虾青素对奶牛子宫内膜细胞炎性反应的影响及机制研究
发布时间：2021-03-27 01:24
子宫内膜炎是奶牛常见的繁殖疾病,给奶牛养殖业造成严重的经济损失。导致奶牛子宫内膜炎的因素很多,但主要因素有两个:一是奶牛营养状况不良,自身免疫力低下;二是奶牛受到致病菌的感染。如何预防和控制奶牛子宫内膜炎的发生一直是科研人员研究的重点,目前的主要方法为使用抗生素进行治疗,但抗生素频繁使用会导致细菌等产生抗药性。虾青素（Astaxanthin,AST）是一种具有强抗氧化效果的营养素,能显著改善动物的免疫性能,其是否能用于预防和治疗奶牛子宫内膜炎?本研究通过构建子宫内膜体外炎症模型,将AST作用于建立的炎症模型,探索了其对细胞炎性反应的作用和机制。试验一:子宫内膜体外炎症模型的建立利用1μg/mL脂多糖（LPS）分别刺激奶牛子宫内膜细胞3 h、6 h、9 h和12 h,通过ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量,检测Claudin1、CDH1、TJP1等紧密连接基因的表达,确定LPS的最佳作用时间为6 h,建立了子宫内膜细胞炎症模型。试验二:AST通过保护黏膜屏障对LPS诱导的牛子宫内膜细胞炎症的影响利用试验一建立的子宫内膜细胞炎症模型...
【文章来源】：山东师范大学山东省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AST的化学结构
山东师范大学硕士学位论文162.2结果2.2.1炎症因子分泌通过ELISA法检测细胞培养液中IL-6和TNF-α的含量，由图2-1可知，利用1μg/mLLPS作用牛子宫内膜细胞6h，细胞分泌的IL-6和TNF-α蛋白含量显著提高（P<0.05）。说明LPS处理子宫内膜细胞6h，作用效果最为明显。图2-1LPS诱导细胞炎症因子IL-6、TNF-α分泌量Fig.2-1IL-6,TNF-αInflammatoryfactorsecretionthroughLPS2.2.2紧密连接相关基因表达利用LPS处理牛子宫内膜细胞后，利用荧光定量RT-PCR法检测紧密连接相关基因Claudin1、CDH1、TJP1表达水平，由表2-5可知，LPS处理子宫内膜细胞6h后，紧密连接相关基因Claudin1、CDH1、TJP1的mRNA表达水平显著降低（P<0.05）说明在mRNA水平上，LPS处理子宫内膜细胞6h效果最为显著。表2-5LPS诱导的子宫内膜细胞基因Claudin1、CDH1、TJP1表达的影响Table2-5EffectofastaxanthinonmRNAexpressionsofClaudin1,CDH1andTJP1LPS-inducedendometrialcellsLPS(1μg/mL)mRNAClaudin1CDH1TJP10h1.00±0.09a1.00±0.01a1.00±0.08a3h0.86±0.03a0.69±0.20ab0.37±0.10c6h0.51±0.14b0.51±0.07b0.44±0.06c9h1.09±0.09a0.78±0.14ab0.73±0.06b12h1.15±0.03a0.94±0.01a1.17±0.07a注：a表示差异显著，b、c表示差异不显著。
山东师范大学硕士学位论文23注：■AST浓度为10-7mol/L，▲AST浓度为10-6mol/L，▼AST浓度为10-5mol/L。图3-1AST诱导细胞炎症因子IL-6、TNF-α分泌量Fig.3-1IL-6,TNF-αInflammatoryfactorsecretionthroughAST表3-1AST诱导的子宫内膜细胞基因表达的影响Table3-1EffectofastaxanthinonmRNAexpressionsAST-inducedendometrialcellsAST（mol/L）mRNAClaudin1CDH1TJP1Control01.04±0.18abcd1.06±0.25abcd1.13±0.42abcde3h1×10-50.96±0.07abcd1.44±0.25d1.91±0.27fg1×10-61.08±0.19abcd1.22±0.18cd1.67±0.58efg1×10-71.17±0.16abcd1.51±0.13d0.98±0.12abcde6h1×10-50.75±0.04abc0.94±0.07abcd0.86±0.15abcd1×10-61.32±0.42cd1.24±0.37cd1.33±0.31cdefg1×10-70.89±0.11abcd0.74±0.06abc0.63±0.05abc9h1×10-50.56±0.07a0.51±0.11a0.46±0.04a1×10-60.57±0.09ab0.54±0.09a0.56±0.03ab1×10-70.76±0.08abc0.73±0.08abc0.64±0.03abc12h1×10-50.81±0.18abc0.58±0.06ab0.77±0.10abcd1×10-61.06±0.15abcd0.79±0.11abc0.89±0.05abcd1×10-70.93±0.09abcd0.75±0.15abc0.79±0.13abcd24h1×10-51.19±0.19bcd1.18±0.19bcd0.96±0.09abde1×10-63.77±0.10f3.76±0.10f2.03±0.25g1×10-72.27±0.23e2.26±0.23e1.39±0.05defg48h1×10-51.26±0.11cd1.53±0.08d1.10±0.08abcde1×10-61.32±0.25cd1.30±0.33cd1.47±0.18defg1×10-71.49±0.26d1.42±0.21d1.23±0.16bcdef注：a表示差异显著，b、c、d、e、f、
