靶向PRRSV受体CD163宿主microRNA的筛选及功能鉴定
发布时间：2021-02-12 14:04
猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）而引起的高度传染性疾病,该疾病会造成母猪繁殖障碍和仔猪肺炎、生长发育缓慢、死亡率增加。PRRSV具有抗原变异性、嗜巨噬细胞性、抗体依赖性增强作用以及持续性感染等特点,能够抑制或逃逸宿主的先天性免疫系统和获得性免疫系统的抵御。而目前市场开发的传统PRRSV疫苗无法提供有效保护,至今仍无切实有效的治疗措施。因此开发能够作用不同PRRSV毒株,为猪群提供广泛保护的抗病毒策略已成为当前PRRSV防控面临的重大挑战。微小核糖核酸（microRNA,miRNA）是一类长度为1823 nt的单链非编码小RNA,是一种能够在转录后水平调控基因表达的内源性调节因子。许多研究证实microRNA在PRRSV感染宿主细胞的过程中,通过靶向调控病毒受体的表达参与病毒与宿主互作机制,发挥着调控病毒感染及宿主免疫应答的重要作用。已有研究发现,CD163是病毒感染宿主的关键受体。本研究将利用生物信息学方法,以PRRSV的细胞受体C...
【文章来源】：南阳师范学院河南省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
猪源CD163 3"UTR区域
(2)猴源CD163 3"UTR序列如下图2-3所示。对于miRNAs在猴源CD163 3"UTR结合位点的预测如图2-3所示,克隆测序252 bp的猴源CD163 3"UTR与miR-124a结合的靶位点位于31至36 bp处,与miR-124a种子区域结合的自由能为:-22.2 kcal/mol;miR-143-3p的靶位点位于129至132 bp处,与miR-143-3p种子区域结合的自由能为:-19.4 kcal/mol;miR-338的靶位点位于117至120bp处,与miR-338种子区域结合的自由能为:-22.0 kcal/mol;miR-450b-3p的靶位点位于86至89 bp处,与miR-450b-3p种子区域结合的自由能为:-20.9 kcal/mol。miR-124a种子区域与猴源CD163 3"UTR结合的自由能为最小。
将猪源psiCHECK-2-pCD163-WT(野生型)重组质粒和猴源psiCHECK-2-mCD163-WT(野生型)重组质粒与4个miRNAs共同转染HEK293T细胞,以转染NC模拟物的细胞作为对照组,进行双荧光素酶活性检测。结果如图2-4所示,四个miRNAs均能抑制重组质粒的荧光素酶活性,其中miR-124a的抑制效果较为显著,对psiCHECK-2-pCD163-WT重组质粒的抑制效果达到61%,与psiCHECK-2-mCD163-WT重组质粒的抑制效果达到40.6%。而miR-143-3p、miR-338、miR-450b-3p也均可与猴源和猪源的CD163 3"UTR野生型序列发生结合,但荧光素酶相对表达量均高于miR-124a。因此,特选用miR-124a为后期实验研究对象。2.4.2.3双荧光素酶报告基因检测miRNA与受体CD163 3"UTR的结合位点
【参考文献】：
期刊论文
[1]微小RNA-21在心脏疾病中的研究进展[J]. 杨坤,胡晓晟. 浙江大学学报(医学版). 2019(02)
[2]microRNA在动物营养代谢调控中的研究进展[J]. 邱磊,林谦,袁雅婷,黄祥祥,潘迪子,唐千甯,云龙,张石蕊,贺喜. 家畜生态学报. 2016(03)
[3]猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学及免疫学的研究进展[J]. 吴国华,赵志荀,张强. 安徽农业科学. 2010(13)
[4]MicroRNA在病毒感染调控作用中的研究进展[J]. 刘力,李健,乔文涛,耿运琪. 病毒学报. 2009(06)
博士论文
[1]我国不同基因亚型新发PRRSV的生物学特性分析及标记疫苗的研究[D]. 张洪亮.中国农业科学院 2019
[2]抗PRRSV ISGs的鉴定及其抗PRRSV复制机制的研究[D]. 赵款.中国农业科学院 2019
[3]MicroRNA-373通过负向调控Ⅰ型干扰素促进猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）复制的机制研究[D]. 陈静.吉林大学 2016
[4]贵阳地区规模猪场PRRS流行病学调查及免疫防控技术应用[D]. 浦同灿.甘肃农业大学 2016
[5]细胞microRNA以及病毒小分子RNA抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪肺泡巨噬细胞的作用机制[D]. 李娜.西北农林科技大学 2016
[6]猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病原分离鉴定及防控措施研究[D]. 邱骏.吉林大学 2016
硕士论文
[1]类NADC30株致猪繁殖与呼吸综合征诊断与防治的研究[D]. 孟利佳.河北农业大学 2018
[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒快速鉴别检测及免疫防控技术研究[D]. 许心婷.广西大学 2016
[3]重组腺病毒表达3’非翻译区靶向人工微小RNA的抗PRRSV作用[D]. 包利平.扬州大学 2016
