应用RNA干扰技术对旋毛虫Nudix水解酶基因功能的研究

发布时间：2017-04-12 18:17

  本文关键词：应用RNA干扰技术对旋毛虫Nudix水解酶基因功能的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：Nudix水解酶(Nudix hydrolase,Nd)是一种广泛存在于多种生物体内的一种水解酶。它可以水解多种有机焦磷酸盐,包括核苷二磷酸盐、核苷三磷酸盐、二核苷酸多磷酸盐、二磷酸肌醇多磷酸盐、核苷酸糖和RNA帽端。本实验室的前期研究发现旋毛虫Nudix水解酶(Trichinella spiralis Nd,Ts Nd)与旋毛虫侵入小鼠小肠上皮细胞(IEC)有关。本研究通过RNA干扰(RNAi)技术研究旋毛虫肌幼虫的Ts Nd基因功能,观察Ts Nd基因被沉默后旋毛虫幼虫在体外的存活情况、感染能力和雌虫生殖力。首先设计与Ts Nd同源的ds RNA和si RNA,通过浸泡法和电穿孔法将其导入到旋毛虫肌幼虫体内。然后通过Real-time PCR技术和Western blotting技术分别幼虫Ts Nd基因转录水平和蛋白表达水平的变化。结果发现,ds RNA和si RNA均能导致Ts Nd表达明显降低。同时设计一条与旋毛虫蛋白酶体β7亚基(Tspst)同源的ds RNA,用来验证RNAi具有基因特异性,即ds RNA-Ts Nd和ds RNA-Tspst只能分别引起与它们同源的基因沉默。将ds RNA-Ts Nd和si RNA导入旋毛虫肌幼虫体内后,在培养过程中观察幼虫存活情况。体外观察Ts Nd基因沉默对旋毛虫幼虫侵入IEC的影响,动物实验观察Ts Nd基因沉默对旋毛虫幼虫在体内侵入肠粘膜及其发育和生殖力的影响。材料与方法1.材料本实验所用旋毛虫(T.spiralis,T1)由昆明小鼠保种和传代。p GEM-T-Ts Nd/M109:含旋毛虫Ts Nd基因重组质粒菌株,由实验室前期构建和保存。p MAL-C2X-Tspst/BL21:含旋毛虫Tspst基因重组质粒菌株,由实验室前期构建和保存。实验用BALB/c小鼠:购自河南省实验动物中心。2.ds RNA和si RNA的设计与合成登陆Gen Bank查询Ts Nd和Tspst的m RNA序列。①ds RNA的设计与合成;选取Ts Nd m RNA 650~1301bp和Tspst m RNA 88~742bp作为2条ds RNA的靶序列。根据靶序列设计含有T7启动子的PCR引物,以含Ts Nd和Tspst的重组质粒为模板PCR扩增得到含T7启动子的PCR产物,即ds RNA体外转录模板,然后体外转录合成ds RNA-Ts Nd和ds RNA-Tspst。②si RNA的设计与合成:根据Ts Nd m RNA序列,设计3个si RNA和1个对照si RNA,根据si RNA靶向m RNA的位点,分别命名为si RNA-275、si RNA-425、si RNA-715和对照si RNA,用FAM荧光标记对照si RNA,以便在转染过程中跟踪si RNA。3.将ds RNA和si RNA导入旋毛虫肌幼虫体内应用浸泡法和电穿孔法,分别将20、40或60 ng/μL ds RNA,1、2或3μM si RNA和Control si RNA分别导入旋毛虫幼虫体内,其中对照si RNA组旋毛虫幼虫可以在荧光显微镜下观察荧光信号,以确定si RNA是否被成功导入到旋毛虫肌幼虫体内。4.RNAi对Ts Nd基因转录与表达水平的影响利用Real-time PCR和Western blotting分别检测ds RNA和si RNA处理后幼虫Ts Nd基因转录和蛋白质表达水平的变化。5.RNAi对Ts Nd基因干扰的特异性分析用浸泡法分别将40ng/μL ds RNA-Ts Nd和ds RNA-Tspst导入旋毛虫肌幼虫体内,检测2组旋毛虫肌幼虫中Ts Nd和Tspst表达水平的变化。6.Ts Nd基因沉默后对幼虫体外存活及侵入IECs的影响利用浸泡法和电穿孔法,将ds RNA、si RNA和对照si RNA分别导入到旋毛虫肌幼虫体内后,观察幼虫体外死亡率。将100条经过1、1.5、2、2.5、3μM si RNA-275或20、30、40、50、60ng/μl ds RNA-Ts Nd电穿孔处理后18h的肌幼虫与500μl半固体培养基混匀后接种到24孔板中的IECs单层上。37℃、5%CO2孵育2h后观察幼虫侵入率。7.Ts Nd基因沉默对旋毛虫侵入肠粘膜及其发育和生殖力的影响将160只BALB/c小鼠分为8组(每组20只):ds RNA浸泡法3组(ds RNA-Ts Nd处理组、转染试剂Lip2000和PBS对照组)、ds RNA电穿孔法2组(ds RNA处理组和PBS对照组及si RNA电穿孔法3组(si RNA-275处理组、对照si RNA处理组和PBS对照组)。将Ts Nd基因沉默后的幼虫经口感染小鼠(300条幼虫/只)。感染后6d后剖杀10只小鼠收集成虫,感染后35d后剖杀另外10只小鼠收集肌幼虫,计算肠道成虫荷和肌幼虫荷及其减虫率。将收集的成虫进行体外培养72h,收集新生幼虫,计算雌虫体外72h新生幼虫产量,作为成虫生殖力指标。雌虫体外72h新生幼虫产量=72h新生幼虫数/雌虫数。结果1.ds RNA和si RNA的导入:琼脂糖凝胶检测结果,发现2个清晰条带:ds RNA-Ts Nd(691bp)和ds RNA-Tspst(694bp),结果与预期大小相同。