甜瓜CmMYBL-1基因功能的初步分析
发布时间：2021-03-25 05:22
MYB转录因子存在于所有真核生物中,其家族成员数量庞大、功能多样。MYB类转录因子广泛调控类黄酮合成代谢,在植物果实品质调控及抗病性中发挥作用。甜瓜（Cucumis melo L.）品种为河套蜜瓜是内蒙古西部地区重要的经济作物,本论文选取在甜瓜果实成熟期高表达的CmMYBL基因转化甜瓜,在转基因果实中类黄酮含量发生显著变化,说明CmMYBL基因对甜瓜类黄酮的合成具有促进作用。主要研究结果如下:（1）根据转录组测序结果选取果实成熟期高表达的两个CmMYBL基因进行实时定量PCR检测,检测所得结果与转录组测序数据基本吻合。克隆得到CmMYBL-1和CmMYBL-2两个基因的cDNA序列,长度分别为564bp和714bp。运用生物信息学对CmMYBL-1、CmMYBL-2蛋白的理化性质、信号肽、磷酸化位点、跨膜结构域、二级结构等作出预测,结果显示,CmMYBL-1、CmMYBL-2均属于不稳定的酸性亲水蛋白,两个蛋白均无信号肽,不属于分泌型蛋白。（2）检测了CmMYBL-1、CmMYBL-2两个基因在甜瓜各个组织、果实各个发育阶段的表达特性。两基因均在果实中的表达量最高,花和根中表达量次之,...
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MYB转录因子家族示意图
内蒙古大学硕士学位论文5图1.2类黄酮生物合成途径[71]Fig.1.2Flavonoidbiosyntheticpathway1.3生物信息学1985年，被誉为生命科学的“登月计划”的人类基因组计划被首次提出。这是一项由中国、法国、日本、美国、德国、英国科学家共同参与的规模极其宏大的跨国跨学科的科学探索工程。该计划旨在揭开组成人体2.5万个基因的30亿个碱基对的秘密，达到破译人类遗传信息的最终目的。人类基因组计划于1990年正式启动并于2005年完成。随着人类基因组计划的完成，更多物种基因组计划也在陆续启动并一步步实施，由此衍生的大数据内容交叉错综复杂，单单由生物学角度的研究已经满足不了对核酸及蛋白质序列的大数据进行分析比对的要求，由此，生物信息学作为运用计算机结合生物学、统计学、数学等多门学科的新型交叉学科应运而生。其以核酸及蛋白序列为基础，对各物种基因组计划研究而得的大数据及衍生数据进行采集、处理、储存、分配、检索、解释、分析及预测[72，73]。随着人类研究的不断深入，生物信息学经历了前基因组、基因组和后基因组三个时代[74]，每个时期研究的领域侧重点都不同，目前研究内容大体分为6个部分：（1）生物信息学数据库的建立并对外公开查询。数据库的不断扩充和更新完善，为更多科研人员研究提供便利，
内蒙古大学硕士学位论文13图2.1超表达载体构建Fig.2.1Constructionofoverexpressionvector2.2.4.4筛选阳性转化子使用北京百泰克生物技术有限公司的高纯质粒小量制备试剂盒提取质粒，以空质粒pPZP221为对照，PCR检测筛选阳性重组质粒。方法同2.2.2.4。阳性质粒分别命名为pPZP221-CmMYBL-1、pPZP221-CmMYBL-2。2.2.4.5酶切验证建立25μL反应体系：重组质粒2μL，10×QBuffer2.5μL，限制性内切酶XbaⅠ、KpnⅠ各0.5μL，ddH2O补至终体积25μL，将反应液混匀，置于37°C水浴反应80min。酶切产物使用1.0%琼脂糖凝胶电泳进行电泳验证。2.2.5构建RNAi载体2.2.5.1RNAi中间载体正向片段的构建（1）RNAi正向片段的PCR扩增建立50μLRNAi正向片段扩增体系如表2.3：表2.3RNAi正向片段扩增体系Table2.3RNAipositivefragmentamplificationsystem试剂体积模板cDNA200ng5×PrimeSTARGXLBuffer10μL上游引物（5μmol/L）4μL下游引物（5μmol/L）dNTPMixture（2.5mmol/L）4μL4μL
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物转录因子MYB基因家族的研究进展[J]. 牛义岭,姜秀明,许向阳. 分子植物育种. 2016(08)
[2]植物MYB转录因子调控苯丙烷类生物合成研究[J]. 穆红梅,杜秀菊,张秀省,张敏,曹兴. 北方园艺. 2015(24)
[3]调控植物类黄酮生物合成的MYB转录因子研究进展[J]. 邢文,金晓玲. 分子植物育种. 2015(03)
[4]Cloning and Expression of Two MYB Transcription Factors in Tea Plant（Camellia sinensis）[J]. Ma Chunlei,Yao Mingzhe,Wang Xinchao,Jin Jiqiang,Chen Liang. Chinese Forestry Science and Technology. 2012(03)
[5]生物信息学研究现状及发展趋势[J]. 赵屹,谷瑞升,杜生明. 医学信息学杂志. 2012(05)
[6]植物Myb转录因子的研究进展[J]. 陈清,汤浩茹,董晓莉,侯艳霞,罗娅,蒋艳,黄琼瑶. 基因组学与应用生物学. 2009(02)
[7]蛋白质磷酸化修饰的研究进展[J]. 姜铮,王芳,何湘,刘大伟,陈宣男,赵红庆,黄留玉,袁静. 生物技术通讯. 2009(02)
[8]大豆异黄酮诱导胃癌原代细胞凋亡的分子机制[J]. 苏军英,马吉祥,李会庆,张臣民,颜云. 齐鲁医学检验. 2002(03)
[9]植物MYB类转录因子研究进展[J]. 陈俊,王宗阳. 植物生理与分子生物学学报. 2002(02)
