Bt（Cry1Ab/Cry1Ac）抗虫棉的抗虫性鉴定及新Bt（Cry1C*）基因在棉花上的遗传转化
发布时间：2021-06-30 09:45
据国际农业生物技术应用服务组织（ISAAA）统计,从1996年到2015年的20年间,全球转基因作物累计种植面积达到20亿公顷,其中,转基因棉花累计种植面积达3亿公顷。转基因作物为农户及消费者带来的利益不言而喻。转Bt基因抗虫棉的应用及推广有效地解决了棉铃虫害对棉花生产的影响。随着研究的不断深入,发现其存在几个问题:一方面,Bt基因在棉花体内的表达存在时空差异;另一方面,目前抗虫棉花品种选育普遍采用的方法是利用获得转基因应用安全证书的品种作供体,与非转基因棉花杂交,转Bt基因抗虫棉品种间Bt蛋白表达量差异较大,尤其是其杂交后代Bt蛋白的表达量差异很大,对棉花的抗虫育种造成很大困难;第三,抗虫基因单一,现有的抗虫基因主要用于防治鳞翅目的棉铃虫（Helicoverpa armigera）和棉红铃虫（Pectinophora gossypiella）,使得棉田其他害虫如甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）、斜纹夜蛾（Prodenia litura）、玉米螟（Pyrausta nubilalis）等对棉花的危害逐渐加重,其中,甜菜夜蛾于2001年被列入重要害虫的潜在爆发名单。本研究测...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
全球转基因作物种植面积(19%一
Bt（Cry1Ab/Cry1Ac）抗虫棉的抗虫性鉴定及新 Bt（Cry1C*）基因在棉花上的遗传产生了具有特异杀虫活性的毒素分子。该毒素分子可以穿过包上皮细胞，与刷状缘膜上的高亲和受体可逆地结合，毒性分子分结构迅速、不可逆地插入质膜，从而使细胞膜上形成孔道。负离子以及一些寡糖通过，进而破坏了细胞的离子平衡，导致因代谢失调而不能正常进食，最终死亡（图2）[15,16]。
[49]。双 T-DNA 植物表达载体构建策略见图3。在植物表达载体pCAMBIA2300S 上连接 Nos-LB-RB 片段，将该载体命名为 pCAMBIA2300SDT，具有多克隆位点。在 pCAMBIA2300STD 载体上连接 Cry1C* 基因，将该载体命名为pCAMBIA2300STD-Cry1C* 载体。图 3 植物表达载体构建Fig.3 Schematic map of the construction for plant expression vector（2）农杆菌的活化①取出 -70℃ 保存的菌液，放置冰上缓慢融化，在固体 LB 培养基上划线接种农杆菌菌株，用封口膜封口，倒置放置在 28℃ 培养箱安培养 2~3天。② 从接种有农杆菌菌落的培养基上挑取农杆菌单菌落，将其接种在 2ml 含有50mg/L 卡那霉素的液体 LB 培养基中，28℃、200rmp 摇床上培养过夜。③ 再将农杆菌培养物转入到含有 50mg/L卡那霉素的液体 LB 培养基 10ml中培养
【参考文献】：
期刊论文
[1]Bt抗虫棉新品系毒蛋白表达差异分析[J]. 谷淇深,李志坤,王省芬,张艳,吴立强,柯会锋,张桂寅,马峙英. 棉花学报. 2017(02)
[2]Bt protein expression in the transgenic insect-resistant cotton in China[J]. Guoqing Sun,Dongling Zhang,Rui Zhang,Yuan Wang,Zhigang Meng,Tao Zhou,Chenzhen Liang,Tao Zhu,Sandui Guo. Science Bulletin. 2016(20)
[3]Cry1C蛋白对4种棉花害虫的致死效果[J]. 吕丽敏,张帅,雒珺瑜,王春义,朱香镇,王丽,张利娟,崔金杰. 生物安全学报. 2016(02)
[4]The effects of high temperature level on square Bt protein concen-tration of Bt cotton[J]. WANG Jun,CHEN Yuan,YAO Meng-hao,LI Yuan,WEN Yu-jin,CHEN Yuan,ZHANG Xiang,CHEN De-hua. Journal of Integrative Agriculture. 2015(10)
[5]转Bt基因棉花杀虫蛋白表达规律及对棉铃虫控制作用研究[J]. 徐丽娜,胡本进,李路,周子燕,胡飞,李昌春. 安徽农业大学学报. 2015(05)
[6]棉铃虫饲养技术与流程[J]. 秦启联. 应用昆虫学报. 2015(02)
[7]样品制备对转基因抗虫棉外源Bt蛋白定量检测的影响[J]. 常丽娟,刘文娟,张富丽,王东,尹全,雷绍荣,郭灵安,宋君. 棉花学报. 2015(02)
[8]施氮方式对转基因棉花Bt蛋白含量及产量的影响[J]. 马宗斌,刘桂珍,严根土,邓士政,黄群,李伶俐,朱伟. 生态学报. 2013(23)
