活性氧介导的NLRP3炎症小体在新孢子虫感染中的作用
发布时间：2021-06-28 20:50
犬新孢子虫（Neospora caninum）,简称新孢子虫,是一种寄生于细胞内的原虫,其能够引起中间宿主牛、羊等动物生殖障碍等疾病和终末宿主犬及犬科动物神经系统紊乱等疾病。新孢子虫感染呈世界性流行,每年给世界养牛业造成严重的经济损失。目前为止,市面上没有预防和治疗新孢子虫病的商品化疫苗和特效药,主要原因是人们对宿主与新孢子虫感染之间的免疫机制仍不清楚。近年来在宿主与新孢子虫感染之间的先天免疫机制研究上取得一定的成果。先天免疫系统通过宿主细胞表达的模式识别受体（PRR）识别入侵微生物的病原相关分子模式（PAMP）,随后介导机体发生先天免疫防御反应,如通过炎性反应释放细胞因子和趋化因子等过程对入侵的病原快速识别和清除。本实验室前期研究发现新孢子虫感染腹腔巨噬细胞显著上调NOD样受体中NLRP3基因,并激活NLRP3炎症小体来发挥抗新孢子虫的作用。NLRP3炎症小体激活能够分泌细胞因子IL-1β和IL-18,并介导其释放到细胞外以发挥下游的免疫效应,但新孢子虫感染是如何诱导腹腔巨噬细胞中NLRP3炎症小体活化并不清楚。新孢子虫感染犬中性粒细胞能够诱导活性氧（ROS）依赖的胞外陷阱产生,因此...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
多功能荧光酶标仪检测ROS的释放Figure1.1TheROSreleasewasdetectedbymultifunctionalmicroplatereader
第二篇研究内容第1章新孢子虫诱导腹腔巨噬细胞中ROS产生211.3.1.2流式细胞仪检测腹腔巨噬细胞中ROS的释放我们通过流式细胞仪进一步检测新孢子虫感染小鼠腹腔巨噬细胞对细胞内ROS水平变化的影响，结果发现同多功能荧光酶标仪检测结果一致，新孢子虫感染小鼠腹腔巨噬细胞能够诱导ROS释放增加，并且发现新孢子虫的感染量增加，ROS的释放随感染量呈依赖性增加。通过ROS抑制剂NAC预处理1h，发现新孢子虫诱导腹腔巨噬细胞释放的ROS也降低，结果如图1.2。图1.2流式细胞仪检测ROS的释放A.流式细胞仪检测ROS；B.平均荧光强度分析ROS水平Figure1.2TheROSreleasewasanalyzedusinganFACSAriaflowcytometerA.ROSwereexaminedbywayofFACS;B.ROSwerequantifiedbywayofmeanfluorescenceintensity1.4讨论本研究所使用的宿主细胞为小鼠腹腔巨噬细胞，因为腹腔巨噬细胞多存在于腹腔灌洗液中，其获取途径简单便捷，每次可大量收集，且收集的细胞纯度高，目前涉及免疫应答机制的研究大部分使用的都是腹腔巨噬细胞。本实验室前期研究已经发现新孢子虫感染犬中性粒细胞能够释放胞外陷阱（NET），并且新孢子虫诱导胞外陷阱的释放依赖于ROS的产生[8]。另外，也发现新孢子虫感染小鼠腹腔巨噬细胞能够诱发先天免疫应答，激活NLRP3炎症小体[4]，但是新孢子虫作为胞内病原体是通过何种分子效应来活化NLRP3炎症小体，目前并未有相关报道需要进一步研究。因此本研究探究是否新孢子虫诱导小鼠腹腔巨噬细胞
第二篇研究内容第2章ROS介导新孢子虫感染巨噬细胞诱导的NLRP3炎症小体调控胞内虫体增殖34图2.1ROS抑制剂NAC对NLRP3炎症小体及胞内虫体增殖的影响A.乳酸脱氢酶（LDH）的检测；B.WesternBolt检测IL-1β分泌及NLRP3表达；C.ELISA检测细胞上清中的IL-1β；D.腹腔巨噬细胞中新孢子虫的感染率；E.荧光定量PCR检测胞内荷虫量；F.100个纳虫空泡中新孢子虫计数Figure2.1EffectsofROSinhibitorNAConNLRP3inflammasomeactivationandparasiteburdeninN.caninumPMsA.TheLDHreleasewasmonitored；B.NLRP3expressionandIL-1βsecretionweredetectedbyWesternBlot；C.IL-1βinsupernatantswasmeasuredbyELISA；D.RateofN.caninuminfectedcellsinPMs；E.NumberofN.caninumininfectedPMswasassessedbyquantitativePCR.；F.Quantificationofparasitesin100parasitophorousvacuoles
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同药物体外抑制新孢子虫的比较[J]. 谢素珠,李航,赵少伟,王浩,张煊承,张宁宁,贾立军. 中国兽医学报. 2019(09)
[2]去甲斑蝥素诱导活性氧的产生介导SKOV3细胞凋亡和G2/M期周期阻滞[J]. 董秀,冯晓丹,王英,韩兆丰,王晓波,李海波. 中华中医药学刊. 2019(08)
[3]肺炎支原体经ROS激活NLRP3炎性体诱导RAW264.7细胞分泌IL-1β[J]. 张涵,马晶,张云凌,张树明,许庆瑞,王伟明. 中国病理生理杂志. 2015(12)