2.荧光标记跟踪结果显示,通过电穿孔法将对照si RNA导入到幼虫18h后,在荧光显微镜下发现幼虫体内有明显的荧光,而未处理的幼虫则无荧光。3.ds RNA对旋毛虫肌幼虫Ts Nd转录和表达水平的影响(1)用浸泡法将20、40和60 ng/μl ds RNA-Ts Nd导入幼虫后1d,Real-time PCR结果显示,20、40和60 ng/μl ds RNA-Ts Nd处理组Ts Nd m RNA表达量相对于PBS对照组分别为48.7%、34.7%和29.5%,表达量的降低具有统计学意义(P0.05);lip2000对照组与PBS对照组之间Ts Nd m RNA表达量没有明显变化(P0.05)。(2)用浸泡法将40ng/μl ds RNA-Ts Nd导入幼虫后1d、2d、3d、4d、5d和6d时,Real-time PCR结果显示,ds RNA处理组Ts Nd m RNA表达量相对于PBS对照组分别为34.2%、42.7%、52.3%、57.7%、79.7%和86.2%(F1d=7.429,F2d=0.013,F3d=0.016,F4d=10.002,F5d=5.173,F6d=0.715;P0.05);lip2000对照组与PBS对照组之间Ts Nd m RNA表达量没有明显变化(P0.05)。Western blotting结果显示,相对于PBS对照组,ds RNA-Ts Nd处理组在浸泡处理后第1d、2d、3d、4d、5d、6d时,Ts Nd表达量分别为101.2%、78.7%、43.6%、44.3%、89.2%、100.6%。而lip2000对照组相对于PBS对照组Ts Nd表达量没有明显变化。电穿孔处理后3d,ds RNA-Ts Nd处理组Ts Nd表达量相对于PBS对照组为41.8%。(3)电穿孔法将40ng/μl ds RNA导入幼虫后1d,与PBS对照组相比,Ts Nd m RNA表达量降低了74.2%(F=7.033,P0.05)。4.si RNA对旋毛虫肌幼虫Ts Nd转录和表达水平的影响(1)通过电穿孔法将2μM si RNA-275、si RNA-425或si RNA-715导入到旋毛虫肌幼虫体内后1d,si RNA-275、si RNA-425和si RNA-715处理组幼虫Ts Nd基因转录水平相对于PBS对照组分别为26.7%、77.4%和83.7%(P0.05)。Control si RNA处理组幼虫Ts Nd基因转录水平与PBS对照组相比没有明显差异(P0.05)(4.7 A)。Western blotting结果显示,与PBS对照组相比,si RNA-275、si RNA-425和si RNA715处理组Ts Nd表达量分别为23.3%、79.5%和94.8%。对照si RNA处理组Ts Nd表达量相对于PBS对照组无明显变化(P0.05)。(2)通过电穿孔法将1μM、2μM或3μM si RNA-275导入到旋毛虫肌幼虫体内后1d,1μM、2μM和3μM si RNA-275处理组幼虫Ts Nd基因转录水平相对于PBS对照组分别为48.0%、27.7%和19.2%(P0.05)。Control si RNA处理组幼虫Ts Nd基因转录水平与PBS对照组相比没有明显差异(P0.05)(4.7 B)。(3)通过电穿孔法将2μM si RNA-275导入到旋毛虫肌幼虫体内后1d、3d、5d和7d,幼虫Ts Nd基因转录水平相对于PBS对照组分别为27.7%、39.3%、49.7%和57.9%(P0.05)。Control si RNA处理组幼虫Ts Nd基因转录水平与PBS5.RNAi对Ts Nd基因干扰的特异性分析用浸泡法分别将ds RNA-Ts Nd和ds RNA-Tspst导入幼虫体内后,Real-time PCR结果显示,ds RNA-Ts Nd处理组与PBS对照组相比,Ts Nd m RNA表达量降低了74.6%(P0.05),而Tspst m RNA表达量无明显变化(P0.05)。ds RNA-Tspst处理组与PBS对照组相比,Ts Nd m RNA表达无明显变化(P0.05),而Tspst m RNA表达量降低了73.2%(P0.05)。Western blotting分析显示,与PBS空白对照组相比,ds RNA-Ts Nd处理组Ts Nd表达量降低了62.9%(P0.05),Tspst表达量则没有明显变化(P0.05);而ds RNA-Tspst处理组Ts Nd表达量没有明显变化(P0.05),而Tspst表达量则降低了60.6%(P0.05)。结果表明,RNAi对Ts Nd基因转录和表达水平的干扰均具有特异性。6.ds RNA和si RNA对旋毛虫体外存活的影响ds RNA浸泡法处理组、Lip2000和PBS对照组的幼虫死亡率分别为32.2%、34.2%和33.6%(χ2=0.138,P0.05)。ds RNA电穿孔处理组和PBS组的幼虫死亡率分别为35.2%和33.1%(χ2=0.116,P0.05)。si RNA电穿孔处理后,si RNA-275处理组、对照si RNA处理组和PBS对照组幼虫死亡率分别为33.1%、32.3%和31.9%(χ2=0.024,P0.05)。