轻，排列较规整，但CASPL组肝细胞轮廓基本可见，仍可见部分空泡变性，有轻微核固缩，轻度坏死，肝窦有瘀血等组织病变特征。图2-2炭当归多糖对头孢噻呋钠联合LPS致鸡肝损的病理学观察结果Fig.2-2PathologicalobservationresultsofCASPonliverinjuryinducedbyCScombinedwithLPSinchicken注：黑色箭头所指为肝脏病变。Note:Theblackarrowsrefertotheobvioushepaticlesions.4讨论4.1LPS联合头孢噻呋钠对鸡促炎细胞因子、抗炎细胞因子的影响LPS联合头孢噻呋钠所致鸡肝损伤是基于临床实际所筛选出的一种鸡肝损伤模型，LPS联合头孢噻呋钠致鸡肝损伤发生后，鸡血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平总趋势均显著升高，IL-4、IL-10、TGF-β表达水平总趋势均显著降低。LPS引起的肝损伤通常被认为是免疫性肝损伤，与炎症反应密切相关[75-76]，主要由肝脏Kupffer细胞清除[77]。LPS随血液入肝时，Kupffer细胞被激活，不仅能够产生H2O2等活性氧引起氧化应激反应，还会大量分泌TNF-α、IL-6等炎症细胞因子，造成肝细胞凋亡与坏死[78]。TNF-α是肝损

炭当归多糖干预头孢噻呋钠联合LPS致鸡肝损伤作用机制研究23图3-1蛋白分子量分布图Fig.3-1Proteinmolecularweightdistribution注：X轴：蛋白质分子量范围；Y轴：相应蛋白比例。Note:Xaxis:proteinmolecularweightrange;Yaxis:correspondingproteinproportion.图3-2肽段长度分布图Fig.3-2Peptidelengthdistribution注：X轴：肽段长度；Y轴：相应肽段比例。Note:Xaxis:peptidelength;Yaxis:correspondingpeptideproportion.

炭当归多糖干预头孢噻呋钠联合LPS致鸡肝损伤作用机制研究23图3-1蛋白分子量分布图Fig.3-1Proteinmolecularweightdistribution注：X轴：蛋白质分子量范围；Y轴：相应蛋白比例。Note:Xaxis:proteinmolecularweightrange;Yaxis:correspondingproteinproportion.图3-2肽段长度分布图Fig.3-2Peptidelengthdistribution注：X轴：肽段长度；Y轴：相应肽段比例。Note:Xaxis:peptidelength;Yaxis:correspondingpeptideproportion.
【参考文献】

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本文编号：2875339