稻曲菌素A制备工艺优化及其生物活性分析

发布时间：2020-12-29 10:25

　　稻曲菌素（Ustiloxins）是稻曲病菌产生的一种环肽类次生代谢产物,具有抑制细胞有丝分裂的毒理活性,对动植物产生严重的毒害作用。迄今为止,从稻曲病菌中分离并鉴定了7种稻曲菌素,分别为稻曲菌素A、B、C、D、E、F、G,其中稻曲菌素A（Ust A）为主要成分。鉴于Ust A污染的普遍性和危害性,针对它的污染风险评估、毒理研究以及控制方法开发等受到业界的广泛关注。至今尚无可行的Ust A的全合成工艺,Ust A的来源严重受限,阻碍了对Ust A的深入研究。本研究以染病稻穗上的稻曲球为原料,开发了基于大孔吸附树脂联用高速逆流色谱大量制备Ust A的工艺;并对提取的Ust A的生物活性进行了测定,主要结果如下:（1）优化了稻曲球中Ust A的提取条件,最佳提取条件为:提取液为5%的甲酸水溶液、25℃、料液比为1:20。（2）优化了Ust A的分离方法。本研究首先比较了5种大孔吸附树脂对Ust A的分离效果,发现大孔树脂XAD-4具有较好的吸附效果。在样品液pH 7.0,吸附7 h,40%甲醇溶液（含0.1%三氟乙酸）洗脱条件下,可使大孔吸附树脂XAD-4的分离效果最佳,分离量达到296.2... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

稻曲菌素A、B、C、D、G、F的化学结构式Fig.1-1StructuresofUstA,B,C,D,GandF

稻曲菌素素A制备工艺优化及其生物活性分析203结果与分析3.1UstA检测方法的建立为能精确定量样品中的UstA，本研究首先建立了UstA的HPLC检测方法，经过对液相色谱条件进行优化，最终选择20%甲醇水溶液等梯度洗脱，流速0.5mL/min，254nm检测，该色谱条件下UstA保留时间为15.03min。将UstA稀释为0μg/mL、11.125μg/mL、22.25μg/mL、44.5μg/mL、89μg/mL、178μg/mL共5个浓度梯度，利用HPLC检测，以保留时间在15.03min的峰面积作为纵坐标，对应标样的浓度作为横坐标，绘制标准曲线。如图3-1所示，标准曲线R2为0.9991，线性拟合效果较好，说明该标准曲线准确度较高，该方法可以用于样品中UstA的检测。图3-1UstAHPLC标准曲线线Fig.3-1HPLCStandardcurveofUstA3.2提取方法优化结果3.2.1提取试剂筛选结果本研究选取了6种实验室常用提取试剂（图3-2），分别代表酸性、碱性、中性溶液，以及强极性、弱极性有机试剂，并分别检测其对稻曲球粉末中UstA的提取能力。提取实验结果表明，UstA水溶性较好，在水中加入1%不同性质的有机试剂，都可以将UstA提取出来。如图3-2所示，1%氢氧化钠的水溶液提取效果最差，进一步验证了UstA是一种酸性物质。同时由图可见，加入甲酸的水溶液对UstA的提取效率最高，达到了584.76μg/mL（图3-2），因此综合成本与提取效率，选用甲酸水作为UstA的提取试剂。

不同试剂提取效果对比图

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]稻曲球中稻绿核菌素及其制备、检测分析与生物活性[D]. 孙伟波.中国农业大学 2016



本文编号：2945485