p38α调控胞内金黄色葡萄球菌抑制牛乳腺上皮细胞自噬的作用

发布时间：2021-01-23 00:59

　　牛乳腺炎是奶牛养殖场的常见疾病,每年由于本病的发生给养殖场造成巨大的经济损失。金黄色葡萄球菌作为传染性乳腺炎的主要病原体,可侵入牛乳腺上皮细胞,从而逃避免疫防御并导致持续感染。最近,自噬被认为是宿主细胞清除细胞内病原体的重要机制,故在本研究中,通过建立金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺上皮细胞胞内感染模型,从胞内病原存活与细胞自噬的角度,选取其中的关键蛋白p38α进行分析。通过Western Blot检测p38α的活化水平来验证金黄色葡萄球菌诱导MAC-T细胞自噬过程中可能激活p38MAPK信号通路。随后,为了进一步验证p38MAPK在金黄色葡萄球菌诱导MAC-T细胞自噬过程中的作用,利用p38α抑制剂SB203580和激活剂anisomycin干预胞内感染模型,免疫荧光分析胞内LC3阳性聚集点（自噬体）水平,同时Western Blot检测P62和LC3蛋白变化。通过Western Blot检测ULK1^ser757磷酸化进而验证p38α通过磷酸化ULK1^ser757位点抑制自噬,进而影响胞内金黄色葡萄球菌的存活。结果表明:金黄色葡萄球菌感染MAC-T... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

p38α活性对自噬流的影响

p38α调控胞内金葡菌抑制牛乳腺上皮细胞自噬的机制30图3.3p38α活性变化诱导LC3和P62蛋白表达影响(A)添加SB203580(30Μm)使用WesterBlot检测=P38α/P-P38α、LC3-II/LC3-I和P62蛋白水平以及定量分析。(B)添加anisomycin(10Μm)使用WesterBlot检测P38α/P-P38α、LC3-II/LC3-I和P62蛋白水平以及定量分析。（C）检测LC3免疫荧光阳性聚集点。数据表示为平均值±SD，N=3。（*，P<0.05;**，P<0.01）

山东农业大学硕士专业学位论文31ULK1是ATG1在哺乳动物中的同源蛋白，ULK1的活化决定了自噬的起始，而ULK1ser757的磷酸化阻止了细胞自噬的进程，所以，为了探讨金葡菌感染MAC-T中P38α活性的变化是否对ULK1ser757位点存在影响，从而影响自噬。我们通过使用抑制剂SB203580以及激活剂anisomycin后,在金葡菌感染MAC-T细胞6h时，检测ULK1ser757磷酸化水平。结果如图所示，添加SB203580后相比金葡菌诱导的ULK1ser757位点的磷酸化水平的显著降低，添加anisomycin后相比金葡菌诱导的ULK1ser757位点的磷酸化水平的显著升高。则可表明，p38α活化后可以通过磷酸化ULK1sre757进而抑制MAC-T细胞的自噬（图3.4）。图3.4p38α活性变化诱导ULK1ser757蛋白表达影响（A）分别使用SB203580(30Μm)和anisomycin(10Μm)改变p38MAPK活性，通过WesternBlot检测ULK1和P-ULK1ser757。（B）定量分析P-ULK1ser757/ULK1。数据表示为平均值±SD，N=3。（*，P<0.05;**，P<0.01）3.4P38α通过磷酸化ULK1ser757位点水平抑制金黄色葡萄球菌诱导的自噬


本文编号：2994228