双峰驼TPM2与TPM3基因表达模式及其功能探究
发布时间：2020-12-09 03:14
双峰驼作为一种古老而独特的动物,有着不可估量的研究价值。双峰驼属于典型的精清诱导排卵型动物,有明显的季节性发情特征。在繁殖季节与非繁殖季节不同的生活习性使的双峰驼生殖生理存在一定差异。基于本研究团队前期利用蛋白组学技术,发现肌肉生长发育相关差异原肌球蛋白2（TPM2）与原肌球蛋白3（TPM3）。原肌球蛋白2和原肌球蛋白3结构功能既有相似性也有特异性,编码平滑肌、骨骼肌等肌肉异构体的同时,也编码肌肉成纤维细胞异构体,对细胞产生不同的影响。为了进一步揭示TPM2基因和TPM3基因在不同繁殖期双峰驼肌肉中的作用,本研究以繁殖季节双峰母驼为研究对象,通过RT-PCR技术克隆双峰驼TPM2和TPM3基因并进行序列,分析TPM2基因和TPM3基因基本功能;应用免疫荧光技术、免疫组织化学法、qRT-PCR、Western blot法验证TPM2基因和TPM3基因在繁殖季节双峰母驼肌肉具体表达情况,探究TPM2基因和TPM3基因在繁殖与非繁殖季节双峰母驼肌肉组织中的表达模式;以双峰驼肌纤维细胞为基础,通过转染siRNA的方法,探索干扰序列对肌纤维细胞凋亡的影响。结果发现:1.克隆得到双峰驼CDS全长为...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Bcl-2家族成员间异型和同型二聚体结合调控细胞凋亡的原理图
双峰驼TPM2与TPM3基因表达模式及其功能探究13图2-1双峰驼TPM2和TPM3基因PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图Fig2-1BactriancamelTPM2andTPM3genePCRamplificationproductagarosegelelectrophoresis2.2双峰驼TPM2、TPM3基因核苷酸及氨基酸序列分析根据NCBI数据库中的ORFFinder软件分析双峰驼TPM2基因序列，开放阅读框根据序列比对分析双峰驼TPM2基因的序列，起始密码子ATG位在109bp处，终止密码子TAG位于963bp处。应用ProtParam软件预测TPM2理化性质，分子式为C1400H2325N397O498S115，分子量为33.03988KD，理论等电点为（pI）4.65。而TPM3基因序列比对结果显示起始密码子ATG位在146bp处，终止密码子TAG位于521bp处，预测TPM3理化性质结果显示，分子式为C927H1588N294O311S5，分子量为21.98889KD，理论等电点为（pI）5.40，两蛋白都属于酸性蛋白。TMHMM2.0Server程序进行跨膜区预测，表明TPM2、TPM3蛋白都不存在跨膜区域。亚细胞定位分析双峰驼TPM2、TPM3蛋白定位于细胞核，在线粒体、细胞质、细胞骨架、细胞膜以及胞质中均有分布，主要在细胞核中大量分布。图2-2双峰驼TPM2二级结构预测Fig2-2PredictionofsecondarystructureofBactriancamelTPM2
双峰驼TPM2与TPM3基因表达模式及其功能探究13图2-1双峰驼TPM2和TPM3基因PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图Fig2-1BactriancamelTPM2andTPM3genePCRamplificationproductagarosegelelectrophoresis2.2双峰驼TPM2、TPM3基因核苷酸及氨基酸序列分析根据NCBI数据库中的ORFFinder软件分析双峰驼TPM2基因序列，开放阅读框根据序列比对分析双峰驼TPM2基因的序列，起始密码子ATG位在109bp处，终止密码子TAG位于963bp处。应用ProtParam软件预测TPM2理化性质，分子式为C1400H2325N397O498S115，分子量为33.03988KD，理论等电点为（pI）4.65。而TPM3基因序列比对结果显示起始密码子ATG位在146bp处，终止密码子TAG位于521bp处，预测TPM3理化性质结果显示，分子式为C927H1588N294O311S5，分子量为21.98889KD，理论等电点为（pI）5.40，两蛋白都属于酸性蛋白。TMHMM2.0Server程序进行跨膜区预测，表明TPM2、TPM3蛋白都不存在跨膜区域。亚细胞定位分析双峰驼TPM2、TPM3蛋白定位于细胞核，在线粒体、细胞质、细胞骨架、细胞膜以及胞质中均有分布，主要在细胞核中大量分布。图2-2双峰驼TPM2二级结构预测Fig2-2PredictionofsecondarystructureofBactriancamelTPM2
【参考文献】：
