葛根素激活P38、ERK1/2信号通路促进MC3T3-E1细胞增殖的研究
发布时间：2021-08-04 11:27
目的:骨质疏松症是以骨量减少、骨的微观结构退化为特征的,致使骨的脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病。多见于老年动物和绝育后动物。随着社会的发展,越来越多的宠物主人会选择为自己的爱宠做绝育手术,动物绝育后,体内雌激素水平会显著下降,雌激素水平降低可能会导致骨质疏松症的发生,但长期补充雌激素会增加动物患乳腺癌和对称性脱毛等疾病的风险,因此,研究者力图寻找一种安全性高、副作用小的雌激素替代物。葛根素是一种植物雌激素,对骨质疏松症的治疗效果与雌激素像似,但无雌激素的副作用。本研究拟在细胞水平和分子水平上研究葛根素对MC3T3-E1成骨细胞增殖所产生的作用,并观察其量效关系和时效关系。进一步通过抑制MC3T3-E1成骨细胞中MAPK信号通路主要成员P38和ERK1/2的活性后,观察比较下游蛋白及MC3T3-E1细胞増殖过程中标志物的表达情况,明确葛根素对MC3T3-E1细胞的作用机制并阐明其间所涉及的信号通路。方法与结果:在MC3T3-E1细胞培养基中加入不同浓度(0mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度葛根素对MC3T3-E1细胞增殖的影响
甘肃农业大学2020届硕士学位论文20表310-6mol/L葛根素作用不同时间对MC3T3-E1细胞增殖的影响Table3Effectsof10-6mol/LpuerarinonMC3T3-E1cellproliferationatdifferenttime组别24h36h48h60hOD值1.240.131.530.042.420.121.860.06图210-6mol/L葛根素作用不同时间对MC3T3-E1细胞增殖的影响Figure2Effectsof10-6mol/LpuerarinonMC3T3-E1cellproliferationatdifferenttime3.2pNPP检测结果pNPP检测结果如表3，与对照组相比浓度为10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L的葛根素都能增强MC3T3-E1细胞内ALP的活性，其中葛根素浓度为10-6mol/L时增强细胞内ALP活性的作用最为明显，葛根素浓度在10-6-10-4mol/L范围内时，浓度越高，促进MC3T3-E1细胞分泌ALP能力越弱。浓度为10-3mol/L的葛根素会抑制MC3T3-E1细胞分泌ALP。表4不同浓度葛根素对MC3T3-E1细胞分化的影响Table4EffectsofPuerarinatDifferentConcentrationsonMC3T3-E1CellDifferentiation注：*表示与空白对照组比较差异显著（P<0.05）组别空白对照组10-7mol/LPUE10-6mol/LPUE10-5mol/LPUE10-4mol/LPUE10-3mol/LPUEOD值071±0.040.86±0.06*1.09±0.09*0.91±0.06*0.83±0.04*0.61±0.06*
葛根素激活P38、ERK1/2信号通路促进MC3T3-E1细胞增殖的研究21图3不同浓度葛根素对MC3T3-E1细胞分化的影响Figure3EffectsofPuerarinatDifferentConcentrationsonMC3T3-E1CellDifferentiation4讨论骨质疏松症是以骨量减少、骨的微观结构退化为特征的，致使骨的脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病[1]。促进破骨细胞骨吸收和抑制成骨细胞骨生成所导致的骨代谢失调都可以引起骨质疏松症。成骨细胞在减少骨质丢失和维持骨量中都发挥着重要作用。由于大多数原代成骨细胞在培养9代后会出现生长停滞、衰老和死亡等情况，这使其在体外细胞实验中具有一定的局限性。MC3T3-E1细胞是来源于小鼠颅盖骨细胞的前体细胞，具有成骨细胞形成过程中的生物学特性，包括基质成熟及矿化和ALP活性等，已成为体外研究骨质疏松症比较有价值的细胞模型[92]，因此，我们采用MC3T3-E1细胞进行体外实验。目前治疗骨质疏松的药物主要分为骨吸收抑制剂、骨形成促进剂和骨矿化物这三类。雌激素对于骨质疏松症效果好，但副作用大，长期使用可能会导致乳腺癌、皮肤色素过度沉着等疾玻因此，我们力图寻找一种和雌激素效果，但是安全性高、副作用小的药物。植物雌激素具有雌激素样作用，安全性高、副作用校葛根素为中药葛根的提取物，是一种副作用小的植物雌激素，现已广泛应用于临床，对高血压、糖尿并冠心病等疾病有较好的疗效。研究表明，其具有促进成骨细胞骨形成的作用[93]。本章实验以MC3T3-E1细胞为模型，考察了葛根素对
