干扰水稻条纹病毒NS3与水稻OsIAA25互作培育抗病毒水稻
发布时间：2021-06-16 05:14
植物病毒病害对农业生产造成非常严重的危害。植物感染病毒后,植株发育不良而矮小、叶片出现萎缩,甚至造成腐烂,导致作物品质下降、产量降低。据统计,全世界每年因病毒病对作物造成的损失就高达百亿美元。而植物病毒与宿主间蛋白的互作是决定病毒能否入侵宿主,并在宿主中有效复制和传播的关键。植物病毒与宿主间互作的研究,将为我们制定有效的防控病毒策略提供重要依据。水稻作为一种重要的粮食作物其遭受的病毒病害比较严重,其中纤细病毒属的水稻条纹病毒（Rice stripe virus,RSV）,可借助介体灰飞虱通过卵传的方式进行持久传播,严重危害水稻的产量和品质。本研究首先以RSV编码的NS3为诱饵,筛选水稻cDNA文库,发现NS3能够与水稻生长素通路抑制子兼共受体Aux/IAA家族蛋白OsIAA25互作。在此基础上,我们构建了NS3、OsIAA25单基因和NS3/OsIAA25双基因的RNAi载体,转化水稻,获得了抗RSV的转基因水稻新材料。主要研究结果如下:（1）NS3与水稻Aux/IAA家族蛋白OsIAA25互作以NS3为诱饵蛋白钓取水稻的cDNA文库,发现OsIAA25能够与NS3互作,进而我们又分别...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
NS3为诱饵蛋白筛选水稻互作蛋白Fig.3-1RiceinteractionproteinswerescreenedwithNS3asbaitprotein表3-1水稻中与NS3互作的蛋白
干扰水稻条纹病毒NS3与水稻OsIAA25互作培育抗病毒水稻36图3-2NS3病毒蛋白与OsIAA25蛋白互作验证（A）酵母双杂验证NS3与OsIAA25互作；（B）体外免疫共沉淀实验Pull-down验证NS3与OsIAA25互作；（C）双分子荧光互补实验BIFC验证NS3与OsIAA25互作；Fig.3-2InteractionanalysisofNS3virusproteinandOsIAA25protein(A)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbyY2H,(B)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbypull-down,(C)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbyBiFC.3.3NS3与OsIAAs家族蛋白的互作检测OsIAA25是水稻生长素通路抑制子兼共受体Aux/IAA家族成员之一，Aux/IAA基因家族有31个成员，为了检测NS3是否与Aux/IAA家族其他成员存在互作现象，我们又构建了NS3和Aux/IAA基因家族其他成员的酵母双杂载体，将其转入酵母细胞后，分别在DDO（SD/-Leu/-Trp）培养板上和QDO（SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade）培养板上点样验证互作，结果发现只有共表达了NS3与OsIAA25的酵母细胞能在四缺培养基QDO（SD-Ade/His/Trp/Leu/x-α-gal/AbA）正常生长且能变蓝色（图3-3）；表明NS3只与OsIAA25存在互作，与Aux/IAA基因家族其他成员不互作。图3-3NS3与OsIAAs蛋白互作筛选Fig.3-3InteractionscreeningofNS3andOsIAAsproteins
干扰水稻条纹病毒NS3与水稻OsIAA25互作培育抗病毒水稻36图3-2NS3病毒蛋白与OsIAA25蛋白互作验证（A）酵母双杂验证NS3与OsIAA25互作；（B）体外免疫共沉淀实验Pull-down验证NS3与OsIAA25互作；（C）双分子荧光互补实验BIFC验证NS3与OsIAA25互作；Fig.3-2InteractionanalysisofNS3virusproteinandOsIAA25protein(A)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbyY2H,(B)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbypull-down,(C)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbyBiFC.3.3NS3与OsIAAs家族蛋白的互作检测OsIAA25是水稻生长素通路抑制子兼共受体Aux/IAA家族成员之一，Aux/IAA基因家族有31个成员，为了检测NS3是否与Aux/IAA家族其他成员存在互作现象，我们又构建了NS3和Aux/IAA基因家族其他成员的酵母双杂载体，将其转入酵母细胞后，分别在DDO（SD/-Leu/-Trp）培养板上和QDO（SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade）培养板上点样验证互作，结果发现只有共表达了NS3与OsIAA25的酵母细胞能在四缺培养基QDO（SD-Ade/His/Trp/Leu/x-α-gal/AbA）正常生长且能变蓝色（图3-3）；表明NS3只与OsIAA25存在互作，与Aux/IAA基因家族其他成员不互作。图3-3NS3与OsIAAs蛋白互作筛选Fig.3-3InteractionscreeningofNS3andOsIAAsproteins
【参考文献】：
期刊论文
[1]酵母双杂交筛选灰飞虱体内水稻黑条矮缩病毒p10的互作蛋白[J]. 徐秋芳,陈晴晴,张金凤,李硕,倪海平,周益军. 中国水稻科学. 2013(06)
[2]灰飞虱体内水稻条纹病毒基因的RNA干扰效应[J]. 陈爱玲,林克剑,贺康,王桂荣,李飞. 中国农业科学. 2013(06)
[3]中国水稻条纹叶枯病研究进展[J]. 周益军,李硕,程兆榜,周彤,范永坚. 江苏农业学报. 2012(05)
[4]酵母双杂交系统筛选与水稻黑条矮缩病毒P6互作的水稻蛋白[J]. 肖冬来,邓慧颖,谢荔岩,吴祖建,谢联辉. 热带作物学报. 2010(03)