7.Ts Nd基因沉默对旋毛虫体外侵入IECs的影响(1)浸泡法将20、30、40、50、60ng/μl ds RNA-Ts Nd导入到旋毛虫肌幼虫体内18h后,观察幼虫体外对IECs的侵入,结果发现20、30、40、50、60ng/μl ds RNA-Ts Nd处理组、Lip2000和PBS对照组幼虫侵入率分别为54.4%,44.7%,39.2%,35.3%,32.7%,61.7%和63.1%。30、40、50、60ng/μl ds RNA-Ts Nd处理组幼虫侵入率与Lip2000和PBS对照组相比明显降低(χ230=6.640,χ240=10.982,χ250=16.778,χ260=19.317;P0.05)。幼虫侵入率与ds RNA-Ts Nd浓度呈负相关(r=-0.96798)。(2)电穿孔法将20、30、40、50、60ng/μl ds RNA-Ts Nd导入到旋毛虫肌幼虫体内后,观察幼虫体外对IECs的侵入,结果发现20、30、40、50、60ng/μl ds RNA-Ts Nd处理组和PBS对照组幼虫侵入率分别为52.6%,43.8%,39.5%,33.8%,30.8%和58.3%。30、40、50、60ng/μl ds RNA-Ts Nd处理组幼虫侵入率与PBS对照组相比明显降低(χ230=4.258,χ240=7.044,χ250=12.956,χ260=16.099;P0.05)。幼虫侵入率与ds RNA-Ts Nd浓度呈负相关(r=-0.98707)。(3)电穿孔法将1、1.5、2、2.5、3μM si RNA-275导入到旋毛虫肌幼虫后,观察幼虫体外对IECs的侵入,结果显示1、1.5、2、2.5、3μM si RNA-275处理组、control si RNA处理组和PBS对照组幼虫侵入率分别为50.3%,42.6%,37.0%,33.6%,30.6%,59.4%和58.3%。1.5、2、2.5、3μM si RNA-275处理组幼虫侵入率与control si RNA处理组和PBS对照组相比明显降低(χ21.5=5.873,χ22=5.873,χ22.5=5.873,χ23=5.873;P0.05)。幼虫侵入率与ds RNA-Ts Nd浓度呈负相关(r=-0.97941)。8.Ts Nd基因沉默对旋毛虫侵入肠粘膜及其发育和生殖力的影响(1)ds RNA浸泡法:ds RNA处理组的成虫荷(71.4±16.0条)明显低于Lip2000对照组(140.2±14.9条)和PBS对照组(142.6±20.2条)(P0.05);Lip2000对照组的成虫荷与PBS对照组相比差异无统计学意义(P0.05);3组成虫体外72h新生幼虫产量分别为51.3±2.6、50.8±3.1及53.7±2.6(P0.05)。ds RNA处理组的肌幼虫荷为5805±1815条/g,明显低于Lip2000对照组的9363±3130条/g和PBS对照组的9624±3624条/g(P0.05);而2个对照组肌幼虫荷的差异无统计学意义(P0.05)。与PBS对照组相比,ds RNA处理组的成虫和肌幼虫减虫率分别为49.9%和39.9%。(2)ds RNA电穿孔法:ds RNA处理组肠道成虫荷为38.4±9.6条,明显低于PBS对照组的113.5±18.8条(F=23.261,P0.05);2组成虫体外72h新生幼虫产量分别为72.3±6.1与78.3±6.9(P0.05)。ds RNA处理组肌幼虫荷为1943±97条/克,明显低于PBS对照组的6376±1197条/克(F=42.475,P0.05)。ds RNA处理组的成虫和肌幼虫减虫率分别为83.4%和69.5%。ds RNA电穿孔法的成虫与肌幼虫减虫率均明显高于ds RNA浸泡法(χ2成虫=24.442,χ2肌幼虫=17.419;P0.05)。(3)si RNA电穿孔法:si RNA-275处理组的肠道成虫荷为37.3±10.2条,明显低于对照si RNA处理组的109.6±9.7条(P0.05)和PBS对照组的102.5±20.1条(P0.05),而对照si RNA处理组与PBS对照组成虫荷之间的差异无统计学意义(P0.05);3组成虫体外72h新生幼虫产量分别为70.7±3.5、74.1±6.6及72.8±4.7(P0.05)。si RNA-275处理组的肌幼虫荷为1765±360条,明显低于对照si RNA处理组的6066±967条(P0.05)和PBS对照组的5654±1422条(P0.05),而对照si RNA处理组与PBS对照组之间肌幼虫荷的差异无统计学意义(P0.05)。si RNA-275处理组的成虫和肌幼虫减虫率分别为63.6%和68.8%。结论1.通过体外转录成功合成了旋毛虫ds RNA-Ts Nd和ds RNA-Tspst。2.ds RNA浸泡法和电穿孔法均可导致Ts Nd转录与表达水平的下降,对Ts Nd基因的干扰具有特异性;si RNA电穿孔法亦可明显降低Ts Nd的转录与表达水平。3.应用ds RNA与si RNA沉默Ts Nd基因后,旋毛虫肌幼虫的体外存活率无明显变化。4.Ts Nd基因沉默能显著抑制幼虫在体外对IECs的侵入。5.沉默Ts Nd基因可明显影响幼虫对肠粘膜的侵入和发育,肠道成虫与肌幼虫荷明显降低。
【关键词】：旋毛虫 Nudix水解酶 侵入 RNA干扰
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.7;Q78
【目录】：

