党参果聚糖合成关键酶基因Cp1-SST启动子功能分析及多糖合成调控相关转录因子筛选
发布时间：2021-08-24 18:20
目的:潞党参产于上党盆地,为山西道地药材,具有补中益气、健脾益肺的功效。课题组前期从党参中克隆得到蔗糖:蔗糖1-果糖基转移酶（sucrose:sucrose 1-fructosyltransferase,Cp1-SST）,该基因可响应干旱胁迫且在果聚糖合成代谢中发挥重要作用。目前党参基因相关的研究已经起步,但是从转录调控方向研究党参果聚糖的生物合成途径尚不明确。本文从Cp1-SST的亚细胞定位出发,探究Cp1-SST基因对干旱胁迫响应及相关糖代谢的机制,克隆Cp1-SST基因的启动子并对其序列进行功能分析以及冷胁迫处理,分析其对下游基因Cp1-SST的启动作用,同时对党参转录组数据库进行党参多糖合成相关转录因子的筛选,再结合Cp1-SST基因启动子元件分析的结果筛选转录因子,为阐明党参果聚糖合成调控的分子机制提供依据,并为探讨党参道地性形成机制奠定理论基础。方法:1.通过无缝克隆技术将Cp1-SST基因克隆至pHBT-GFP-NOS载体上,获得1-SST-GFP植物瞬时表达融合载体。利用PEG-Ca2+介导法转化拟南芥原生质体,利用荧光共聚焦显微镜观察蛋白亚细胞定...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pHBT-1-SST-GFP重组载体图谱
山西医科大学硕士学位论文9整齐单一，且28S和18S条带的亮度比接近2∶1。核酸蛋白仪检测结果显示样品的A260/A280在1.8~2.0之间，且A260/A230均大于2.0，说明所提取的RNA完整性好、纯度高，可用于后续cDNA的合成。以党参cDNA为模板，扩增得到1800bp左右的片段，电泳结果（图1-3）表明，扩增产物与预期目的片段大小一致且条带单一，可用于后续TA克隆实验。图1-2党参根总RNA电泳分析图1-3Cp1-SST基因PCR电泳分析(MK:5000Marker；1：扩增的Cp1-SST片段)1.3.2pHBT-1-SST-GFP重组载体的构建通过设计无缝克隆引物将1-SST基因克隆至pHBT-GFP-NOS载体上，获得1-SST-GFP植物瞬时表达融合载体。以培养过夜的菌落为模板进行PCR反应，所得条带亮且单一（图1-4），与目的片段大小一致，可用于质粒的提龋对提取的质粒进行双酶切鉴定，电泳分析结果如图1-5所示，说明pHBT-1-SST-GFP重
山西医科大学硕士学位论文9整齐单一，且28S和18S条带的亮度比接近2∶1。核酸蛋白仪检测结果显示样品的A260/A280在1.8~2.0之间，且A260/A230均大于2.0，说明所提取的RNA完整性好、纯度高，可用于后续cDNA的合成。以党参cDNA为模板，扩增得到1800bp左右的片段，电泳结果（图1-3）表明，扩增产物与预期目的片段大小一致且条带单一，可用于后续TA克隆实验。图1-2党参根总RNA电泳分析图1-3Cp1-SST基因PCR电泳分析(MK:5000Marker；1：扩增的Cp1-SST片段)1.3.2pHBT-1-SST-GFP重组载体的构建通过设计无缝克隆引物将1-SST基因克隆至pHBT-GFP-NOS载体上，获得1-SST-GFP植物瞬时表达融合载体。以培养过夜的菌落为模板进行PCR反应，所得条带亮且单一（图1-4），与目的片段大小一致，可用于质粒的提龋对提取的质粒进行双酶切鉴定，电泳分析结果如图1-5所示，说明pHBT-1-SST-GFP重
【参考文献】：
期刊论文
[1]茄子花药开裂相关基因SmDAD1启动子的克隆及功能分析[J]. 张少伟,袁超,牛义,汤青林,魏大勇,王永清,田时炳,杨洋,王志敏. 园艺学报. 2020(04)
[2]中间锦鸡儿CiNAC038启动子的克隆及对激素响应分析[J]. 红格日其其格,王燕飞,高仙灵,庞彩霞,尚晓蕊,李国婧,王瑞刚. 生物技术通报. 2020(07)
[3]马铃薯StMYB44基因对蔗糖的响应[J]. 谢海娟,蒲秀琴,叶广继,王舰,杨永智. 西北植物学报. 2020(02)