[4]规模化猪场后备种猪PRRS防控策略的研究[D]. 汤应军.华南农业大学 2016
[5]高、低致病性PRRSV的分离鉴定和二重RT-PCR鉴别诊断方法的建立及应用[D]. 白延杰.河南农业大学 2009
[6]河南省猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查[D]. 李和平.西北农林科技大学 2006
本文编号：3030973
【文章来源】：南阳师范学院河南省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
猪源CD163 3"UTR区域
(2)猴源CD163 3"UTR序列如下图2-3所示。对于miRNAs在猴源CD163 3"UTR结合位点的预测如图2-3所示,克隆测序252 bp的猴源CD163 3"UTR与miR-124a结合的靶位点位于31至36 bp处,与miR-124a种子区域结合的自由能为:-22.2 kcal/mol;miR-143-3p的靶位点位于129至132 bp处,与miR-143-3p种子区域结合的自由能为:-19.4 kcal/mol;miR-338的靶位点位于117至120bp处,与miR-338种子区域结合的自由能为:-22.0 kcal/mol;miR-450b-3p的靶位点位于86至89 bp处,与miR-450b-3p种子区域结合的自由能为:-20.9 kcal/mol。miR-124a种子区域与猴源CD163 3"UTR结合的自由能为最小。
将猪源psiCHECK-2-pCD163-WT(野生型)重组质粒和猴源psiCHECK-2-mCD163-WT(野生型)重组质粒与4个miRNAs共同转染HEK293T细胞,以转染NC模拟物的细胞作为对照组,进行双荧光素酶活性检测。结果如图2-4所示,四个miRNAs均能抑制重组质粒的荧光素酶活性,其中miR-124a的抑制效果较为显著,对psiCHECK-2-pCD163-WT重组质粒的抑制效果达到61%,与psiCHECK-2-mCD163-WT重组质粒的抑制效果达到40.6%。而miR-143-3p、miR-338、miR-450b-3p也均可与猴源和猪源的CD163 3"UTR野生型序列发生结合,但荧光素酶相对表达量均高于miR-124a。因此,特选用miR-124a为后期实验研究对象。2.4.2.3双荧光素酶报告基因检测miRNA与受体CD163 3"UTR的结合位点
【参考文献】：
期刊论文
[1]微小RNA-21在心脏疾病中的研究进展[J]. 杨坤,胡晓晟. 浙江大学学报(医学版). 2019(02)
[2]microRNA在动物营养代谢调控中的研究进展[J]. 邱磊,林谦,袁雅婷,黄祥祥,潘迪子,唐千甯,云龙,张石蕊,贺喜. 家畜生态学报. 2016(03)
[3]猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学及免疫学的研究进展[J]. 吴国华,赵志荀,张强. 安徽农业科学. 2010(13)
[4]MicroRNA在病毒感染调控作用中的研究进展[J]. 刘力,李健,乔文涛,耿运琪. 病毒学报. 2009(06)
博士论文
[1]我国不同基因亚型新发PRRSV的生物学特性分析及标记疫苗的研究[D]. 张洪亮.中国农业科学院 2019
[2]抗PRRSV ISGs的鉴定及其抗PRRSV复制机制的研究[D]. 赵款.中国农业科学院 2019
[3]MicroRNA-373通过负向调控Ⅰ型干扰素促进猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）复制的机制研究[D]. 陈静.吉林大学 2016
[4]贵阳地区规模猪场PRRS流行病学调查及免疫防控技术应用[D]. 浦同灿.甘肃农业大学 2016
[5]细胞microRNA以及病毒小分子RNA抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪肺泡巨噬细胞的作用机制[D]. 李娜.西北农林科技大学 2016
[6]猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病原分离鉴定及防控措施研究[D]. 邱骏.吉林大学 2016
硕士论文
[1]类NADC30株致猪繁殖与呼吸综合征诊断与防治的研究[D]. 孟利佳.河北农业大学 2018
[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒快速鉴别检测及免疫防控技术研究[D]. 许心婷.广西大学 2016
[3]重组腺病毒表达3’非翻译区靶向人工微小RNA的抗PRRSV作用[D]. 包利平.扬州大学 2016
[4]规模化猪场后备种猪PRRS防控策略的研究[D]. 汤应军.华南农业大学 2016
[5]高、低致病性PRRSV的分离鉴定和二重RT-PCR鉴别诊断方法的建立及应用[D]. 白延杰.河南农业大学 2009
[6]河南省猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查[D]. 李和平.西北农林科技大学 2006
本文编号：3030973
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/3030973.html
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