[5]水稻条纹叶枯病的研究进展[J]. 白雪亮,王金菊,周维,陶汉林,朱晔荣,王勇. 生物学通报. 2007(08)
[6]不同抗性品种与水稻条纹叶枯病的关系[J]. 高东明,秦文胜,李爱民,陈红方. 中国水稻科学. 1993(01)
博士论文
[1]与传播水稻条纹病毒相关的灰飞虱蛋白质鉴定与功能研究[D]. 刘文文.中国农业科学院 2013
硕士论文
[1]水稻条纹病毒与水稻蛋白质互作研究[D]. 陈兵华.贵州大学 2015
本文编号：3232437
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
NS3为诱饵蛋白筛选水稻互作蛋白Fig.3-1RiceinteractionproteinswerescreenedwithNS3asbaitprotein表3-1水稻中与NS3互作的蛋白
干扰水稻条纹病毒NS3与水稻OsIAA25互作培育抗病毒水稻36图3-2NS3病毒蛋白与OsIAA25蛋白互作验证（A）酵母双杂验证NS3与OsIAA25互作；（B）体外免疫共沉淀实验Pull-down验证NS3与OsIAA25互作；（C）双分子荧光互补实验BIFC验证NS3与OsIAA25互作；Fig.3-2InteractionanalysisofNS3virusproteinandOsIAA25protein(A)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbyY2H,(B)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbypull-down,(C)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbyBiFC.3.3NS3与OsIAAs家族蛋白的互作检测OsIAA25是水稻生长素通路抑制子兼共受体Aux/IAA家族成员之一，Aux/IAA基因家族有31个成员，为了检测NS3是否与Aux/IAA家族其他成员存在互作现象，我们又构建了NS3和Aux/IAA基因家族其他成员的酵母双杂载体，将其转入酵母细胞后，分别在DDO（SD/-Leu/-Trp）培养板上和QDO（SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade）培养板上点样验证互作，结果发现只有共表达了NS3与OsIAA25的酵母细胞能在四缺培养基QDO（SD-Ade/His/Trp/Leu/x-α-gal/AbA）正常生长且能变蓝色（图3-3）；表明NS3只与OsIAA25存在互作，与Aux/IAA基因家族其他成员不互作。图3-3NS3与OsIAAs蛋白互作筛选Fig.3-3InteractionscreeningofNS3andOsIAAsproteins
干扰水稻条纹病毒NS3与水稻OsIAA25互作培育抗病毒水稻36图3-2NS3病毒蛋白与OsIAA25蛋白互作验证（A）酵母双杂验证NS3与OsIAA25互作；（B）体外免疫共沉淀实验Pull-down验证NS3与OsIAA25互作；（C）双分子荧光互补实验BIFC验证NS3与OsIAA25互作；Fig.3-2InteractionanalysisofNS3virusproteinandOsIAA25protein(A)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbyY2H,(B)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbypull-down,(C)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbyBiFC.3.3NS3与OsIAAs家族蛋白的互作检测OsIAA25是水稻生长素通路抑制子兼共受体Aux/IAA家族成员之一，Aux/IAA基因家族有31个成员，为了检测NS3是否与Aux/IAA家族其他成员存在互作现象，我们又构建了NS3和Aux/IAA基因家族其他成员的酵母双杂载体，将其转入酵母细胞后，分别在DDO（SD/-Leu/-Trp）培养板上和QDO（SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade）培养板上点样验证互作，结果发现只有共表达了NS3与OsIAA25的酵母细胞能在四缺培养基QDO（SD-Ade/His/Trp/Leu/x-α-gal/AbA）正常生长且能变蓝色（图3-3）；表明NS3只与OsIAA25存在互作，与Aux/IAA基因家族其他成员不互作。图3-3NS3与OsIAAs蛋白互作筛选Fig.3-3InteractionscreeningofNS3andOsIAAsproteins
【参考文献】：
期刊论文
[1]酵母双杂交筛选灰飞虱体内水稻黑条矮缩病毒p10的互作蛋白[J]. 徐秋芳,陈晴晴,张金凤,李硕,倪海平,周益军. 中国水稻科学. 2013(06)
[2]灰飞虱体内水稻条纹病毒基因的RNA干扰效应[J]. 陈爱玲,林克剑,贺康,王桂荣,李飞. 中国农业科学. 2013(06)
[3]中国水稻条纹叶枯病研究进展[J]. 周益军,李硕,程兆榜,周彤,范永坚. 江苏农业学报. 2012(05)
[4]酵母双杂交系统筛选与水稻黑条矮缩病毒P6互作的水稻蛋白[J]. 肖冬来,邓慧颖,谢荔岩,吴祖建,谢联辉. 热带作物学报. 2010(03)
[5]水稻条纹叶枯病的研究进展[J]. 白雪亮,王金菊,周维,陶汉林,朱晔荣,王勇. 生物学通报. 2007(08)
[6]不同抗性品种与水稻条纹叶枯病的关系[J]. 高东明,秦文胜,李爱民,陈红方. 中国水稻科学. 1993(01)
博士论文
[1]与传播水稻条纹病毒相关的灰飞虱蛋白质鉴定与功能研究[D]. 刘文文.中国农业科学院 2013
硕士论文
[1]水稻条纹病毒与水稻蛋白质互作研究[D]. 陈兵华.贵州大学 2015
本文编号：3232437
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/3232437.html
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