[4]甘蓝型油菜启动子pBnaC05g31880D的克隆与功能分析[J]. 华兆晖,范世航,李俊. 江苏农业科学. 2020(02)
[5]小叶杨TMM基因启动子克隆及表达模式分析[J]. 乐丽娜,滕青云,宋冰倩,匡华琳,陈英. 分子植物育种. 2020(01)
[6]小麦灌浆相关基因TaGIF1的克隆及表达分析[J]. 田小萍,王光浩,张宏,吉万全. 麦类作物学报. 2020(01)
[7]荠菜TPD1基因启动子与GUS基因表达载体的构建及拟南芥遗传转化[J]. 何金花,杨正修,姜路华,方磊,赵燕. 江苏农业科学. 2019(24)
[8]大豆中3个Dof转录因子的生物信息学及表达分析[J]. 翟莹,邱爽,张军,刘春雨,赵艳,李珊珊,张梅娟,邱增城,任巍巍. 华北农学报. 2019(06)
[9]巴戟天MoDXR基因及其启动子的克隆与分析[J]. 谢德金,叶友杰,杨德明,张娅欣,何天友,陈礼光,郑郁善. 药学学报. 2020(02)
[10]苹果NLP（Nin-Like Protein）转录因子基因家族全基因组鉴定及表达模式分析[J]. 王寻,陈西霞,李宏亮,张富军,赵先炎,韩月彭,王小非,郝玉金. 中国农业科学. 2019(23)
博士论文
[1]陆地棉GhWRKY27/42/91基因的克隆和功能验证[D]. 顾丽姣.中国农业科学院 2019
[2]拟南芥AtSUC4与AtPsaL的叶绿体定位机制的研究[D]. 杨紫薇.华南农业大学 2017
[3]拟南芥ERF74对非生物胁迫响应机制的研究[D]. 姚远.华南农业大学 2016
[4]小麦族植物果聚糖合成酶基因克隆及功能验证[D]. 高翔.中国农业科学院 2010
[5]辣椒WRKY转录因子cDNA的分离与功能鉴定[D]. 王育娜.福建农林大学 2008
硕士论文
[1]马铃薯StCRK1和StCRK2亚细胞定位及其互作蛋白的初步筛选[D]. 王双.内蒙古农业大学 2019
[2]潞党参药材商品等级及质量标准研究[D]. 张沙沙.山西医科大学 2019
[3]蔗糖—果糖基转移酶SST基因转入甜菜产生果聚糖的研究[D]. 梁文洁.石河子大学 2017
[4]党参挥发性成分分析及特殊香气研究[D]. 郭琼琼.山西医科大学 2016
[5]不同来源党参成分含量测定及党参HPLC特征图谱研究[D]. 关琳静.山西医科大学 2015
[6]潞党参与常用商品党参质量比较研究及潞党参质量标准制订[D]. 赵江燕.山西医科大学 2014
[7]棕色棉纤维原花青素转运蛋白基因GhTT12的克隆与表达分析[D]. 吴楠.安徽农业大学 2014
[8]转蔗糖：蔗糖-1-果糖基转移酶基因甘蔗的抗旱性研究[D]. 武媛丽.海南大学 2011
本文编号：3360488
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pHBT-1-SST-GFP重组载体图谱
山西医科大学硕士学位论文9整齐单一，且28S和18S条带的亮度比接近2∶1。核酸蛋白仪检测结果显示样品的A260/A280在1.8~2.0之间，且A260/A230均大于2.0，说明所提取的RNA完整性好、纯度高，可用于后续cDNA的合成。以党参cDNA为模板，扩增得到1800bp左右的片段，电泳结果（图1-3）表明，扩增产物与预期目的片段大小一致且条带单一，可用于后续TA克隆实验。图1-2党参根总RNA电泳分析图1-3Cp1-SST基因PCR电泳分析(MK:5000Marker；1：扩增的Cp1-SST片段)1.3.2pHBT-1-SST-GFP重组载体的构建通过设计无缝克隆引物将1-SST基因克隆至pHBT-GFP-NOS载体上，获得1-SST-GFP植物瞬时表达融合载体。以培养过夜的菌落为模板进行PCR反应，所得条带亮且单一（图1-4），与目的片段大小一致，可用于质粒的提龋对提取的质粒进行双酶切鉴定，电泳分析结果如图1-5所示，说明pHBT-1-SST-GFP重