• 摘要5-11
• Abstract11-19
• 英文缩略词表19-20
• 1 前言20-23
• 1.1 旋毛虫20
• 1.2 旋毛虫侵入机制研究进展20-21
• 1.3 RNA干扰技术21
• 1.4 Nudix水解酶21-22
• 1.5 研究意义22-23
• 2 实验材料23-26
• 2.1 主要试剂23-24
• 2.2 主要仪器24-25
• 2.3 材料25-26
• 3 实验方法及步骤26-49
• 3.1 技术路线26-27
• 3.2 TsNd基因siRNA设计与合成27
• 3.3 TsNd基因dsRNA设计与合成27-34
• 3.4 旋毛虫肌幼虫的收集34
• 3.5 将siRNA和dsRNA导入旋毛虫肌幼虫34-36
• 3.6 Real-time PCR检测TsNd基因转录水平的变化36-40
• 3.7 Weatern blotting检测TsNd基因表达水平的变化40-46
• 3.8 RNA干扰的基因特异性46
• 3.9 TsNd基因沉默对肌幼虫体外存活及侵入IECs的影响46-47
• 3.10 TsNd基因沉默对侵入肠粘膜及其发育和生殖力的影响47-48
• 3.11 数据处理48-49
• 4 结果49-62
• 4.1 质粒pGEM-T-TsNd和pMAL-C2X-Tspst的提取49
• 4.2 dsRNA体外转录模板（即含T7 启动子PCR产物）49-50
• 4.3 体外转录合成dsRNA50-51
• 4.4 将siRNA和dsRNA导入到旋毛虫肌幼虫体内51
• 4.5 dsRNA对TsNd表达的影响51-53
• 4.6 siRNA对TsNd表达的影响53-55
• 4.7 RNA干扰的基因特异性55-56
• 4.8 TsNd基因沉默后肌幼虫体外存活及侵入IECs情况56-59
• 4.9 TsNd基因沉默后对幼虫侵入肠粘膜、发育及雌虫生殖力的影响59-62
• 5 讨论62-64
• 5.1 利用RNA干扰技术沉默TsNd基因的表达62
• 5.2 TsNd在旋毛虫侵入宿主过程中所起作用的分析62-64
• 6 结论64-65
• 参考文献65-68
• 综述RNA干扰技术在寄生虫基因功能研究中的应用68-80
• 参考文献76-80
• 个人简历80-81
• 致谢81