期刊论文
[1]贵州黑山羊快肌肌钙蛋白基因克隆和氨基酸序列分析[J]. 陈浩林,吴仙,朱冠群,毛凤显,陈燕,邓大鹏. 贵州畜牧兽医. 2018(06)
[2]微小RNA-193a通过原肌球蛋白调控对人肺癌细胞株A549的侵袭和增殖的影响[J]. 张春敭,齐宇,吴恺,张岩,赵松. 中华实验外科杂志. 2018 (03)
[3]siRNATPM4对肺癌细胞增殖凋亡的影响[J]. 何建林,李珏,杨娜. 中国老年学杂志. 2017(20)
[4]原肌球蛋白3与雄激素受体配体结合域之间的相互作用[J]. 邱阳,陈晓雅,孙峥嵘,胡冰青,徐品一,崔磊,李玲. 中国医科大学学报. 2016(11)
[5]原肌球蛋白3在大肠癌中的表达和意义[J]. 印璞,李玲霞,高申,宋丽娜,李洪军,何成彦. 中国实验诊断学. 2015(10)
[6]Bcl-2基因家族研究进展[J]. 任玉伟,宿华威. 大连医科大学学报. 2015(02)
[7]Bcl-2家族的研究进展[J]. 徐云峰,刘松坚. 中国疗养医学. 2014(10)
[8]北京鸭和淮南麻鸭胸肌发育过程TPM1和TPM3基因的表达变化研究[J]. 叶保国,张小辉,徐铁山. 黑龙江畜牧兽医. 2014(19)
[9]雄激素与女性生殖[J]. 崔毓桂,邵丽,千日成,刘嘉茵. 国际生殖健康/计划生育杂志. 2014(05)
[10]阿拉善戈壁骟驼和沙漠骟驼体重、出肉量差异与其骨骼肌组织学性状的研究[J]. 额尔敦木图,李盈,刘图雅,陈泽明,图雅. 内蒙古农业大学学报(自然科学版). 2014(05)
博士论文
[1]Sonic hedgehog信号通路对正常角质形成细胞增殖及凋亡的影响及其分子机制[D]. 刘海燕.第四军医大学 2015
[2]TPM4在结直肠癌中的表达及其生物学意义[D]. 赵月鸣.吉林大学 2015
[3]狭鳕和牛肌肉组织提取物在牛肉嫩化中的作用机理研究[D]. 王蓉蓉.南京农业大学 2012
[4]GLP-1对骨骼肌肌球蛋白重链表达的影响及机制研究[D]. 王丽娜.南京农业大学 2009
[5]杂种大白×梅山F1代与其母本梅山猪背最长肌间差异表达基因的克隆鉴定及其特征分析[D]. 黄涛.华中农业大学 2006
硕士论文
[1]应用siRNA敲低TPM3基因表达后对大鼠胰腺癌细胞生物学行为的影响[D]. 马翔.蚌埠医学院 2013
[2]利用表达谱芯片技术筛选家兔肌肉发育相关基因[D]. 李挺.扬州大学 2013
[3]组织间隙液中肝细胞癌诊断候选标志物的发现[D]. 刘志磊.安徽医科大学 2012
[4]Bcl-2抑制剂的合成与抗肿瘤细胞活性筛选及抗结核菌核苷类化合物的合成[D]. 李静.苏州大学 2010
[5]阉牛、公牛背最长肌消减cDNA文库的构建和差异表达基因的筛选与鉴定[D]. 周正奎.中国农业科学院 2008
[6]姜曲海母猪初情期前卵巢和子宫腺体发育和激素水平的研究[D]. 刘春玲.扬州大学 2004
本文编号：2906159
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Bcl-2家族成员间异型和同型二聚体结合调控细胞凋亡的原理图
双峰驼TPM2与TPM3基因表达模式及其功能探究13图2-1双峰驼TPM2和TPM3基因PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图Fig2-1BactriancamelTPM2andTPM3genePCRamplificationproductagarosegelelectrophoresis2.2双峰驼TPM2、TPM3基因核苷酸及氨基酸序列分析根据NCBI数据库中的ORFFinder软件分析双峰驼TPM2基因序列，开放阅读框根据序列比对分析双峰驼TPM2基因的序列，起始密码子ATG位在109bp处，终止密码子TAG位于963bp处。应用ProtParam软件预测TPM2理化性质，分子式为C1400H2325N397O498S115，分子量为33.03988KD，理论等电点为（pI）4.65。而TPM3基因序列比对结果显示起始密码子ATG位在146bp处，终止密码子TAG位于521bp处，预测TPM3理化性质结果显示，分子式为C927H1588N294O311S5，分子量为21.98889KD，理论等电点为（pI）5.40，两蛋白都属于酸性蛋白。TMHMM2.0Server程序进行跨膜区预测，表明TPM2、TPM3蛋白都不存在跨膜区域。亚细胞定位分析双峰驼TPM2、TPM3蛋白定位于细胞核，在线粒体、细胞质、细胞骨架、细胞膜以及胞质中均有分布，主要在细胞核中大量分布。图2-2双峰驼TPM2二级结构预测Fig2-2PredictionofsecondarystructureofBactriancamelTPM2