山西医科大学硕士学位论文9整齐单一，且28S和18S条带的亮度比接近2∶1。核酸蛋白仪检测结果显示样品的A260/A280在1.8~2.0之间，且A260/A230均大于2.0，说明所提取的RNA完整性好、纯度高，可用于后续cDNA的合成。以党参cDNA为模板，扩增得到1800bp左右的片段，电泳结果（图1-3）表明，扩增产物与预期目的片段大小一致且条带单一，可用于后续TA克隆实验。图1-2党参根总RNA电泳分析图1-3Cp1-SST基因PCR电泳分析(MK:5000Marker；1：扩增的Cp1-SST片段)1.3.2pHBT-1-SST-GFP重组载体的构建通过设计无缝克隆引物将1-SST基因克隆至pHBT-GFP-NOS载体上，获得1-SST-GFP植物瞬时表达融合载体。以培养过夜的菌落为模板进行PCR反应，所得条带亮且单一（图1-4），与目的片段大小一致，可用于质粒的提龋对提取的质粒进行双酶切鉴定，电泳分析结果如图1-5所示，说明pHBT-1-SST-GFP重
【参考文献】：
期刊论文
[1]茄子花药开裂相关基因SmDAD1启动子的克隆及功能分析[J]. 张少伟,袁超,牛义,汤青林,魏大勇,王永清,田时炳,杨洋,王志敏. 园艺学报. 2020(04)
[2]中间锦鸡儿CiNAC038启动子的克隆及对激素响应分析[J]. 红格日其其格,王燕飞,高仙灵,庞彩霞,尚晓蕊,李国婧,王瑞刚. 生物技术通报. 2020(07)
[3]马铃薯StMYB44基因对蔗糖的响应[J]. 谢海娟,蒲秀琴,叶广继,王舰,杨永智. 西北植物学报. 2020(02)
[4]甘蓝型油菜启动子pBnaC05g31880D的克隆与功能分析[J]. 华兆晖,范世航,李俊. 江苏农业科学. 2020(02)
[5]小叶杨TMM基因启动子克隆及表达模式分析[J]. 乐丽娜,滕青云,宋冰倩,匡华琳,陈英. 分子植物育种. 2020(01)
[6]小麦灌浆相关基因TaGIF1的克隆及表达分析[J]. 田小萍,王光浩,张宏,吉万全. 麦类作物学报. 2020(01)
[7]荠菜TPD1基因启动子与GUS基因表达载体的构建及拟南芥遗传转化[J]. 何金花,杨正修,姜路华,方磊,赵燕. 江苏农业科学. 2019(24)
[8]大豆中3个Dof转录因子的生物信息学及表达分析[J]. 翟莹,邱爽,张军,刘春雨,赵艳,李珊珊,张梅娟,邱增城,任巍巍. 华北农学报. 2019(06)
[9]巴戟天MoDXR基因及其启动子的克隆与分析[J]. 谢德金,叶友杰,杨德明,张娅欣,何天友,陈礼光,郑郁善. 药学学报. 2020(02)
[10]苹果NLP（Nin-Like Protein）转录因子基因家族全基因组鉴定及表达模式分析[J]. 王寻,陈西霞,李宏亮,张富军,赵先炎,韩月彭,王小非,郝玉金. 中国农业科学. 2019(23)
博士论文
[1]陆地棉GhWRKY27/42/91基因的克隆和功能验证[D]. 顾丽姣.中国农业科学院 2019
[2]拟南芥AtSUC4与AtPsaL的叶绿体定位机制的研究[D]. 杨紫薇.华南农业大学 2017
[3]拟南芥ERF74对非生物胁迫响应机制的研究[D]. 姚远.华南农业大学 2016
[4]小麦族植物果聚糖合成酶基因克隆及功能验证[D]. 高翔.中国农业科学院 2010
[5]辣椒WRKY转录因子cDNA的分离与功能鉴定[D]. 王育娜.福建农林大学 2008
硕士论文
[1]马铃薯StCRK1和StCRK2亚细胞定位及其互作蛋白的初步筛选[D]. 王双.内蒙古农业大学 2019
[2]潞党参药材商品等级及质量标准研究[D]. 张沙沙.山西医科大学 2019
[3]蔗糖—果糖基转移酶SST基因转入甜菜产生果聚糖的研究[D]. 梁文洁.石河子大学 2017
[4]党参挥发性成分分析及特殊香气研究[D]. 郭琼琼.山西医科大学 2016
[5]不同来源党参成分含量测定及党参HPLC特征图谱研究[D]. 关琳静.山西医科大学 2015
[6]潞党参与常用商品党参质量比较研究及潞党参质量标准制订[D]. 赵江燕.山西医科大学 2014
[7]棕色棉纤维原花青素转运蛋白基因GhTT12的克隆与表达分析[D]. 吴楠.安徽农业大学 2014
[8]转蔗糖：蔗糖-1-果糖基转移酶基因甘蔗的抗旱性研究[D]. 武媛丽.海南大学 2011
本文编号：3360488
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