[10]生物信息学的现状与展望[J]. 张春霆. 世界科技研究与发展. 2000(06)
博士论文
[1]水稻OsOFP转录因子家族基因克隆与功能分析[D]. 于慧.吉林大学 2015
硕士论文
[1]拟南芥SPO11基因的生物信息学分析[D]. 谢冰心.郑州大学 2014
[2]大豆2R-MYB转录因子基因GmMYB038功能初探[D]. 杨思思.四川农业大学 2013
[3]沙漠逆境下芦苇蛋白质亲/疏水性变化的机制[D]. 施璐.首都师范大学 2009
本文编号：3099111
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MYB转录因子家族示意图
内蒙古大学硕士学位论文5图1.2类黄酮生物合成途径[71]Fig.1.2Flavonoidbiosyntheticpathway1.3生物信息学1985年，被誉为生命科学的“登月计划”的人类基因组计划被首次提出。这是一项由中国、法国、日本、美国、德国、英国科学家共同参与的规模极其宏大的跨国跨学科的科学探索工程。该计划旨在揭开组成人体2.5万个基因的30亿个碱基对的秘密，达到破译人类遗传信息的最终目的。人类基因组计划于1990年正式启动并于2005年完成。随着人类基因组计划的完成，更多物种基因组计划也在陆续启动并一步步实施，由此衍生的大数据内容交叉错综复杂，单单由生物学角度的研究已经满足不了对核酸及蛋白质序列的大数据进行分析比对的要求，由此，生物信息学作为运用计算机结合生物学、统计学、数学等多门学科的新型交叉学科应运而生。其以核酸及蛋白序列为基础，对各物种基因组计划研究而得的大数据及衍生数据进行采集、处理、储存、分配、检索、解释、分析及预测[72，73]。随着人类研究的不断深入，生物信息学经历了前基因组、基因组和后基因组三个时代[74]，每个时期研究的领域侧重点都不同，目前研究内容大体分为6个部分：（1）生物信息学数据库的建立并对外公开查询。数据库的不断扩充和更新完善，为更多科研人员研究提供便利，
内蒙古大学硕士学位论文13图2.1超表达载体构建Fig.2.1Constructionofoverexpressionvector2.2.4.4筛选阳性转化子使用北京百泰克生物技术有限公司的高纯质粒小量制备试剂盒提取质粒，以空质粒pPZP221为对照，PCR检测筛选阳性重组质粒。方法同2.2.2.4。阳性质粒分别命名为pPZP221-CmMYBL-1、pPZP221-CmMYBL-2。2.2.4.5酶切验证建立25μL反应体系：重组质粒2μL，10×QBuffer2.5μL，限制性内切酶XbaⅠ、KpnⅠ各0.5μL，ddH2O补至终体积25μL，将反应液混匀，置于37°C水浴反应80min。酶切产物使用1.0%琼脂糖凝胶电泳进行电泳验证。2.2.5构建RNAi载体2.2.5.1RNAi中间载体正向片段的构建（1）RNAi正向片段的PCR扩增建立50μLRNAi正向片段扩增体系如表2.3：表2.3RNAi正向片段扩增体系Table2.3RNAipositivefragmentamplificationsystem试剂体积模板cDNA200ng5×PrimeSTARGXLBuffer10μL上游引物（5μmol/L）4μL下游引物（5μmol/L）dNTPMixture（2.5mmol/L）4μL4μL
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物转录因子MYB基因家族的研究进展[J]. 牛义岭,姜秀明,许向阳. 分子植物育种. 2016(08)
[2]植物MYB转录因子调控苯丙烷类生物合成研究[J]. 穆红梅,杜秀菊,张秀省,张敏,曹兴. 北方园艺. 2015(24)
[3]调控植物类黄酮生物合成的MYB转录因子研究进展[J]. 邢文,金晓玲. 分子植物育种. 2015(03)
[4]Cloning and Expression of Two MYB Transcription Factors in Tea Plant（Camellia sinensis）[J]. Ma Chunlei,Yao Mingzhe,Wang Xinchao,Jin Jiqiang,Chen Liang. Chinese Forestry Science and Technology. 2012(03)
[5]生物信息学研究现状及发展趋势[J]. 赵屹,谷瑞升,杜生明. 医学信息学杂志. 2012(05)
[6]植物Myb转录因子的研究进展[J]. 陈清,汤浩茹,董晓莉,侯艳霞,罗娅,蒋艳,黄琼瑶. 基因组学与应用生物学. 2009(02)
[7]蛋白质磷酸化修饰的研究进展[J]. 姜铮,王芳,何湘,刘大伟,陈宣男,赵红庆,黄留玉,袁静. 生物技术通讯. 2009(02)
[8]大豆异黄酮诱导胃癌原代细胞凋亡的分子机制[J]. 苏军英,马吉祥,李会庆,张臣民,颜云. 齐鲁医学检验. 2002(03)
[9]植物MYB类转录因子研究进展[J]. 陈俊,王宗阳. 植物生理与分子生物学学报. 2002(02)
[10]生物信息学的现状与展望[J]. 张春霆. 世界科技研究与发展. 2000(06)
博士论文
[1]水稻OsOFP转录因子家族基因克隆与功能分析[D]. 于慧.吉林大学 2015
硕士论文
[1]拟南芥SPO11基因的生物信息学分析[D]. 谢冰心.郑州大学 2014
[2]大豆2R-MYB转录因子基因GmMYB038功能初探[D]. 杨思思.四川农业大学 2013
[3]沙漠逆境下芦苇蛋白质亲/疏水性变化的机制[D]. 施璐.首都师范大学 2009
本文编号：3099111
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/3099111.html
教材专著