本文编号：3102609
【文章来源】：山东师范大学山东省
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AST的化学结构
山东师范大学硕士学位论文162.2结果2.2.1炎症因子分泌通过ELISA法检测细胞培养液中IL-6和TNF-α的含量，由图2-1可知，利用1μg/mLLPS作用牛子宫内膜细胞6h，细胞分泌的IL-6和TNF-α蛋白含量显著提高（P<0.05）。说明LPS处理子宫内膜细胞6h，作用效果最为明显。图2-1LPS诱导细胞炎症因子IL-6、TNF-α分泌量Fig.2-1IL-6,TNF-αInflammatoryfactorsecretionthroughLPS2.2.2紧密连接相关基因表达利用LPS处理牛子宫内膜细胞后，利用荧光定量RT-PCR法检测紧密连接相关基因Claudin1、CDH1、TJP1表达水平，由表2-5可知，LPS处理子宫内膜细胞6h后，紧密连接相关基因Claudin1、CDH1、TJP1的mRNA表达水平显著降低（P<0.05）说明在mRNA水平上，LPS处理子宫内膜细胞6h效果最为显著。表2-5LPS诱导的子宫内膜细胞基因Claudin1、CDH1、TJP1表达的影响Table2-5EffectofastaxanthinonmRNAexpressionsofClaudin1,CDH1andTJP1LPS-inducedendometrialcellsLPS(1μg/mL)mRNAClaudin1CDH1TJP10h1.00±0.09a1.00±0.01a1.00±0.08a3h0.86±0.03a0.69±0.20ab0.37±0.10c6h0.51±0.14b0.51±0.07b0.44±0.06c9h1.09±0.09a0.78±0.14ab0.73±0.06b12h1.15±0.03a0.94±0.01a1.17±0.07a注：a表示差异显著，b、c表示差异不显著。
山东师范大学硕士学位论文23注：■AST浓度为10-7mol/L，▲AST浓度为10-6mol/L，▼AST浓度为10-5mol/L。图3-1AST诱导细胞炎症因子IL-6、TNF-α分泌量Fig.3-1IL-6,TNF-αInflammatoryfactorsecretionthroughAST表3-1AST诱导的子宫内膜细胞基因表达的影响Table3-1EffectofastaxanthinonmRNAexpressionsAST-inducedendometrialcellsAST（mol/L）mRNAClaudin1CDH1TJP1Control01.04±0.18abcd1.06±0.25abcd1.13±0.42abcde3h1×10-50.96±0.07abcd1.44±0.25d1.91±0.27fg1×10-61.08±0.19abcd1.22±0.18cd1.67±0.58efg1×10-71.17±0.16abcd1.51±0.13d0.98±0.12abcde6h1×10-50.75±0.04abc0.94±0.07abcd0.86±0.15abcd1×10-61.32±0.42cd1.24±0.37cd1.33±0.31cdefg1×10-70.89±0.11abcd0.74±0.06abc0.63±0.05abc9h1×10-50.56±0.07a0.51±0.11a0.46±0.04a1×10-60.57±0.09ab0.54±0.09a0.56±0.03ab1×10-70.76±0.08abc0.73±0.08abc0.64±0.03abc12h1×10-50.81±0.18abc0.58±0.06ab0.77±0.10abcd1×10-61.06±0.15abcd0.79±0.11abc0.89±0.05abcd1×10-70.93±0.09abcd0.75±0.15abc0.79±0.13abcd24h1×10-51.19±0.19bcd1.18±0.19bcd0.96±0.09abde1×10-63.77±0.10f3.76±0.10f2.03±0.25g1×10-72.27±0.23e2.26±0.23e1.39±0.05defg48h1×10-51.26±0.11cd1.53±0.08d1.10±0.08abcde1×10-61.32±0.25cd1.30±0.33cd1.47±0.18defg1×10-71.49±0.26d1.42±0.21d1.23±0.16bcdef注：a表示差异显著，b、c、d、e、f、
本文编号：3102609
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