免疫组化方法示踪PRV感染肛门括约肌的神经传导研究

发布时间：2017-04-24 05:13

  本文关键词：免疫组化方法示踪PRV感染肛门括约肌的神经传导研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：伪狂犬病病毒是畜牧生产上一个重要的病毒,严重危害着养猪业的健康发展,同时作为神经示踪研究中的一种新兴的模式病毒,也被科学家们广泛关注和研究。本研究测定了实验室构建的伪狂犬病毒株SA215-T的病毒滴度,并用该毒株感染SD大鼠,建立了SA215-T人工感染大鼠的病理模型。感染56小时后,大鼠出现发热,奇痒和共济失调等症状,115小时左右开始死亡,解剖病变主要为肺轻度水肿,脑组织弥漫性出血。PRV SA215-T感染大鼠后平均存活时间120小时,比PRV Bartha-K61株感染大鼠的平均存活时间114小时稍长,PRV SA215-T适合用于建立PRV人工感染大鼠的病理模型。本研究分别用PRV SA215-T与Bartha-K61人工感染大鼠,观察记录了大鼠感染伪狂犬病毒后的临床症状及存活情况,在不同时间解剖大鼠并采集心肝脾肺肾脑等组织器官,通过PCR检测PRV抗原在大鼠体内各组织器官的分布规律。结果表明,大鼠感染PRV之后的48小时内,各组织器官内未检测到PRV抗原；感染56小时左右,肺脏PRV抗原呈阳性分布；随着时间的推移,组织器官中PRV抗原分布越来越广,最终几乎遍布于所有组织器官。本研究建立了间接免疫组化检测PRV抗原的方法并优化了免疫组化条件。用建立的免疫组化方法可以便捷地检测到大鼠组织器官中的PRV抗原。该方法快速简单,敏感性高,特异性强,染色结果便于观察,能用于临床检测。本研究用建立的间接免疫组化方法检测并定位了人工感染大鼠后PRVSA215-T在脊髓中的位置,示踪了PRV感染大鼠肛门括约肌的神经传导通路：感染后48小时在腰髓4-5节段初次检测到PRV；感染56小时左右,胸髓11-12节段检测到PRV；感染66小时左右在颈髓6-7节段检测到PRV；感染72小时在大脑检测到PRV。基因缺失后的伪狂犬病毒具有逆神经传导特性,用免疫组化方法可以特异性地追踪其在神经传导中的路径。本研究通过建立的大鼠病理模型,探明了PRV感染大鼠肛门括约肌的神经传导通路,为进一步研究先天性肛门闭锁症的发病机制及发展规律奠定了基础。
【关键词】：伪狂犬病病毒 先天性肛门闭锁 神经传导与示踪 免疫组化 抗原分布
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 缩略词表7-10
• 第一章 文献综述10-24
• 1.1 伪狂犬病病毒的分类、蛋白质结构及功能10-12
• 1.1.1 伪狂犬病病毒的发现与命名10-12
• 1.2 伪狂犬病病毒的生物学特性12-19
• 1.2.1 伪狂犬病病毒的形态结构12-13
• 1.2.2 伪狂犬病病毒的基因组特征13-14
• 1.2.3 伪狂犬病毒的蛋白14-17
• 1.2.4 PRV的复制及其与细胞之间的相互作用17-19
• 1.3 伪狂犬病毒与神经传导19-21
• 1.4 先天性肛门闭锁21-22
• 1.5 免疫组化概述及应用22-23
• 1.6 研究的目的和意义23-24
• 第二章 PRV人工感染大鼠病理模型的建立24-41
• 2.1 引言24-25
• 2.2 材料、试剂与仪器25-27
• 2.2.1 实验动物、毒株及细胞25
• 2.2.2 主要材料及试剂25-26
• 2.2.3 主要仪器26-27
• 2.3 方法27-32
• 2.3.1 PRV SA215-T的TCID_(50)测定27
• 2.3.2 PRV SA215-T的LD_(50)测定27
• 2.3.3 大鼠病理模型试验病毒攻毒剂量的确定27-28
• 2.3.4 PRV SA215-T和Bartha-K61人工感染大鼠试验及病料采集28
• 2.3.5 病料中PRV抗原的PCR方法鉴定28-29
• 2.3.6 免疫组化检测PRV方法的建立29-31
• 2.3.7 免疫组化结果与PCR结果比较31-32
• 2.4 结果32-38
• 2.4.1 PRV SA215-T的TCID_(50)测定32
• 2.4.2 PRV SA215-T的LD_(50)测定32-33
• 2.4.3 PRV人工感染SD大鼠剂量确定及感染后临床症状33
• 2.4.4 大鼠内脏组织器官的PCR检测结果及统计33-35
• 2.4.5 免疫组化条件的优化35-37
• 2.4.6 免疫组化结果与PCR结果的比较37-38
• 2.5 讨论38-41
• 第三章 免疫组化方法示踪PRV感染大鼠肛门括约肌的神经传导实验41-48
• 3.1 引言41-42
• 3.2 材料、试剂与仪器42-43
• 3.2.1 材料42
• 3.2.2 主要试剂42
• 3.2.3 主要仪器42-43
• 3.3 方法43
• 3.4 结果43-46
• 3.5 分析讨论46-48
• 全文结论48-49
• 参考文献49-57
• 致谢57-58

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