中国甘蔗梢腐病病原镰刀菌的种类特异性鉴定及快速检测

发布时间：2017-04-13 01:05

  本文关键词：中国甘蔗梢腐病病原镰刀菌的种类特异性鉴定及快速检测，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：甘蔗梢腐病是影响我国甘蔗生产的重要真菌性病害,病原是镰刀菌属。如何准确鉴定并快速的诊断甘蔗梢腐病对甘蔗的病害防控和种植管理有重要的意义。方法：于2012-2013年,通过从全国各大甘蔗产区(福建,广东,广西,海南和云南等)采集甘蔗病症叶片样品,总共分离鉴定病原菌株113株。基于核糖体DNA的非转录间隔区(rDNA-ITS)序列聚类分析和显微形态学观察,首次完成鉴定影响我国甘蔗梢腐病病原的多样性,主要为镰刀菌属(Fusarium)的两个类群gxl (F. verticillioides)及gx2 (F. proliferatum)组成。基于ITS的序列差异设计特异性鉴定甘蔗梢腐病病原种类的TaqMan PCR及常规PCR的方法。并以甘蔗梢腐病原Fusarium. sp和其他甘蔗真菌病原(Sporisorium scitamineum和Phoma sp.)及甘蔗内生真菌Acremonium sp.对其检测方法的特异性和灵敏性进行评价。结果：依据甘蔗梢腐病原的类型gx1 (F. verticillioides)及gx2 (F. proliferatum)的ITS序列差异设计TaqMan PCR及常规PCR特异性鉴定的探针和引物,成功鉴定甘蔗梢腐病原镰刀菌gx1和gx2类型。其中TaqMan PCR方法的灵敏性是常规PCR的1000倍以上。由于TaqMan PCR具高灵敏性及高特异性可运用于低浓度(10pg/ul)的真菌DNA摄入的检测及鉴定,TaqMan PCR的甘蔗梢腐病病原检测方法成功运用于田间甘蔗病害检测案例的实施。结论/意义：本研究确定两种镰刀菌种F. verticillioides和F. proliferatum,是目前中国甘蔗梢腐病流行的主要病原。并设计一种特异性TaqMan PCR检测方法研究这些病原体在中国甘蔗主产区的流行。这种方法将会广泛运用于甘蔗病害的基础研究工作及对甘蔗病害监测与管理。
【关键词】：甘蔗梢腐病 镰刀菌 鉴定 检测
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S435.661
【目录】：

• 摘要7-8
• Abstract8-9
• 第一章 综述9-21
• 1 植物镰刀菌研究进展9-19
• 1.1 病原镰刀菌的检测鉴定与多样性9-12
• 1.2 镰刀菌的侵染及其与寄主互作12-15
• 1.3 镰刀菌的次生代谢毒素15-16
• 1.4 镰刀菌致病基因及进化16-18
• 1.5 甘蔗的镰刀菌病害18-19
• 2 展望19-20
• 3 本研究选题及意义20-21
• 第二章 材料与方法21-30
• 2.1 实验材料和试剂21-23
• 2.1.1 样品材料及菌种21
• 2.1.2 科赫法则病原鉴定材料21
• 2.1.3 常用生化试剂21-22
• 2.1.4 抗生素22
• 2.1.5 培养基22
• 2.1.6 主要仪器设备22-23
• 2.2 实验方法23-30
• 2.2.1 甘蔗梢腐病原菌的收集及分离23-24
• 2.2.2 病原菌的致病性实验及科赫法则鉴定24
• 2.2.3 病原菌的DNA提取,ITS-PCR及测序24-25
• 2.2.4 序列拼接,比对及进化树分析25-26
• 2.2.5 特异探针及引物的设计及PCR体系26-28
• 2.2.6 PCR检测的特异性及灵敏性评价28
• 2.2.7 田间甘蔗叶片的病原检测案例实施28-30
• 第三章 结果30-43
• 3.1 甘蔗梢腐病原菌的鉴定及形态学分析30-33
• 3.1.1 甘蔗梢腐病镰刀菌的ITS聚类分析30-32
• 3.1.2 梢腐病原真菌的形态学分析及病原鉴定32-33
• 3.2 特异探针及引物设计33-35
• 3.3 TaqMan PCR及常规PCR检测的特异性及灵敏性35-40
• 3.3.1 TaqMan PCR及常规PCR检测的特异性比较35-38
• 3.3.2 TaqMan PCR及常规PCR检测的灵敏性比较38-40
• 3.4 田间甘蔗叶片样品的病原快速诊断案例实施40-43
• 第四章 讨论43-47
• 4.1 中国甘蔗梢腐病的病原鉴定分析43-44
• 4.2 运用PCR技术的植物病原诊断研究44-45
• 4.3 田间甘蔗梢腐病病原的诊断分析45
• 4.4 结论45-47
• 参考文献47-54
• 附录一54-56
• 附录二56-61
• 附录三61-62
• 致谢62-63
• 附件63-73

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