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘静;A Novel Vector for Abundant Expression of Antisense RNA, Triplex forming RNA and Ribozyme in vivo[J];High Technology Letters;2000年04期

2 鲁慧英;Detection of hepatitis C virus RNA sequences in cholangiocarcinomas in Chinese and American patients[J];Chinese Medical Journal;2000年12期

3 梁小兵 ,万国江 ,黄荣贵;Distribution and Variation of Ribonucleic Acid (RNA) and Protein and Its Hydrolysis Products in Lake Sediments[J];Chinese Journal of Geochemistry;2002年02期

4 Verheyden B ,徐其武;口服脊髓灰质炎疫苗核壳和RNA的稳定性[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2002年01期

5 CMBE译文组;探索小RNA的功能[J];现代临床医学生物工程学杂志;2004年03期

6 沈维干;RNA interference and its current application in mammals[J];Chinese Medical Journal;2004年07期

7 孙娣;汪洋;张丽娟;闫玉清;;一种简捷提取植物总RNA的方法[J];黑龙江医药;2005年06期

8 南海波;;小麦总RNA的提取[J];渤海大学学报(自然科学版);2006年01期

9 王冬来;;RNA干扰的成功与困惑[J];中国生物化学与分子生物学报;2008年06期

10 杨静;;试验性的小RNA药物可能引发失明[J];中国生物化学与分子生物学报;2009年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 金由辛;;面向21世纪的RNA研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展（下册）[C];1999年

2 ;第四届RNA全国研讨会大会报告日程安排[A];第四届全国RNA进展研讨会论文集[C];2005年

3 ;Function of Transfer RNA Modifications in Plant Development[A];植物分子生物学与现代农业——全国植物生物学研讨会论文摘要集[C];2010年

4 王峰;张秋平;陈金湘;;棉花总RNA的快速提取方法[A];中国棉花学会2011年年会论文汇编[C];2011年

5 关力;陈本iY;iJ云虹;郭培芝;魏重琴;邱苏吾;苗健;;关于动物}D~T中RNAn,定方法的研究[A];中国生理科学会学术会议论文摘要汇编（生物化学）[C];1964年

