桑树生长素早期响应基因Mul-SAUR15的功能研究

发布时间：2021-05-23 11:46

　　桑树不仅是家蚕的饲料树种,也具有重要的药用、饲用以及生态价值。利用基因工程技术培育桑树新品种,有利于桑树经济和生态价值的实现。Small auxin-up RNA（SAUR）基因作为一类生长素早期响应基因与植物的生长发育密切相关,但其具体的生物功能和作用机制还不清楚,目前有关桑树SAUR基因研究的报道较少。本研究首次克隆得到桑树SAUR基因Mul-SAUR15,分析了其编码蛋白的生理生化特性,并利用转基因技术研究了其生物功能;另外,本研究还克隆得到了Mul-SAUR15基因的启动子,分析了其表达活性,揭示了Mul-SAUR15基因的表达模式。研究结果有望为桑树基因工程育种提供候选基因,也为深入研究SAUR基因的生物功能及作用机制奠定了基础。主要研究结果如下:（1）桑树Mul-SAUR15基因的克隆及生物信息学分析利用PCR技术克隆得到了桑树生长素早期响应基因Mul-SAUR15,该基因包含一个长为318 bp的开放阅读框,编码一个由105个氨基酸组成的多肽。Mul-SAUR15蛋白质的理论等电点（pI）为8.98,预测的分子量（Mw）为11.516 KDa。该蛋白质含有较多无规则卷曲（... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 植物生长素研究进展
        1.1.1 生长素的生理作用
        1.1.2 生长素的信号通路
        1.1.3 植物生长素响应基因
    1.2 Small auxin-up RNA(SAUR)基因研究进展
        1.2.1 SAUR基因的功能
        1.2.2 SAUR基因的作用机制
    1.3 研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和载体
        2.1.3 试剂
        2.1.4 引物
        2.1.5 仪器
    2.2 方法
        2.2.1 Mul-SAUR15 基因的克隆
            2.2.1.1 桑树叶片RNA的提取
            2.2.1.2 cDNA的反转录
            2.2.1.3 Mul-SAUR15 基因的扩增
            2.2.1.4 目的片段的回收
            2.2.1.5 目的片段与克隆载体的连接
            2.2.1.6 连接产物转化大肠杆菌
            2.2.1.7 阳性质粒的鉴定和测序
        2.2.2 Mul-SAUR15 基因的生物信息学分析
        2.2.3 Mul-SAUR15 基因启动子的克隆
            2.2.3.1 桑树叶片DNA的提取
            2.2.3.2 启动子的克隆
        2.2.4 启动子的序列分析
        2.2.5 Mul-SAUR15 基因启动子的表达活性分析
            2.2.5.1 Mul-SAUR15 基因启动子表达载体的构建
            2.2.5.2 启动子转基因拟南芥的筛选
            2.2.5.3 Mul-SAUR15 基因启动子的瞬时表达活性分析
        2.2.6 Mul-SAUR15 基因启动子的稳定表达活性分析
            2.2.6.1 生长素诱导表达活性分析
            2.2.6.2 不同生长阶段的表达活性分析
            2.2.6.3 组织表达活性分析
        2.2.7 Mul-SAUR15 基因的组织表达特性分析
        2.2.8 Mul-SAUR15 基因的功能分析
            2.2.8.1 Mul-SAUR15 基因表达载体构建
            2.2.8.2 转Mul-SAUR15 基因拟南芥的筛选和鉴定
            2.2.8.3 转Mul-SAUR15 基因拟南芥对生长素的敏感性分析
            2.2.8.4 转Mul-SAUR15 基因拟南芥的表型分析
            2.2.8.5 转基因拟南芥对Pst.DC3000 的抗性分析
            2.2.8.6 转基因拟南芥的耐盐性分析
            2.2.8.7 转基因拟南芥的抗旱性分析
3 结果与分析
    3.1 Mul-SAUR15 基因的克隆与生物信息学分析
        3.1.1 Mul-SAUR15 基因的克隆
        3.1.2 Mul-SAUR15 蛋白质的结构预测
        3.1.3 Mul-SAUR15 蛋白质的基本理化性质分析
        3.1.4 Mul-SAUR15 的同源比较及其进化分析
    3.2 Mul-SAUR15 基因启动子克隆与序列分析
        3.2.1 Mul-SAUR15 基因启动子克隆
        3.2.2 Mul-SAUR15 基因启动子的序列分析
    3.3 Mul-SAUR15 基因启动子的表达活性分析
        3.3.1 Mul-SAUR15 基因启动子表达载体的构建
        3.3.2 pMul-SAUR15 的表达活性分析
    3.4 pMul-SAUR15 的稳定表达活性分析
        3.4.1 生长素诱导pMul-SAUR15 的表达活性分析
        3.4.2 不同生长阶段的pMul-SAUR15 的表达活性分析
        3.4.3 p Mul-SAUR15 的组织表达活性分析
    3.5 Mul-SAUR15 基因的组织表达特性分析
    3.6 Mul-SAUR15 基因的功能分析
        3.6.1 Mul-SAUR15 基因植物表达载体的构建
        3.6.2 转Mul-SAUR15 基因拟南芥的筛选和鉴定
        3.6.3 转Mul-SAUR15 基因拟南芥对生长素的敏感性分析
        3.6.4 转Mul-SAUR15 基因拟南芥的表型分析
        3.6.5 转Mul-SAUR15 基因拟南芥对Pst.DC3000 的抗性分析
        3.6.6 转Mul-SAUR15 基因拟南芥的耐盐性分析
        3.6.7 转Mul-SAUR15 基因拟南芥的抗旱性分析
4 讨论
    4.1 Mul-SAUR15 基因的表达特性
    4.2 Mul-SAUR15 基因的功能
5 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
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本文编号：3202464