普通菜豆14-3-3蛋白基因PvGF14n/d在非生物胁迫中的功能分析

发布时间：2021-02-24 03:35

　　普通菜豆味道鲜美、营养丰富,是人们喜爱的蔬菜作物。然而在菜豆的生长地域一再遭受着干旱、高盐、低温等非生物胁迫的侵袭,这严重影响着普通菜豆的生长发育和产量。培育抗逆性强的普通菜豆新品种对普通菜豆的生产极其重要。而挖掘普通菜豆中的抗逆相关基因,通过分子育种提高普通菜豆抗逆性是解决策略之一。实验室前期挖掘到了9个普通菜豆14-3-3蛋白基因,且发现它们不同程度的受到非生物胁迫的诱导。为了研究它们在转基因后是否引起植物胁迫耐受能力的变化,在本项研究中主要对其中两个异型体Pv GF14n和Pv GF14d在干旱和盐胁迫下的功能进行深入的分析,研究结果如下:1.我们通过生物信息学的方法分析了PvGF14n/d与其他植物14-3-3蛋白的同源性与进化关系,发现Pv GF14n与番茄14-3-3蛋白TFT4的同源性较高,Pv GF14d与大豆14-3-3蛋白基因SGF14d的同源性最高,我们推测它们可能具有相似的功能。2.我们从普通菜豆中克隆到PvGF14n/d基因的全长,利用Gateway技术克隆构建到表达载体p Early Gate101中。通过花芽浸泡法将目的基因在拟南芥过表达,通过DNA-PC... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 1433 蛋白的发现
    1.2 1433 蛋白的结构与异型体的特异性
        1.2.1 1433 蛋白的结构
        1.2.2 1433 蛋白的异型体的特异性
    1.3 1433 蛋白在植物中的功能
        1.3.1 1433 蛋白在植物生长发育中的功能
        1.3.2 1433 蛋白在植物激素信号中的功能
        1.3.3 1433 蛋白在植物非生物胁迫中的功能
    1.4 研究目的和意义
第2章 PvGF14n/d的克隆及表达载体的构建
    2.1 试验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌种与载体
    2.2 试验药品及试剂
        2.2.1 主要试剂
        2.2.2 培养基的配制
    2.3 试验仪器
    2.4 试验方法
        2.4.1 目的基因片段的扩增
        2.4.2 目的基因与表达载体连接
        2.4.3 连接产物的大肠杆菌转化
        2.4.4 大肠杆菌菌液PCR检测
        2.4.5 大肠杆菌质粒DNA的提取
        2.4.6 重组质粒的PCR检测
        2.4.7 连接产物的农杆菌转化
        2.4.8 农杆菌菌液PCR检测
        2.4.9 农杆菌质粒DNA的提取
        2.4.10 重组质粒的PCR检测
        2.4.11 生物信息学分析
    2.5 试验结果
        2.5.1 目的基因的克隆
        2.5.2 目的基因的生物信息学分析
        2.5.3 表达载体的构建
    2.6 讨论与结论
第3章 过表达拟南芥植株的获得
    3.1 试验材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌种与载体
    3.2 试验药品及试剂
        3.2.1 培养基的配置
        3.2.2 试验药品
    3.3 试验仪器
    3.4 试验方法
        3.4.1 拟南芥的遗传转化
        3.4.2 转基因植株的筛选
        3.4.4 转基因植株的鉴定
            3.4.4.1 DNA的提取
            3.4.4.2 RNA的提取
            3.4.4.3 cDNA的合成
    3.5 试验结果
        3.5.1 转基因拟南芥植株的筛选
        3.5.2 转基因拟南芥DNA-PCR扩增
        3.5.3 转基因拟南芥RT-PCR扩增
    3.6 讨论与结论
第4章 过表达拟南芥植株在干旱胁迫条件下的表型分析
    4.1 试验材料
    4.2 试验试剂
        4.2.1 培养基的配置
        4.2.2 主要试剂
    4.3 试验仪器
    4.4 试验方法
        4.4.1 甘露醇模拟干旱胁迫的种子萌发分析
        4.4.2 土壤干旱胁迫下转基因拟南芥的表型分析
    4.5 结果与分析
        4.5.1 甘露醇模拟干旱胁迫对转基因拟南芥萌发的影响
        4.5.2 甘露醇模拟干旱胁迫对转基因拟南芥的绿苗率的影响
        4.5.3 土壤干旱胁迫对转基因拟南芥植株生长的影响
    4.6 讨论
第5章 过表达拟南芥植株在盐胁迫条件下的表型分析
    5.1 试验材料
    5.2 试验试剂
        5.2.1 培养基的配置
        5.2.2 主要试剂
    5.3 试验仪器
    5.4 试验方法
        5.4.1 氯化钠模拟盐胁迫的种子萌发分析
        5.4.2 土壤盐胁迫下转基因拟南芥的表型分析
        5.4.3 盐胁迫下转基因拟南芥中的叶绿素测定
    5.5 结果与分析
        5.5.1 氯化钠模拟盐胁迫对转基因拟南芥的萌发率的影响
        5.5.2 氯化钠模拟盐胁迫对转基因拟南芥的绿苗率的影响
        5.5.3 土壤盐胁迫对转基因拟南芥植株生长的影响
    5.6 讨论
第六章 结论
参考文献
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]柽柳GF14基因的克隆与表达分析（英文）[J]. 宁坤,宋鑫,李慧玉.  南京林业大学学报(自然科学版). 2016(02)
[2]甘蔗14-3-3基因克隆及表达分析[J]. 罗炼芳,孔冉,苏俊波.  南方农业学报. 2013(11)
[3]两个小麦14-3-3基因的特征、亚细胞定位及其对非生物胁迫的响应（英文）[J]. 孟晓丹,陈新,王亚英,肖瑞霞,刘海伦,王新国,任江萍,李永春,牛洪斌,王翔,尹钧.  生物工程学报. 2014(02)
[4]菠菜14-3-3蛋白基因的克隆及硝酸盐胁迫下的表达分析[J]. 赵秀玲,徐慧妮,郭传龙,崔道雷,王琳,陈丽梅,李昆志.  西北植物学报. 2013(03)
[5]植物14-3-3基因的研究进展[J]. 戚传娇,郭传龙,孙利利,邓永利,陈丽梅.  安徽农业科学. 2012(24)
[6]植物14-3-3蛋白研究进展[J]. 崔娜,于志海,韩明利,董雪飞,曲波,李天来.  西北植物学报. 2012(04)
[7]14-3-3蛋白对植物发育的调控作用[J]. 周颖,李冰樱,李学宝.  植物学报. 2012(01)
[8]盐胁迫对转AtNHX1基因杨树光合特性与叶绿体超微结构的影响[J]. 姜超强,李杰,刘兆普,李洪燕.  西北植物学报. 2010(02)
[9]盐胁迫对苜蓿叶绿素、甜菜碱含量和细胞膜透性的影响[J]. 王玉祥,张博,王涛.  草业科学. 2009(03)
[10]14-3-3蛋白的研究进展[J]. 潘伟男,陈锋,封芬,陈临溪.  国际病理科学与临床杂志. 2007(03)

硕士论文
[1]杉木14-3-3蛋白介导根系应答水分胁迫的研究[D]. 刘志杰.福建农林大学 2014
[2]蚕豆14-3-3蛋白与质膜H+-ATP酶应答干旱胁迫的分子机理研究[D]. 周冰.昆明理工大学 2013



本文编号：3048721