双峰驼TPM2与TPM3基因表达模式及其功能探究13图2-1双峰驼TPM2和TPM3基因PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图Fig2-1BactriancamelTPM2andTPM3genePCRamplificationproductagarosegelelectrophoresis2.2双峰驼TPM2、TPM3基因核苷酸及氨基酸序列分析根据NCBI数据库中的ORFFinder软件分析双峰驼TPM2基因序列，开放阅读框根据序列比对分析双峰驼TPM2基因的序列，起始密码子ATG位在109bp处，终止密码子TAG位于963bp处。应用ProtParam软件预测TPM2理化性质，分子式为C1400H2325N397O498S115，分子量为33.03988KD，理论等电点为（pI）4.65。而TPM3基因序列比对结果显示起始密码子ATG位在146bp处，终止密码子TAG位于521bp处，预测TPM3理化性质结果显示，分子式为C927H1588N294O311S5，分子量为21.98889KD，理论等电点为（pI）5.40，两蛋白都属于酸性蛋白。TMHMM2.0Server程序进行跨膜区预测，表明TPM2、TPM3蛋白都不存在跨膜区域。亚细胞定位分析双峰驼TPM2、TPM3蛋白定位于细胞核，在线粒体、细胞质、细胞骨架、细胞膜以及胞质中均有分布，主要在细胞核中大量分布。图2-2双峰驼TPM2二级结构预测Fig2-2PredictionofsecondarystructureofBactriancamelTPM2
【参考文献】：
期刊论文
[1]贵州黑山羊快肌肌钙蛋白基因克隆和氨基酸序列分析[J]. 陈浩林,吴仙,朱冠群,毛凤显,陈燕,邓大鹏. 贵州畜牧兽医. 2018(06)
[2]微小RNA-193a通过原肌球蛋白调控对人肺癌细胞株A549的侵袭和增殖的影响[J]. 张春敭,齐宇,吴恺,张岩,赵松. 中华实验外科杂志. 2018 (03)
[3]siRNATPM4对肺癌细胞增殖凋亡的影响[J]. 何建林,李珏,杨娜. 中国老年学杂志. 2017(20)
[4]原肌球蛋白3与雄激素受体配体结合域之间的相互作用[J]. 邱阳,陈晓雅,孙峥嵘,胡冰青,徐品一,崔磊,李玲. 中国医科大学学报. 2016(11)
[5]原肌球蛋白3在大肠癌中的表达和意义[J]. 印璞,李玲霞,高申,宋丽娜,李洪军,何成彦. 中国实验诊断学. 2015(10)
[6]Bcl-2基因家族研究进展[J]. 任玉伟,宿华威. 大连医科大学学报. 2015(02)
[7]Bcl-2家族的研究进展[J]. 徐云峰,刘松坚. 中国疗养医学. 2014(10)
[8]北京鸭和淮南麻鸭胸肌发育过程TPM1和TPM3基因的表达变化研究[J]. 叶保国,张小辉,徐铁山. 黑龙江畜牧兽医. 2014(19)
[9]雄激素与女性生殖[J]. 崔毓桂,邵丽,千日成,刘嘉茵. 国际生殖健康/计划生育杂志. 2014(05)
[10]阿拉善戈壁骟驼和沙漠骟驼体重、出肉量差异与其骨骼肌组织学性状的研究[J]. 额尔敦木图,李盈,刘图雅,陈泽明,图雅. 内蒙古农业大学学报(自然科学版). 2014(05)
博士论文
[1]Sonic hedgehog信号通路对正常角质形成细胞增殖及凋亡的影响及其分子机制[D]. 刘海燕.第四军医大学 2015
[2]TPM4在结直肠癌中的表达及其生物学意义[D]. 赵月鸣.吉林大学 2015
[3]狭鳕和牛肌肉组织提取物在牛肉嫩化中的作用机理研究[D]. 王蓉蓉.南京农业大学 2012
[4]GLP-1对骨骼肌肌球蛋白重链表达的影响及机制研究[D]. 王丽娜.南京农业大学 2009
[5]杂种大白×梅山F1代与其母本梅山猪背最长肌间差异表达基因的克隆鉴定及其特征分析[D]. 黄涛.华中农业大学 2006
硕士论文
[1]应用siRNA敲低TPM3基因表达后对大鼠胰腺癌细胞生物学行为的影响[D]. 马翔.蚌埠医学院 2013
[2]利用表达谱芯片技术筛选家兔肌肉发育相关基因[D]. 李挺.扬州大学 2013
[3]组织间隙液中肝细胞癌诊断候选标志物的发现[D]. 刘志磊.安徽医科大学 2012
[4]Bcl-2抑制剂的合成与抗肿瘤细胞活性筛选及抗结核菌核苷类化合物的合成[D]. 李静.苏州大学 2010
[5]阉牛、公牛背最长肌消减cDNA文库的构建和差异表达基因的筛选与鉴定[D]. 周正奎.中国农业科学院 2008
[6]姜曲海母猪初情期前卵巢和子宫腺体发育和激素水平的研究[D]. 刘春玲.扬州大学 2004
本文编号：2906159
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