绿原酸对金属蛋白酶致大菱鲆肝细胞氧化损伤保护作用研究

发布时间：2021-07-15 16:13

　　为了证实绿原酸对金属蛋白酶诱导大菱鲆（Scophthalmus maximus）肝细胞损伤中保护作用,本试验首次克隆和分析了Nrf2和β-actin基因,检测Nrf2在不同组织中的表达。同时,在体外条件下,将金属蛋白酶低浓度组（2μg/ml）、中浓度组（10μg/ml）和高浓度组（50μg/ml）作用于大菱鲆肝细胞2h、4h、8h和16h。通过酶活测定、RT-qPCR及流式细胞等技术,首先通过测定SOD、CAT活力MDA含量及Nrf2和HO-1基因的相对表达水平,同时测定肝细胞活性氧（ROS）和凋亡情况,获得了金属蛋白酶致大菱鲆肝细胞氧化损伤的程度;进一步研究了绿原酸（9μg/ml、18μg/ml和36μg/ml）对金属蛋白酶胁迫肝细胞后上述的抗氧化指标及基因的相对表达情况,明确了绿原酸对金属蛋白酶致大菱鲆肝细胞氧化损伤的保护作用。大菱鲆Nrf2基因cDNA全长2448bp,开放阅读框（ORF）为1983bp,编码660个氨基酸,5′-非编码区（UTR）为44bp,3′-UTR为421bp。大菱鲆Nrf2基因与高体鰤（Seriola dumerili）的同源性最高为83.5%,与鸡（G... 

【文章来源】：河北科技师范学院河北省

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【图文】：

大菱鲆Nrf2基因5′RACE和3′RACEFig.2-1Nrf2genecloning,3′,5′rapidamplificationofcDNAendsM.Marker2000；1.3′端；2.5′端

第二章大菱鲆Nrf2基因的克隆及表达分析23660个氨基酸，5′-UTR为44bp，3′-UTR为421bp(图2-2)；ProtParam软件预测出该蛋白分子量为63.7kD，理论等电点为4.6；富含亮氨酸含量最高为10.0%，丝氨酸次之为9.7%，组氨酸含量最低为2.3%（图2-3）；SignalP4.1Server程序预测该蛋白不含信号肽；NetNGlyc1.0软件分析第145、166、267、307、350、374、594位为N-糖基化位点。图2-2大菱鲆Nrf2基因cDNA核苷酸序列和推导的氨基酸序列Fig.2-2NucleotideanddeducedaminoacidsequenceofNrf2cDNA阴影部分ATG、TAA和AATAAA分别代表起始密码子、终止密码子和加尾信号，下划线代表CNC结构域，下划虚线代表DNA结合区域，方框中代表Nrf2与抑制蛋白Keap1

第二章大菱鲆Nrf2基因的克隆及表达分析24结合所必需的的DLG和ETGE基序。图2-3大菱鲆Nrf2氨基酸组成Fig.2-3AminoacidcompositionofturbotNrf22.4.3大菱鲆Nrf2蛋白二级结构及功能域分析使用PredictProtein软件对大菱鲆肌动蛋白原二级结构预测结果表明，该蛋白有13.03%的α螺旋，1.52%的β-折叠和75.45%的环肽链；经TMpred预测其有一个跨膜结构(图2-4)；用SMART(SimpleModμlarArchitectureResearchTool)软件分析该蛋白含有一个543到606氨基酸的BRLZ域(亮氨酸拉链)。

【参考文献】：
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本文编号：3286037