[4]炎症小体在对抗微生物感染中的作用[J]. 雷国伟,毛立明,李华,安利国,杨桂文,孟广勋. 中国细胞生物学学报. 2011(12)
[5]新孢子虫病检测方法研究进展[J]. 徐晓芳,邢沈阳,李建华,张西臣. 中国病原生物学杂志. 2011(04)
硕士论文
[1]淫羊藿素诱导活性氧类物质产生抑制血液系统肿瘤作用研究[D]. 杨小菁.兰州大学 2018
本文编号：3255028
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
多功能荧光酶标仪检测ROS的释放Figure1.1TheROSreleasewasdetectedbymultifunctionalmicroplatereader
第二篇研究内容第1章新孢子虫诱导腹腔巨噬细胞中ROS产生211.3.1.2流式细胞仪检测腹腔巨噬细胞中ROS的释放我们通过流式细胞仪进一步检测新孢子虫感染小鼠腹腔巨噬细胞对细胞内ROS水平变化的影响，结果发现同多功能荧光酶标仪检测结果一致，新孢子虫感染小鼠腹腔巨噬细胞能够诱导ROS释放增加，并且发现新孢子虫的感染量增加，ROS的释放随感染量呈依赖性增加。通过ROS抑制剂NAC预处理1h，发现新孢子虫诱导腹腔巨噬细胞释放的ROS也降低，结果如图1.2。图1.2流式细胞仪检测ROS的释放A.流式细胞仪检测ROS；B.平均荧光强度分析ROS水平Figure1.2TheROSreleasewasanalyzedusinganFACSAriaflowcytometerA.ROSwereexaminedbywayofFACS;B.ROSwerequantifiedbywayofmeanfluorescenceintensity1.4讨论本研究所使用的宿主细胞为小鼠腹腔巨噬细胞，因为腹腔巨噬细胞多存在于腹腔灌洗液中，其获取途径简单便捷，每次可大量收集，且收集的细胞纯度高，目前涉及免疫应答机制的研究大部分使用的都是腹腔巨噬细胞。本实验室前期研究已经发现新孢子虫感染犬中性粒细胞能够释放胞外陷阱（NET），并且新孢子虫诱导胞外陷阱的释放依赖于ROS的产生[8]。另外，也发现新孢子虫感染小鼠腹腔巨噬细胞能够诱发先天免疫应答，激活NLRP3炎症小体[4]，但是新孢子虫作为胞内病原体是通过何种分子效应来活化NLRP3炎症小体，目前并未有相关报道需要进一步研究。因此本研究探究是否新孢子虫诱导小鼠腹腔巨噬细胞
第二篇研究内容第2章ROS介导新孢子虫感染巨噬细胞诱导的NLRP3炎症小体调控胞内虫体增殖34图2.1ROS抑制剂NAC对NLRP3炎症小体及胞内虫体增殖的影响A.乳酸脱氢酶（LDH）的检测；B.WesternBolt检测IL-1β分泌及NLRP3表达；C.ELISA检测细胞上清中的IL-1β；D.腹腔巨噬细胞中新孢子虫的感染率；E.荧光定量PCR检测胞内荷虫量；F.100个纳虫空泡中新孢子虫计数Figure2.1EffectsofROSinhibitorNAConNLRP3inflammasomeactivationandparasiteburdeninN.caninumPMsA.TheLDHreleasewasmonitored；B.NLRP3expressionandIL-1βsecretionweredetectedbyWesternBlot；C.IL-1βinsupernatantswasmeasuredbyELISA；D.RateofN.caninuminfectedcellsinPMs；E.NumberofN.caninumininfectedPMswasassessedbyquantitativePCR.；F.Quantificationofparasitesin100parasitophorousvacuoles
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同药物体外抑制新孢子虫的比较[J]. 谢素珠,李航,赵少伟,王浩,张煊承,张宁宁,贾立军. 中国兽医学报. 2019(09)
[2]去甲斑蝥素诱导活性氧的产生介导SKOV3细胞凋亡和G2/M期周期阻滞[J]. 董秀,冯晓丹,王英,韩兆丰,王晓波,李海波. 中华中医药学刊. 2019(08)
[3]肺炎支原体经ROS激活NLRP3炎性体诱导RAW264.7细胞分泌IL-1β[J]. 张涵,马晶,张云凌,张树明,许庆瑞,王伟明. 中国病理生理杂志. 2015(12)
[4]炎症小体在对抗微生物感染中的作用[J]. 雷国伟,毛立明,李华,安利国,杨桂文,孟广勋. 中国细胞生物学学报. 2011(12)
[5]新孢子虫病检测方法研究进展[J]. 徐晓芳,邢沈阳,李建华,张西臣. 中国病原生物学杂志. 2011(04)
硕士论文
[1]淫羊藿素诱导活性氧类物质产生抑制血液系统肿瘤作用研究[D]. 杨小菁.兰州大学 2018
本文编号：3255028
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/3255028.html
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