牙鲆两种免疫基因的克隆与表达分析

发布时间：2021-07-06 18:09

　　精氨酸酶Ⅱ（arginaseⅡ,Arg-Ⅱ）是精氨酸酶家族中的一种,目前已经发现的精氨酸酶有Ⅰ和Ⅱ两种亚型,两者具有相似的结构特征和酶特性,它们主要参与了有机体的尿素循环,其区别在于各自的亚细胞定位、组织分布和免疫反应不同。近期研究发现精氨酸酶Ⅱ在免疫反应中也发挥了重要作用。核受体超家族由甾体激素、甲状腺激素、维甲酸等化学信号的受体及配体未明的多种孤儿受体组成,该家族成员的主要功能是作为配体激活的转录因子,调控代谢、发育、生殖相关基因的表达。肝X受体（liver X receptor,LXR）属于核受体超家族成员,不仅在脂质代谢中发挥重要的作用,而且在调控巨噬细胞的炎症反应和免疫应答中发挥着重要作用。ArgⅡ是巨噬细胞中LXRs的靶基因,LXRs上调精氨酸酶Ⅱ,ArgⅡ可以与iNOS竞争性催化底物精氨酸,减少一氧化氮的合成,发挥抗炎效果。牙鲆（Paralichthys olivaceus）俗称牙片、比目鱼、偏口等,是中国重要的海水养殖鱼类之一。因其具有极好的营养价值与经济价值而受到大家的喜爱。但是,由于过度捕捞使野生牙鲆数量锐减,同时工厂化养殖近亲繁殖严重,使得种质资源严重退化。而传染... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文献综述
    1 核受体超家族概况
        1.1 核受体超家族结构及其分类
        1.2 肝受体X（LXRs）
    2 精氨酸酶概况
        2.1 精氨酸酶结构及其分类
        2.2 精氨酸酶Ⅱ
    3 硬骨鱼中肝受体X(LXRs)及其靶基因精氨酸酶Ⅱ的研究进展
        3.1 鱼类中LXRs的研究
        3.2 鱼类中精氨酸酶Ⅱ的研究
    4 肝X受体（LXRs）和精氨酸酶Ⅱ的功能研究
        4.1 肝 X 受体（LXRs）在免疫中的作用
        4.2 肝受体X LXRs在生理和病理反应中的作用
        4.3 精氨酸酶在免疫中的作用
        4.4 精氨酸酶在生理和病理反应中的作用
第二章 牙鲆LXR基因的克隆、鉴定与表达分析
    1 实验材料
        1.1 实验用鱼
        1.2 主要试剂和仪器
    2 实验方法
        2.1 迟缓爱德华氏菌感染健康牙鲆实验
        2.2 牙鲆各组织采样
        2.3 牙鲆吞噬细胞和淋巴细胞的体外培养
        2.4 迟缓爱德华氏菌体外感染吞噬细胞和淋巴细胞实验
        2.5 健康牙鲆各组织rna的提取和cdna的合成
        2.6 牙鲆吞噬细胞和淋巴细胞的rna的提取
        2.7 c DNA第一链的合成
        2.8 LXR基因cDNA克隆验证
            2.8.1 中间序列炎症RCP引物和RACE引物合成
            2.8.2 LXR中间序列验证
            2.8.3 PCR产物纯化
            2.8.4 目的片段的连接与转化
            2.8.5 阳性克隆的检测和测序
            2.8.6 3‘RACE-ready cDNA和 5‘RACE-ready cDNA的制备
            2.8.7 牙鲆 LXR 基因的 c DNA 5'和 3'末端的快速扩增（RACE）
        2.9 序列和进化分析
        2.10 实时荧光定量PCR
    3 结果与分析
        3.1 牙鲆LXR基因的克隆
        3.2 牙鲆LXR基因的序列比对和同源性分析
        3.3 实时荧光定量PCR检测结果
    4.讨论
第三章 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆、鉴定与表达分析
    1 实验材料
        1.1 实验用鱼
        1.2 总RNA的提取以及cDNA的合成
        1.3 总DNA的提取
        1.4 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆
        1.5 序列分析和系统进化树分析
        1.6 精氨酸酶Ⅱ基因的组织表达
        1.7 精氨酸酶Ⅱ基因在迟缓爱德华氏菌感染后的表达
        1.8 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆分析
        2.2 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的序列比对和同源性分析
        2.3 实时荧光定量PCR检测结果分析
    3.讨论
总结与展望
参考文献
硕士阶段发表的论文
课题资助项目
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]牙鲆精氨酸酶基因片段的克隆及序列分析[J]. 刘华,施婷婷,施志仪.  广东农业科学. 2016(12)
[2]半滑舌鳎CD40基因克隆及其免疫功能分析[J]. 位战飞,郭华,李海龙,郑卫卫,王文文,戴欢,朱颖,刘洋,董忠典,陈松林.  中国水产科学. 2016(05)
[3]香鱼精氨酸酶Ⅱ基因的cDNA克隆及其表达与鳗弧菌感染的相关性[J]. 丁斐斐,李长红,陈炯,张琪.  生物技术通报. 2016(02)
[4]精氨酸酶Ⅰ在HIV感染者外周浅表淋巴结中表达的研究[J]. 张乃春,黄磊,王松山,邓建宁,卢祥婵,吴峰耀,赵敏.  中华实验和临床病毒学杂志. 2015 (01)
[5]草鱼LXRα基因的克隆及表达研究[J]. 李超,刘品,曹艳姿,吉红,林亚秋.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(06)
[6]精氨酸对动物的营养生理及免疫作用[J]. 孙红暖,杨海明,王志跃,张得才,张芬芬,杨芷.  动物营养学报. 2014(01)
[7]饲粮添加不同水平L-精氨酸对泌乳母猪生产性能、血清氨基酸浓度和免疫生化指标的影响[J]. 杨慧,林登峰,林伯全,王恬,张力.  动物营养学报. 2012(11)
[8]饲粮中添加不同水平L-精氨酸对妊娠母猪繁殖性能及血液生化指标的影响[J]. 杨慧,林登峰,王恬,林伯全,李贺来.  动物营养学报. 2012(10)
[9]L-精氨酸和乳酸菌对早期断奶仔猪生长性能、血液生化指标和小肠黏膜形态的影响[J]. 杨慧,林伯全,张力,王恬,杜海江.  福建农林大学学报(自然科学版). 2012(04)
[10]T淋巴细胞免疫功能的研究进展[J]. 周雄,胥志跃.  中国优生与遗传杂志. 2012(05)

硕士论文
[1]UT-B基因敲除小鼠脑中精氨酸酶Ⅰ的表达变化及炎症反应的发生[D]. 王琦.重庆医科大学 2015
[2]精氨酸酶Ⅰ和诱导型一氧化氮合成酶在肝细胞癌中的表达及其相关性研究[D]. 陶璇.福建医科大学 2012
[3]精氨酸对肉鸭生长性能、免疫机能、胴体品质和血液脂质的影响[D]. 方勇军.武汉工业学院 2009



本文编号：3268725