荔枝草和三种多酚类单体物质对斑马鱼肝损伤的修复作用机理研究

发布时间：2021-01-24 08:32

　　斑马鱼具有许多独特的特征,如体积小,外部受精,快速发育和对药物施用的极端敏感性等,这是筛选和评估药物的理想模型。在疾病研究中肝损伤和炎症反应是发生率较高的疾病,研究关于治疗肝损伤及抗炎的药物有很大的研究前景。本文利用硫代乙酰胺（TAA）诱导斑马鱼肝损伤模型和脂多糖（LPS）诱导的斑马鱼炎症模型评价了荔枝草乙醇提取物（SPEE）、黄芩素（BA）、槲皮素（Que）和绿原酸（CGA）的抗氧化、抗炎及保肝作用。采用了酶活测定、气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）定量分析、免疫荧光染色、蛋白质印迹（Western blot）、琼脂糖凝胶电泳、PCR及Q-PCR等方法。主要研究结果如下:1.荔枝草对LPS刺激的斑马鱼胚胎具有抗氧化作用和抗炎作用。其次,SPEE可显著减轻成年斑马鱼TAA诱导的肝空泡,脂质积聚和肝纤维化。同时,SPEE暴露后NO含量和脂质代谢相关基因ApoE和PPAR-γ含量显著下调。从机制上讲,SPEE可以减少肝细胞凋亡,促进TAA诱导模型中转录因子（Nrf2）从细胞核向细胞质的转运。最后,SPEE可以在H₂O₂刺激的条件下调节各种炎性细胞... 

【文章来源】：江西师范大学江西省

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

荔枝草提取物总离子流图

23用，发现TNF-α和IL-1β的相对mRNA水平以浓度依赖的方式显著下调（图2-6-D）。相反，应激诱导的血红素加氧酶-1（HO-1），在SPEE处理后其表达水平大大上调。综上所述，以上数据表明SPEE在斑马鱼胚胎中具有强大的抗氧化剂和抗炎特性。图2-6SPEE在LPS诱导的斑马鱼胚胎中的抗氧化和抗炎作用Figure2-6Theantioxidantandanti-inflammatoryeffectsofSPEEinLPS-inducedzebrafishembryos2.2.3SPEE对TAA诱导的成年斑马鱼的肝保护作用为了进一步评估SPEE对硫代乙酰胺（TAA）在成年斑马鱼中引起的急性肝损伤的保护作用。如图2-7-A所示，通过使用苏木精和伊红（H＆E）染色，TAA（5mg/mL）处理72h引起肝损伤显著增加，肝细胞中的大脂肪液泡数目明显多于对照组。此外，斑马鱼进一步暴露于0.5mg/mLSPEE达24小时，其大脂肪液泡和坏死面积明显减少。另一方面，组织病理学分析显示通过油红O染色，在TAA诱导的组的肝组织中已经沉积了大量脂质滴。与上述结果相似，TAA+

24SPEE组中的脂滴数与TAA刺激组相比显著下降（图2-7-B）。此外，本研究还通过Gemori染色检查了肝纤维化程度，TAA诱导的肝纤维化水平显著增加，而SPEE大大改善了成年斑马鱼的肝脂肪变性（图2-7-C）。本研究还检测了一氧化氮（NO）的相对含量。结果显示，与对照组或SPEE暴露组相比，TAA组的NO产量大大增加，TAA+SPEE组的NO水平被显著抑制（图2-7-D）。本研究还检查了SPEE是否影响脂质代谢相关基因的表达。结果表明，TAA诱导的斑马鱼经SPEE处理后，CytoP450，ApoE和PPAR-γ等基因的相对mRNA水平也显著降低（图2-7-E）。总之，这些结果进一步表明，SPEE对成年斑马鱼具有有效的抗炎和保肝作用。图2-7SPEE对TAA诱导的成年斑马鱼的肝保护作用Figure2-7HepatoprotectiveeffectsofSPEEintheTAA-inducedadultzebrafish2.2.4SPEE处理后细胞凋亡和免疫基因表达为了测试SPEE是否影响斑马鱼肝脏中的细胞凋亡，将成年鱼暴露于对照组，SPEE，TAA和TAA+SPEE组，通过TUNEL染色检测了凋亡细胞。发现SPEE可以抑制细胞凋亡，而TAA可以显著增加肝细胞的凋亡水平。最重要的是，SPEE可以降低TAA+SPEE组中由TAA诱导的凋亡水平（图2-8-A）。


本文编号：2996941