抗菌蛋白AMEP412的鉴定及其在防治马铃薯疮痂病上的应用

发布时间：2021-01-30 13:21

　　疮痂病是由疮痂链霉菌（Streptomyces spp.）引起的一种危害马铃薯根茎的细菌性病害。近年来,该作物的种植面积持续扩大,疮痂病害的发病情况也日渐严重。鉴于传统的化学防治会造成环境污染等问题,寻找高效低毒的生物防治手段变得尤为重要。本研究以疮痂链霉菌为指示菌株,从马铃薯疮痂病的病害土壤中分离和筛选得到抗菌效果明显优于其它菌株的生防菌,对其进行形态特征、生理生化性质与分子鉴定,确定菌株分类地位。采用离子交换层析等方法对该菌株的培养液上清进行逐级分离纯化,获得抗菌活性蛋白,切胶并送出进行质谱鉴定。随后对该抗菌蛋白进行最小抑菌浓度等相关性质分析。在此基础上,以抗菌蛋白的表达量为参考指标,对其培养条件进行优化,最后通过室内盆栽试验和大田试验进一步验证菌株发酵液对马铃薯疮痂病的防治效果,具体研究结果如下:本试验采用稀释平板法和单菌落划线法从马铃薯疮痂病的病害土壤中分离得到50株细菌,随后进行抗菌试验,通过初筛与复筛方式获得一株防效显著的菌株,将其编号为BU412。结合形态学、生理生化性质分析和分子鉴定的结果最终确定BU412为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。运用AKT... 

【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
    1.1 引言
    1.2 马铃薯疮痂病的研究现状
        1.2.1 马铃薯疮痂病的病原种类
        1.2.2 马铃薯疮痂病病原的鉴定方法
    1.3 枯草芽孢杆菌的研究进展
        1.3.1 枯草芽孢杆菌简介
        1.3.2 枯草芽孢杆菌在生物防治上的应用
    1.4 枯草芽孢杆菌抗菌蛋白的研究进展
        1.4.1 枯草芽孢杆菌抗菌蛋白的产生途径
        1.4.2 枯草芽孢杆菌抗菌蛋白的作用机制
        1.4.3 枯草芽孢杆菌抗菌蛋白的分离纯化
        1.4.4 枯草芽孢杆菌抗菌蛋白的产量优化
    1.5 研究目的与意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 供试菌株
        2.1.2 供试培养基
        2.1.3 试验用缓冲溶液
        2.1.4 主要试剂
        2.1.5 主要仪器
        2.1.6 试验所用软件
    2.2 方法
        2.2.1 目的菌株的分离与筛选
        2.2.2 目的菌株的鉴定
        2.2.3 抗菌蛋白的分离、鉴定与活性测试
        2.2.4 抗菌蛋白的相关性质分析
        2.2.5 抗菌蛋白的产量优化
        2.2.6 种植试验
3 结果与分析
    3.1 生防菌株的分离与筛选
    3.2 生防菌株的鉴定
        3.2.1 形态学及生理生化性质分析
        3.2.2 分子生物学鉴定分析
    3.3 抗菌蛋白的分离与鉴定
TM Q离子交换层析">        3.3.1 Source^TM Q离子交换层析
TM 75 分子筛层析">        3.3.2 Superdex^TM 75 分子筛层析
        3.3.3 质谱测序分析
    3.4 抗菌蛋白的性质分析
        3.4.1 抗菌蛋白的最小抑菌浓度分析
        3.4.2 抗菌蛋白的稳定性检测
        3.4.3 抗菌蛋白的功能区分析
        3.4.4 抗菌蛋白的定位分析
        3.4.5 抗菌蛋白的抗菌谱分析
    3.5 抗菌蛋白的发酵条件优化
        3.5.1 碳源对蛋白产量的影响
        3.5.2 氮源对蛋白产量的影响
        3.5.3 pH对蛋白产量的影响
        3.5.4 培养温度对蛋白产量的影响
        3.5.5 接种量对蛋白产量的影响
        3.5.6 培养时间对蛋白产量的影响
        3.5.7 转速对蛋白产量的影响
        3.5.8 Plackett-Burman试验分析
        3.5.9 中心组合设计试验分析
        3.5.10 优化条件的验证试验分析
    3.6 菌株BU412 的发酵液对马铃薯疮痂病的防效
        3.6.1 盆栽试验防治效果
        3.6.2 田间试验防治效果
4 讨论
    4.1 拮抗菌株的分离与鉴定
    4.2 抗菌蛋白的鉴定
    4.3 抗菌蛋白的稳定性
    4.4 抗菌蛋白的功能区
    4.5 抗菌蛋白的作用部位与抗菌谱
    4.6 抗菌蛋白的产量优化
    4.7 菌株BU412 的发酵液对疮痂病害的防效分析
5 结论
参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
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[2]马铃薯疮痂病病原菌鉴定及其生物学特性[J]. 李驰,刘艳,梁燕,邢星,张建平,李得宙,张笑宇.  农业生物技术学报. 2019(05)
[3]芽孢杆菌BU108抑制疮痂链霉菌发酵条件的优化[J]. 申永瑞,宋烨,向君亮,王佳琦,刘权,殷奎德.  贵州农业科学. 2019(03)
[4]肿节风炭疽病拮抗细菌的筛选与鉴定[J]. 宋利沙,蒋妮,缪剑华,蓝祖栽.  植物保护. 2018(06)
[5]马铃薯疮痂病菌（Streptomyces spp.）的鉴定[J]. 张建平,刘佳,哈斯,尹玉和,林团荣,胡冰,张笑宇.  中国马铃薯. 2018(05)
[6]拮抗细菌菌株YJ15的分离鉴定、发酵条件优化及对越橘灰霉病的防效[J]. 王春伟,王燕,张曦倩,董田,温智浩,刘倩茹,李田丽,王怡惠,王赛风,张作刚,王建明,王美琴.  园艺学报. 2018(10)
[7]枯草芽孢杆菌的研究进展[J]. 王源,赵文文,刁新平.  黑龙江畜牧兽医. 2018(19)
[8]马铃薯疮痂病研究进展[J]. 李爽,杨美军,张云,李婷婷,王振钰,曾潆,韩玉珠.  中国马铃薯. 2018(04)
[9]芽孢杆菌BU108的分离鉴定及对马铃薯疮痂病的防治[J]. 宋烨,向君亮,申永瑞,王佳琦,刘权,殷奎德.  浙江农林大学学报. 2018(04)
[10]马铃薯疮痂病拮抗菌的筛选鉴定及防治效果初探[J]. 李玉聪,李滨影,油心怡,刘宇豪,周波,林榕姗.  生物技术通报. 2018(10)



本文编号：3008975