6 夏海滨;;小RNA在免疫学领域中的应用研究进展[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

7 ;The stability of hepatitis C virus RNA in various handling and storage conditions[A];中国输血协会第四届输血大会论文集[C];2006年

8 郭德银;;RNA干扰在病毒研究和控制中的应用[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年

9 甘仪梅;杨业华;王学奎;曹燕;杨特武;;棉花总RNA快速提取[A];中国棉花学会2007年年会论文汇编[C];2007年

10 ;Identification and characterization of novel interactive partner proteins for PCBP1 that is a RNA-binding protein[A];中国优生优育协会第四届全国学术论文报告会暨基因科学高峰论坛论文专辑[C];2008年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 冯卫东;研究人员发现可破坏肿瘤抑制基因的小RNA[N];科技日报;2009年

2 记者 储笑抒 通讯员 盛伟;人体微小RNA有望提前发出癌症预警[N];南京日报;2011年

3 泸州医学院副教授、科普作家 周志远;“大头儿子”与环状RNA[N];第一财经日报;2014年

4 麦迪信;小分子RNA可能有大作用[N];医药经济报;2003年

5 董映璧;美发现基因调控可回应“RNA世界”[N];科技日报;2006年

6 张忠霞;特制RNA轻推一下,就能“唤醒”基因[N];新华每日电讯;2007年

7 聂翠蓉;RNA：纵是配角也精彩[N];科技日报;2009年

8 冯卫东;RNA干扰机制首次在人体中获得证实[N];科技日报;2010年

9 冯卫东　王小龙;英在地球早期环境模拟条件下合成类RNA[N];科技日报;2009年

10 记者 常丽君;新技术让研究进入单细胞内RNA的世界[N];科技日报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 王赵玮;昆虫RNA病毒复制及昆虫抗病毒天然免疫机制研究[D];武汉大学;2014年

2 包纯;一类新非编码RNA的发现以及产生和功能的初探[D];华中师范大学;2015年

3 李语丽;基于MeRIP-seq的水稻RNA m6A甲基化修饰的研究[D];中国科学院北京基因组研究所;2015年

4 熊瑜琳;miR-122靶位基因STAT3调控长链非编码 RNA Lethe促进HCV复制的机制研究[D];第三军医大学;2015年

5 祝宇红;离子条件下RNA折叠稳定性的理论研究[D];浙江大学;2014年

6 刘立江;核盘菌新型RNA病毒研究[D];华中农业大学;2015年

7 刘雪梅;随机RNA文库技术的建立及其应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年

8 付汉江;非编码RNA克隆分析及其功能初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年

9 侯伟;DNAzyme/LNAzyme切割RNA反应动力学实时分析体系的建立及在细胞内阻断丙型肝炎病毒基因表达的实验研究[D];浙江大学;2006年

10 刘长梅;细胞和动物水平稳定整合的RNA干扰技术的建立及在小鼠珠蛋白表达调控研究中的运用[D];中国协和医科大学;2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 陆聪儿;条纹斑竹鲨再生肝脏中差异RNA的研究[D];浙江理工大学;2015年

2 张晓辉;小鼠几种长链非编码RNA基因功能的初步研究[D];昆明理工大学;2015年

3 全弘扬;长链非编码RNA在细胞内质网应激反应中的相关作用及机制研究[D];北京协和医学院;2015年

4 胡亮;DDX19A识别PRRSV基因组RNA并激活NLRP3炎症小体[D];中国农业科学院;2015年

5 张帅兵;应用RNA干扰技术对旋毛虫Nudix水解酶基因功能的研究[D];郑州大学;2015年

6 郑芳芳;肺癌RNA-Seq数据中RNA编辑事件的识别算法和系统分析[D];苏州大学;2015年

7 陈瑞东;长链非编码RNA MEG3在胰腺癌发生发展中作用的实验研究[D];苏州大学;2015年

8 刘骏武;线虫和水稻中环状RNA的预测及分析[D];华中农业大学;2015年

9 李猷;利用RNA干扰技术提高番茄抗TMV侵染能力的研究[D];牡丹江师范学院;2015年

10 吴术盛;SVCV感染EPC细胞microRNA表达谱的初步研究[D];华中农业大学;2015年

  本文关键词：应用RNA干扰技术对旋毛虫Nudix水解酶基因功能的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：301875