【参考文献】：
期刊论文
[1]葛根素通过ERK1/2和p38 MAPK信号通路刺激成骨分化和骨形成的机制[J]. 钟海波,郭祥,黄琳惠. 中国比较医学杂志. 2019(02)
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[3]葛根素通过p38MAPK通路抑制MC3T3-E1成骨细胞凋亡[J]. 于冬冬,赵丹阳. 中国现代医学杂志. 2017(05)
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[5]龙鳖胶囊对骨关节炎滑膜细胞p38MAPK信号通路及NF-κB p65的调控研究[J]. 潘建科,谢辉,刘军,郭达,杨伟毅,张娴. 中华中医药学刊. 2017(01)
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[8]葛根素防治骨质疏松的研究进展[J]. 杨勇晖,陈平洋. 中国骨质疏松杂志. 2015(03)
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博士论文
[1]基于MAPK/TGF-β1/Smads信号级联研究左、右归丸促骨髓间充质干细胞的成骨机制[D]. 宋囡.辽宁中医药大学 2014
[2]鳕鱼骨胶原肽与活性钙的制备及其抗骨质疏松活性研究[D]. 王珊珊.中国海洋大学 2013
[3]ODN MT01通过MAPK通路调控成骨细胞分化的机制研究[D]. 侯旭.吉林大学 2013
[4]植物雌激素防治去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究及其作用机制探讨[D]. 王建华.河北医科大学 2003
硕士论文
[1]葛根素对骨质疏松症治疗作用及机制的实验研究[D]. 张明.大理大学 2016
[2]补骨脂素激活MAPK-NF-κB信号通路促进成骨细胞增殖的研究[D]. 李启活.广州中医药大学 2016
[3]淫羊藿次苷Ⅱ通过p38MAPK信号通路调控成骨细胞护骨素表达和成骨分化研究[D]. 龚一昕.安徽医科大学 2016
[4]雌激素缺乏对绝经女性破骨细胞合成及细胞因子分泌的影响[D]. 徐振刚.浙江师范大学 2015
[5]围绝经期女性雌激素水平与骨质疏松发病机制的临床研究[D]. 王宝成.大连医科大学 2014
[6]骨质疏松相关激素与骨密度相关性研究[D]. 李朦.重庆医科大学 2013
[7]葛根总黄酮及葛根素对骨髓基质细胞成骨分化及成脂分化的影响[D]. 杨建.吉林大学 2013
[8]柚皮苷在促MSCs骨向分化过程中对MAPK信号通路的影响[D]. 汪甜.暨南大学 2012
[9]葛藤异黄酮分散片抗大鼠骨质疏松作用及机理的研究[D]. 虞慧娟.山东中医药大学 2012
[10]骨质疏松症发病机理的蛋白质组学研究[D]. 朱维.湖南师范大学 2012
本文编号：3321611
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度葛根素对MC3T3-E1细胞增殖的影响
甘肃农业大学2020届硕士学位论文20表310-6mol/L葛根素作用不同时间对MC3T3-E1细胞增殖的影响Table3Effectsof10-6mol/LpuerarinonMC3T3-E1cellproliferationatdifferenttime组别24h36h48h60hOD值1.240.131.530.042.420.121.860.06图210-6mol/L葛根素作用不同时间对MC3T3-E1细胞增殖的影响Figure2Effectsof10-6mol/LpuerarinonMC3T3-E1cellproliferationatdifferenttime3.2pNPP检测结果pNPP检测结果如表3，与对照组相比浓度为10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L的葛根素都能增强MC3T3-E1细胞内ALP的活性，其中葛根素浓度为10-6mol/L时增强细胞内ALP活性的作用最为明显，葛根素浓度在10-6-10-4mol/L范围内时，浓度越高，促进MC3T3-E1细胞分泌ALP能力越弱。