[9]冀鲁豫棉区Bt棉Cry1A蛋白表达及对棉铃虫控制效果监测[J]. 吕丽敏,雒珺瑜,刘全义,杨子山,张帅,王春义,崔金杰. 棉花学报. 2013(05)
[10]双抗夹心酶免疫法检测转Bt基因抗虫棉种子的研究[J]. 孙硕,张坤,谭桂玉,曹振,南铁贵,王保民. 棉花学报. 2013(01)
硕士论文
[1]棉花T-DNA插入突变体侧翼序列分析与双T-DNA载体系统构建[D]. 李彦龙.华中农业大学 2016
[2]转Bt基因水稻Bt蛋白表达量检测及螟虫抗性和农艺性状评价[D]. 莫春红.华中农业大学 2014
本文编号：3257516
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
全球转基因作物种植面积(19%一
Bt（Cry1Ab/Cry1Ac）抗虫棉的抗虫性鉴定及新 Bt（Cry1C*）基因在棉花上的遗传产生了具有特异杀虫活性的毒素分子。该毒素分子可以穿过包上皮细胞，与刷状缘膜上的高亲和受体可逆地结合，毒性分子分结构迅速、不可逆地插入质膜，从而使细胞膜上形成孔道。负离子以及一些寡糖通过，进而破坏了细胞的离子平衡，导致因代谢失调而不能正常进食，最终死亡（图2）[15,16]。
[49]。双 T-DNA 植物表达载体构建策略见图3。在植物表达载体pCAMBIA2300S 上连接 Nos-LB-RB 片段，将该载体命名为 pCAMBIA2300SDT，具有多克隆位点。在 pCAMBIA2300STD 载体上连接 Cry1C* 基因，将该载体命名为pCAMBIA2300STD-Cry1C* 载体。图 3 植物表达载体构建Fig.3 Schematic map of the construction for plant expression vector（2）农杆菌的活化①取出 -70℃ 保存的菌液，放置冰上缓慢融化，在固体 LB 培养基上划线接种农杆菌菌株，用封口膜封口，倒置放置在 28℃ 培养箱安培养 2~3天。② 从接种有农杆菌菌落的培养基上挑取农杆菌单菌落，将其接种在 2ml 含有50mg/L 卡那霉素的液体 LB 培养基中，28℃、200rmp 摇床上培养过夜。③ 再将农杆菌培养物转入到含有 50mg/L卡那霉素的液体 LB 培养基 10ml中培养
【参考文献】：
期刊论文
[1]Bt抗虫棉新品系毒蛋白表达差异分析[J]. 谷淇深,李志坤,王省芬,张艳,吴立强,柯会锋,张桂寅,马峙英. 棉花学报. 2017(02)
[2]Bt protein expression in the transgenic insect-resistant cotton in China[J]. Guoqing Sun,Dongling Zhang,Rui Zhang,Yuan Wang,Zhigang Meng,Tao Zhou,Chenzhen Liang,Tao Zhu,Sandui Guo. Science Bulletin. 2016(20)
[3]Cry1C蛋白对4种棉花害虫的致死效果[J]. 吕丽敏,张帅,雒珺瑜,王春义,朱香镇,王丽,张利娟,崔金杰. 生物安全学报. 2016(02)
[4]The effects of high temperature level on square Bt protein concen-tration of Bt cotton[J]. WANG Jun,CHEN Yuan,YAO Meng-hao,LI Yuan,WEN Yu-jin,CHEN Yuan,ZHANG Xiang,CHEN De-hua. Journal of Integrative Agriculture. 2015(10)
[5]转Bt基因棉花杀虫蛋白表达规律及对棉铃虫控制作用研究[J]. 徐丽娜,胡本进,李路,周子燕,胡飞,李昌春. 安徽农业大学学报. 2015(05)
[6]棉铃虫饲养技术与流程[J]. 秦启联. 应用昆虫学报. 2015(02)
[7]样品制备对转基因抗虫棉外源Bt蛋白定量检测的影响[J]. 常丽娟,刘文娟,张富丽,王东,尹全,雷绍荣,郭灵安,宋君. 棉花学报. 2015(02)
[8]施氮方式对转基因棉花Bt蛋白含量及产量的影响[J]. 马宗斌,刘桂珍,严根土,邓士政,黄群,李伶俐,朱伟. 生态学报. 2013(23)
[9]冀鲁豫棉区Bt棉Cry1A蛋白表达及对棉铃虫控制效果监测[J]. 吕丽敏,雒珺瑜,刘全义,杨子山,张帅,王春义,崔金杰. 棉花学报. 2013(05)
[10]双抗夹心酶免疫法检测转Bt基因抗虫棉种子的研究[J]. 孙硕,张坤,谭桂玉,曹振,南铁贵,王保民. 棉花学报. 2013(01)
硕士论文
[1]棉花T-DNA插入突变体侧翼序列分析与双T-DNA载体系统构建[D]. 李彦龙.华中农业大学 2016
[2]转Bt基因水稻Bt蛋白表达量检测及螟虫抗性和农艺性状评价[D]. 莫春红.华中农业大学 2014
本文编号：3257516
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