水稻转基因及其矮化株系的筛选与鉴定

发布时间：2020-12-15 17:41

　　水稻（Oryza sativa L.）是我国重要的谷类作物,同时也是我国的主要粮食作物之一。株高是影响水稻产量的重要农艺性状,水稻植株过高会让水稻易倒伏而减产,而适当的矮化可以提高水稻抗倒伏、耐肥的能力从而使水稻增产。本研究通过农杆菌转化法,将源于玉米（Zea mays L.）中的10个DOF转录因子家族基因和11个GATA转录因子家族基因转入到了水稻品种日本晴中,经筛选获得了稳定遗传的矮化株系dof34,对其进行了农艺性状、光合作用的测定,并对矮化机制进行了初步探讨,以期为水稻矮化株型育种提供材料和技术支持。主要研究结果如下:1.利用GATEWAY克隆技术成功构建了10个DOF家族基因和11个GATA家族基因的过表达载体。2.通过转基因技术获得423株转DOF家族基因和GATA家族基因的组培苗,对T0代和T1代进行筛选鉴定,最终获得了能够稳定遗传的转Dof34基因的矮化水稻株系。3.dof34株系的农艺性状调查,结果表明,其光合速率、蒸腾速率、气孔导度、胞间CO₂浓度均显著高于野生型;千粒重、有效分蘖数、结实率相较于野生型无显著差异;株高和生物量较野生型降低。4... 

【文章来源】：河北科技大学河北省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

GATEWAY目标载体示意图

12图2-2转化大肠杆菌DH5α抗性筛选结果M:DL2000DNAMarker；1-11：鉴定转入大肠杆菌载体上潮霉素抗性特异性条；12：质粒阳性对照；13：阴性对照图2-3大肠杆菌转化Hyg抗性基因的PCR电泳结果2.3.2质粒提取检测结果将从已转化的大肠杆菌中提取的质粒用凝胶电泳检测，载体大小约为13.5kb左右，电泳结果（见图2-4）显示，载体条带大小一致，为单条带且条带清晰。表明成功提取出了大肠杆菌内的过表达载体。对质粒用目的基因通用引物进行PCR来进一步检测过表达载体是否构建成功（详情见图2-5），所转入的基因大小在1000bp左右，结果均能扩增出目的基因特异条带，条带清晰大小正确，21个过表达载体全部构建成功。750bp13

12图2-2转化大肠杆菌DH5α抗性筛选结果M:DL2000DNAMarker；1-11：鉴定转入大肠杆菌载体上潮霉素抗性特异性条；12：质粒阳性对照；13：阴性对照图2-3大肠杆菌转化Hyg抗性基因的PCR电泳结果2.3.2质粒提取检测结果将从已转化的大肠杆菌中提取的质粒用凝胶电泳检测，载体大小约为13.5kb左右，电泳结果（见图2-4）显示，载体条带大小一致，为单条带且条带清晰。表明成功提取出了大肠杆菌内的过表达载体。对质粒用目的基因通用引物进行PCR来进一步检测过表达载体是否构建成功（详情见图2-5），所转入的基因大小在1000bp左右，结果均能扩增出目的基因特异条带，条带清晰大小正确，21个过表达载体全部构建成功。750bp13

【参考文献】：
期刊论文
[1]脱落酸拮抗赤霉素抑制水稻地上部生长的研究[J]. 戚义东,秦华,高雅迪,王芳芳,黄荣峰,权瑞党.  生物技术进展. 2019(05)
[2]不同温度、枝段部位对文冠果愈伤组织形成的效果影响[J]. 王慧琳.  防护林科技. 2019(07)
[3]作物高光效种质筛选的研究进展[J]. 张耀文,赵小光,关周博,侯君利,王学芳,董育红,田建华,李殿荣,王竹云.  中国农学通报. 2019(18)
[4]农杆菌介导的水稻快速高效基因转化系统[J]. 高璐,薛永来.  江苏农业科学. 2019(04)
[5]植物组培新方法——开放式组织培养研究概况[J]. 周亚辉.  中国园艺文摘. 2018(06)
[6]我国水稻半矮秆性状与抗倒伏育种研究获得新进展[J]. 刘刚.  农药市场信息. 2018(01)
[7]水稻矮杆突变体D814基因图位克隆与功能分析[J]. 陈新兵,黄荣峰,王娟.  生物技术进展. 2017(06)
[8]水稻组织培养相关研究综述[J]. 尹祥佳,赵慧军,李艳玫,郝楠.  甘肃农业科技. 2017(08)
[9]我国水稻生产现状及发展对策研究[J]. 钟桂花.  农民致富之友. 2017(12)
[10]水稻半矮秆基因sd1功能标记的开发与利用[J]. 徐建军,张云辉,顾啸,姚麒麟.  上海农业学报. 2016(04)

硕士论文
[1]水稻矮化多分蘖突变体的表型分析与基因克隆[D]. 谢婷婷.聊城大学 2015
[2]水稻在我国粮食安全中的战略地位分析[D]. 虞国平.中国农业科学院 2009



本文编号：2918640