浓度为10-3mol/L的葛根素会抑制MC3T3-E1细胞分泌ALP。表4不同浓度葛根素对MC3T3-E1细胞分化的影响Table4EffectsofPuerarinatDifferentConcentrationsonMC3T3-E1CellDifferentiation注：*表示与空白对照组比较差异显著（P<0.05）组别空白对照组10-7mol/LPUE10-6mol/LPUE10-5mol/LPUE10-4mol/LPUE10-3mol/LPUEOD值071±0.040.86±0.06*1.09±0.09*0.91±0.06*0.83±0.04*0.61±0.06*
葛根素激活P38、ERK1/2信号通路促进MC3T3-E1细胞增殖的研究21图3不同浓度葛根素对MC3T3-E1细胞分化的影响Figure3EffectsofPuerarinatDifferentConcentrationsonMC3T3-E1CellDifferentiation4讨论骨质疏松症是以骨量减少、骨的微观结构退化为特征的，致使骨的脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病[1]。促进破骨细胞骨吸收和抑制成骨细胞骨生成所导致的骨代谢失调都可以引起骨质疏松症。成骨细胞在减少骨质丢失和维持骨量中都发挥着重要作用。由于大多数原代成骨细胞在培养9代后会出现生长停滞、衰老和死亡等情况，这使其在体外细胞实验中具有一定的局限性。MC3T3-E1细胞是来源于小鼠颅盖骨细胞的前体细胞，具有成骨细胞形成过程中的生物学特性，包括基质成熟及矿化和ALP活性等，已成为体外研究骨质疏松症比较有价值的细胞模型[92]，因此，我们采用MC3T3-E1细胞进行体外实验。目前治疗骨质疏松的药物主要分为骨吸收抑制剂、骨形成促进剂和骨矿化物这三类。雌激素对于骨质疏松症效果好，但副作用大，长期使用可能会导致乳腺癌、皮肤色素过度沉着等疾玻因此，我们力图寻找一种和雌激素效果，但是安全性高、副作用小的药物。植物雌激素具有雌激素样作用，安全性高、副作用校葛根素为中药葛根的提取物，是一种副作用小的植物雌激素，现已广泛应用于临床，对高血压、糖尿并冠心病等疾病有较好的疗效。研究表明，其具有促进成骨细胞骨形成的作用[93]。本章实验以MC3T3-E1细胞为模型，考察了葛根素对
【参考文献】：
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[3]ODN MT01通过MAPK通路调控成骨细胞分化的机制研究[D]. 侯旭.吉林大学 2013
[4]植物雌激素防治去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究及其作用机制探讨[D]. 王建华.河北医科大学 2003
硕士论文
[1]葛根素对骨质疏松症治疗作用及机制的实验研究[D]. 张明.大理大学 2016
[2]补骨脂素激活MAPK-NF-κB信号通路促进成骨细胞增殖的研究[D]. 李启活.广州中医药大学 2016
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[4]雌激素缺乏对绝经女性破骨细胞合成及细胞因子分泌的影响[D]. 徐振刚.浙江师范大学 2015
[5]围绝经期女性雌激素水平与骨质疏松发病机制的临床研究[D]. 王宝成.大连医科大学 2014
[6]骨质疏松相关激素与骨密度相关性研究[D]. 李朦.重庆医科大学 2013
[7]葛根总黄酮及葛根素对骨髓基质细胞成骨分化及成脂分化的影响[D]. 杨建.吉林大学 2013
[8]柚皮苷在促MSCs骨向分化过程中对MAPK信号通路的影响[D]. 汪甜.暨南大学 2012
[9]葛藤异黄酮分散片抗大鼠骨质疏松作用及机理的研究[D]. 虞慧娟.山东中医药大学 2012
[10]骨质疏松症发病机理的蛋白质组学研究[D]. 朱维.湖南师范大学 2012
本文编号：3321611
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