虎斑乌贼两种FMRFamide受体基因的克隆和FMRFamide功能研究初探

发布时间：2021-01-07 08:27

　　虎斑乌贼（Sepia pharaonis）是我国重要的海洋经济头足类。由于过度捕捞、栖息地破坏和生境退化,虎斑乌贼的渔业资源自1980年代以来逐年降低,逐渐沦为濒危物种。虎斑乌贼资源的恢复和利用取决于该物种生殖特性的相关研究,然而当前我们对虎斑乌贼的生殖发育分子机制仍知之甚少。神经肽广泛分布在无脊椎动物和脊椎动物中,通常充当神经递质、神经调节剂和神经激素。神经肽FMRFamide（FLP）是已知的最大的神经肽家族,以四肽FMRFamide（Phe-Met-Arg-Phe-NH2;FMRFa）为代表。前期研究证明,FMRFamide与GnRH（Gonadotropin-releasing hormone）共同参与了头足类生殖发育的调控,而此过程中FMRFamide的两种受体扮演着重要的角色。本文在此基础上,首次开展了虎斑乌贼FMRFamide两种受体基因的克隆和序列特征分析;开展了两种受体的组织表达特异性研究,并对两种FMRFamide的受体和FMRFamide前体的mRNA进行了定位;最后,我们通过体外细胞实验检测了FMRFamide对细胞蛋白分泌活动的影响。研究结果如下:1.原位杂交... 

【文章来源】：浙江海洋大学浙江省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

虎斑乌贼的生殖器官A：雌性虎斑乌贼生殖器官；B：雄性虎斑乌贼生殖器官Fig.1-1ReproductiveorgansofS.pharaonis.

FaNaC结构的简化表示Fig.1-2SimplifiedrepresentationofFaNaCstructure

第二章神经肽FMRFamide在虎斑乌贼脑等组织的定位与功能初探15图2-1SpFMRF前体基因mRNA的脑组织原位杂交。A、D：正义探针对照组；B、E、F：反义探针实验组；C：部分脑的HE染色。A、B：视叶组织的原位杂交结果；D、E、F：食道上神经团的原位杂交结果。黑色箭头表示阳性信号（蓝色），标尺显示在图片右下方。Bl，基叶；svl，亚垂直叶；vl，垂直叶；olf，嗅叶；med，髓质；out.gr.cel，深层视网膜的外颗粒细胞层；inn.gr.cel，深层视网膜的内颗粒细胞层。Fig.2-1InsituhybridizationofSpFMRFprecursorgenemRNAinthebrain.A,D:senseprobeincontrolgroup;B,E,F:antisenseprobeinexperimentalgroup;C:HEstainingofpartofthebrain.A,Bshowtheresultsinopticlobe;D,E,F:theresultsinsuprasophagealmass;Theblackarrowindicatesapositivesignal(blue)andthescaleisshownbelowthepicture.bl:basallobe;vl:verticallobe;olf:olfactorylobe;med.,medulla;out.gr.cel.,outergranulecellslayerofthedeepretina,inn.gr.cel.,innergranulecellslayerofthedeepretina.2.2.2FMRFamide成熟肽在虎斑乌贼脑中的定位为了进一步确认神经肽FMRFamide在虎斑乌贼视叶中的分布位置，我们利用FaRF抗体（兔抗）进行免疫组化实验。我们利用苏木精和伊红染色分析虎斑乌贼视叶组织的解剖学构造：虎斑乌贼的视叶由深层视网膜和髓质区组成，它们之间分布着传入丛状神经纤维束（图2-2A）；深层视网膜由内颗粒细胞层和外细胞颗粒层构成，

【参考文献】：
期刊论文
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[2]人工养殖曼氏无针乌贼生殖系统的解剖学与组织学研究[J]. 蒋霞敏,符方尧,李正,冯宪栋.  中国水产科学. 2008(01)
[3]曼氏无针乌贼的卵子发生及卵巢发育[J]. 蒋霞敏,符方尧,李正,冯宪栋.  水产学报. 2007(05)
[4]全世界头足类资源及其动态（1981—1986）[J]. 励一鸣.  现代渔业信息. 1989(08)



本文编号：2962228